一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒及方法技术

技术编号:19987112 阅读:24 留言:0更新日期:2019-01-05 09:54
本发明专利技术公开了一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒及方法。本发明专利技术的草海桐离体快速繁殖的培养基套盒,包括草海桐丛生芽诱导培养基、体细胞胚和不定芽诱导培养基、体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基、草海桐生根诱导培养基和用作草海桐组培苗移栽基质的河沙;并且还建立了利用该套盒的高效的草海桐组培苗快繁技术体系。为保护、开发和利用草海桐资源提供基础并填补草海桐在组织培养快繁技术方面的空白。

A Kit of Culture Medium and Method for Rapid Propagation in Vitro of Paulownia tomentosa

The invention discloses a culture medium box and a method for rapid propagation of Alnus fordii in vitro. The culture medium box for rapid propagation in vitro of Paulownia tomentosa includes cluster bud induction culture medium, somatic embryo and adventitious bud induction culture medium, somatic embryo and adventitious bud proliferation and elongation culture medium, rooting induction culture medium of Paulownia tomentosa and river sand used as tissue culture seedling transplanting medium of Paulownia tomentosa; and an efficient tissue culture seedling rapid propagation of Paulownia tomentosa using the box is also established. Technical system. To provide the basis for protecting, developing and utilizing the resources of Paulownia tomentosa and fill in the blank of tissue culture and rapid propagation technology of Paulownia tomentosa.

