一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法技术

技术编号:19932151 阅读:46 留言:0更新日期:2018-12-29 03:48
本发明专利技术提供一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,涉及PCB生物学效应技术领域。具体包括低级生物培养基的制备、低级生物的培养、高级生物培养基的制备和PCB经低级生物到高级生物的食物链传递后的生物学效应实验等步骤,其中生物学效应实验包括体长的测定、子代数量的测定、线虫寿命的测定和生殖细胞凋亡数量的测定等步骤。本发明专利技术采用摄有PCB的低级生物通过食物链对高级生物进行培养,培养后根据多个生物学终点测定PCB基于食物链水平对高级生物产生的生物学效应,并且通过排除其他外界因素对实验结果的干扰和影响,使得测定结果准确度高,可靠性强。

【技术实现步骤摘要】
一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法
本专利技术涉及PCB生物学效应
,具体涉及一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法。
技术介绍
多氯联苯(PCB)是一类人工合成的具有良好物理化学性质的氯代芳香烃类有机污染物,PCB具有高毒性,在环境介质中的高持留性以及在生物体中的高蓄积性,对神经、生殖、免疫系统的病变及致癌都具有一定的诱导作用。PCB极难溶于水而易溶于脂肪和有机溶剂,如二甲基亚砜(DMSO),PCB极难分解,因而能够在生物体脂肪中大量富集。但由于目前仍有PCB作为副产品进入环境中且其化学性质稳定,直至今天PCB仍广泛存在于各种环境介质中,并可通过不同生物的作用进入食物网,从而对各类生物及人类产生各种影响。然而,PCB在食物链基础上的作用尚不明确,目前也没有具体的方法测定PCB通过食物链对生物产生的影响,为此我们提出一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法。
技术实现思路
针对现有技术不足,本专利技术提供一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,本专利技术采用摄有PCB的低级生物通过食物链对高级生物进行培养,培养后根据多个生物学终点测定PCB基于食物链水平对高级生物产生的生物学效应,并且通过排除其他外界因素对实验结果的干扰和影响,使得测定结果准确度高,可靠性强。为实现以上目的,本专利技术的技术方案通过以下技术方案予以实现:一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,包括以下步骤:(1)制备第一低级生物培养基,并向制备的第一低级生物培养基中加入低级生物进行培养,得到低级生物菌液备用;(2)制备第二低级生物培养基,将制备的第二低级生物培养基进行分装,并向多个分装的低级生物培养基中摄入不同量的PCB,混合均匀后得到不同浓度的含PCB低级生物培养基备用;(3)向上述步骤(2)中的含PCB低级生物培养基内加入上述步骤(1)中的低级生物菌液进行培养,培养后取出培养的菌液进行离心,弃去上清液后加入去离子水离心,再将高度浓缩的菌液沉淀并重新溶解于适量去离子水中,得到浓缩菌液备用;(4)制备高级生物培养基,凝固后得到固体高级生物培养基,取上述步骤(3)中的浓缩菌液滴入固体高级生物培养基的表面,并进行均匀涂布,使培养基表面均匀布满摄有PCB的低级生物,在超净工作台上静置并进行暴露处理,使其蒸发多余水分,得到铺满低级生物的培养基菌坪备用;(5)向上述步骤(4)中的培养基菌坪上接入等量的高级生物进行不同暴露时间的培养,从而进行食物链传递实验,利用检测增加不同时间高级生物的体长、亲本产生的子代数量、亲本自身的寿命和亲本自身生殖细胞凋亡数量等生物学终点,来测定不同浓度的PCB基于食物链水平对高级生物产生的生物学效应。优选的,步骤(1)中的低级生物为同时期生长状况相同的低级生物,且培养时培养基环境适宜不影响低级生物的正常生长。优选的,步骤(1)中的低级生物菌液制得后进行高压蒸汽灭菌,冷却至室温后放入冰箱内进行储存。优选的,步骤(3)中将培养的菌液离心后加入去离子水再进行离心,重复此步骤三次得到纯净的菌液。优选的,步骤(5)中的高级生物为同时期生长状况相同的高级生物,且培养时培养基环境适宜不影响高级生物的正常生长。优选的,步骤(5)结束后,加设一组对比实验,检测实验中存在的其他物质对实验的干扰,排除干扰因素。本专利技术提供一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,与现有技术相比优点在于:(1)本专利技术通过在培养低级生物时分别摄入不同浓度的PCB,再将摄有不同浓度PCB的低级生物通过食物链分别对高级生物进行培养,培养后根据高级生物的体长、子代数量、自身的寿命和自身生殖细胞凋亡数量等生物学终点,来测定不同浓度的PCB基于食物链水平对高级生物产生的生物学效应,测定结果准确度高,可靠性强;(2)本专利技术通过采用同时期生长状况相同的低级和高级生物作为材料进行实验,并且测定后加设对比实验,有效排除了其他外界因素对实验结果的干扰和影响,提高了测定结果的精准度和可信度。附图说明图1为PCB食物链暴露处理后线虫的子代数量对比图;图2为PCB食物链暴露处理后线虫的存活率对比图;图3为PCB食物链暴露处理后线虫生殖腺单臂凋亡细胞数对比图;图4为DMSO食物链暴露处理后线虫生殖腺单臂凋亡细胞数对比图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面结合本专利技术实施例对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本专利技术一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本专利技术保护的范围。实施例1:一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,现选取大肠杆菌和秀丽隐杆线虫所组成的食物链为材料进行实验,包括以下步骤:(1)向900ml去离子水中加入16g胰化蛋白胨,10g酵母提取物及5gNacl,溶解后用NaOH溶液将PH调至7.0,再用去离子水定容至1L得到大肠杆菌培养基,用同样的方法再制备一个大肠杆菌培养基,在高压下蒸汽灭菌20min,冷却至室温后放入冰箱待用;(2)将上述步骤(1)中的第一大肠杆菌培养基以每10ml的体积分别放入多个三角烧瓶内,挑取同时期生长状况相同的大肠杆菌,并等数量放入不同的三角烧瓶中,再在37℃、200r/min的条件下震荡培养12h得到大肠杆菌菌液备用;(3)将上述步骤(2)中的第二大肠杆菌培养基以每10ml的体积加入到6个培养皿内,并向其中分别加入不同量的溶解于DMSO的PCB,混合后得到含有不同浓度PCB的大肠杆菌培养液(见表1),用移液枪向6个培养皿中分别加入0.2mL上述步骤(2)中的大肠杆菌菌液,并在37℃、200r/min的条件下震荡培养12h,取出培养的菌液在4℃,5000r/min的条件下离心5min,弃去上清液后加入去离子水离心,重复此步骤三次,最后将纯净的高度浓缩的菌液沉淀重新溶解于1mL去离子水中,得到浓缩菌液备用;表1:大肠杆菌培养基中PCB浓度(4)向锥形瓶中加入3gNaCl、20g琼脂、2.5g蛋白胨,加入去离子水定容至1L得到秀丽隐杆线虫培养基,利用容积为1L的三角烧瓶进行分装,透气膜封口并标记后放入高压蒸汽灭菌锅中,在121℃的条件下灭菌20min,灭菌结束后将三角烧瓶移入超净工作台内进行冷却,待培养基冷却至大约60℃时,向锥形瓶中加入MgSO4(1mol/L,1mL)、K3PO4(pH6.0,25mL)、溶解于无水乙醇的胆固