【技术实现步骤摘要】
一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒及方法
本专利技术属于植物组织培养
,具体涉及一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒及方法。
技术介绍
草海桐(Scaevolataccada)为草海桐科(Goodeniaceae)草海桐属(Scaevola)直立或铺散灌木的半红树植物。全科有11个属,400个种,几乎全部起源以及现存物种大都集中在澳大利亚,仅草海桐属广布于全世界。草海桐属有130个种,分布在澳大利亚以外的仅有40个种,大多零散地分布在热带海岛地区。我国南部沿海有2个种,分别是草海桐和海南草海桐(ScaevolahainanensisHance),主要分布于台湾、福建、广东、广西和海南等地开阔的海边沙地或海岸的峭壁上。草海桐作为热带以及亚热带海岸灌木群落的优势种,可在不同盐浓度的环境中通过调整自身在时间以及空间上的生理学的反应以保持较强二氧化碳平衡,从而表现出显著的耐盐碱性,被广泛种植于沿海滩涂中作为防护林的重要组成部分起到防风固沙的作用。草海桐的花色艳丽,花期较长,枝型优美,具有较高的园艺观赏价值,草海桐等草海桐属植物在澳大利亚等国家已经成为主要的观赏性园艺植物。在美国以及欧洲,草海桐属植物常常被用来编制成手提花篮,或者种植于阳台窗沿以及花园中作为观赏绿植。草海桐还具有较高的药用价值。草海桐叶片可以助消化、祛风、抗肿瘤、抗炎症,果实可以用于避孕,根可以治疗腹泻;其叶片和树皮煮出的汁可以治疗刀伤,动物咬伤,白内障,鳞状皮肤,癣、胃病、改善眼部红肿疼痛等功能。目前,草海桐的主要繁殖方式是种子繁殖与扦插繁殖,未见有通过植物组织培养手段进行来实现其繁殖的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒及方法。本专利技术以草海桐嫩茎段为试验材料,通过研究不同浓度、种类的植物生长调节剂及其组合对草海桐茎段无菌体系的建立及其丛生芽诱导的影响、草海桐叶片诱导体细胞胚胎发生与不定芽的诱导、体细胞胚与不定芽的增殖及其伸长以及不定芽生根的影响,建立了高效的草海桐组培苗快繁技术体系。为保护、开发和利用草海桐资源提供基础并填补草海桐在组织培养快繁技术方面的空白。为实现上述目的,本专利技术提供了一种草海桐丛生芽诱导培养基,其为MS培养基添加1.0~2.0mg/LBA、0.1~0.3mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。优选,所述的草海桐丛生芽诱导培养基,其为MS培养基添加2.0mg/LBA、0.1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。本专利技术还提供了一种草海桐体细胞胚和不定芽诱导培养基,其为MS培养基添加1.5~3.0mg/LBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。优选,所述的草海桐体细胞胚和不定芽诱导培养基,其为MS培养基添加3.0mg/LBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。本专利技术还提供了一种草海桐体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基,其为MS培养基添加0.75mg/LBA、0.25mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0;或为MS培养基添加1.0mg/LBA、0.1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。本专利技术还提供了一种草海桐生根诱导培养基,其为1/2MS培养基添加2.5~3.5mg/LIBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0;或为1/2MS培养基添加1.0mg/LIBA、1.0mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。为实现上述目的,本专利技术还提供一种草海桐离体快速繁殖的培养基套盒,包括:所述的草海桐丛生芽诱导培养基、体细胞胚和不定芽诱导培养基、体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基和草海桐生根诱导培养基。优选,所述的草海桐离体快速繁殖的培养基套盒还包括用作草海桐组培苗移栽基质的河沙。本专利技术所述的培养基套盒中,各培养基互相配合,各培养基中的植物生长素种类及含量很好地配合了草海桐植株的具体生长需要,显著提高了草海桐的繁殖倍率、生根率以及移栽成活率。为实现上述目的,本专利技术还提供一种草海桐离体快速繁殖方法,其包括以下步骤:(1)取草海桐健康枝条的茎段,剪去多余的叶片,取长1.5~3cm并带有2个侧芽的茎段为外植体;(2)在无菌条件下,将外植体消毒后接种于所述的丛生芽诱导培养基上培养,获得无菌丛生芽;(3)取无菌芽的叶接种于所述的体细胞胚和不定芽诱导培养基上培养,获得体细胞胚与不定芽;(4)将体细胞胚与不定芽分别接种于所述的体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基上培养,获得体细胞胚再生芽和伸长的不定芽;(5)将体细胞胚再生芽和伸长的不定芽接种于所述的生根诱导培养基上培养生根,获得草海桐组培苗;(6)取出草海桐组培苗,将其根部的培养基清洗干净,移栽于所述的组培苗移栽基质上。优选,所述的方法中,步骤(1)~(5)中的培养条件均为:25±1℃、光照时间12h光照/12h黑暗、光照强度1500~2000lx。与现有技术相比,本专利技术的技术方案具有以下有益效果:1、用于无菌体系建立的丛生芽诱导培养基中,采用带腋芽的茎段为外植体,接种于丛生芽诱导培养基上,诱导了茎段腋芽的萌发与大量丛生芽的形成,从而建立了草海桐的无菌体系。2、用于体细胞胚与不定芽诱导的体细胞胚和不定芽诱导培养基中,切取形成的无菌丛生芽体的嫩叶为外植体,以MS基本培养基,添加不同质量浓度的2,4-D、BA、TDZ以及0.25~0.75mg/LBA与0.1~0.75mg/LNAA配合使用,以体细胞胚或不定芽诱导率、平均体细胞胚数、平均不定芽数以及平均体细胞胚与不定芽总数为指标,筛选了适宜的体细胞胚与不定芽诱导配方,首次发现了草海桐叶片同时形成体细胞胚与不定芽的现象。以30d为培养周期,体细胞胚或不定芽诱导率、平均体细胞胚数、平均不定芽数以及平均体细胞胚与不定芽总数分别可达98.3%、33.4、8.8与48.1。所形成的体细胞胚与不定芽长势良好。3、体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基中,切取发生体细胞胚与不定芽叶片为外植体,以MS为基本培养基,添加0.1~1.5mg/LNAA、0.1~1.5mg/LBA、0.1~1.5mg/LKT以及0.1~1.0mg/LBA与0.1~1.0mg/LNAA组合,以体细胞胚与不定芽增殖系数,平均株高为指标,筛选了草海桐体细胞胚与不定芽增殖及其伸长的适宜配方。以40d为培养周期,体细胞胚与不定芽增殖系数,平均株高最高分别可达3.4与5.0cm,所得芽体长势良好。4、将所得的伸长且生长健壮的芽体为外植体,以1/2MS为基本培养基,接种于含有0.1~3.5mg/LIBA、NAA、IAA以及0.1~1.0mg/LIBA与0.2~1.0mg/LNAA组合的培养基内进行生根培养,以生根率与平均生根数为指标,以30d为培养周期,生根率与平均生根数分别可达99.0%与20.6。所得组培苗根细长密集,植株长势良好。5、将所得的草海桐组培苗,经过炼苗处理后,移栽到不同的基质中。具体基质为:按照3/4黄泥+1/4泥炭土、100%河沙、1/本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种草海桐丛生芽诱导培养基,其特征在于,其为MS培养基添加1.0~2.0mg/L BA、0.1~0.3mg/L NAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。

【技术特征摘要】
1.一种草海桐丛生芽诱导培养基,其特征在于,其为MS培养基添加1.0~2.0mg/LBA、0.1~0.3mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。2.根据权利要求1所述的草海桐丛生芽诱导培养基,其特征在于,其为MS培养基添加2.0mg/LBA、0.1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。3.一种草海桐体细胞胚和不定芽诱导培养基,其特征在于,其为MS培养基添加1.5~3.0mg/LBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。4.根据权利要求3所述的草海桐体细胞胚和不定芽诱导培养基,其特征在于,其为MS培养基添加3.0mg/LBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。5.一种草海桐体细胞胚与不定芽的增殖和伸长培养基,其特征在于,其为MS培养基添加0.75mg/LBA、0.25mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0;或为MS培养基添加1.0mg/LBA、0.1mg/LNAA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0。6.一种草海桐生根诱导培养基,其特征在于,其为1/2MS培养基添加2.5~3.5mg/LIBA、25~35g/L蔗糖和6.5~7.5g/L琼脂,pH5.8~6.0;或为1/2MS培养基添加...

【专利技术属性】
技术研发人员:梁韩枝马国华曾宋君吴坤林郑枫张新华熊玉萍任海简曙光张城杨松
申请(专利权)人:中国科学院华南植物园
类型:发明
国别省市:广东,44

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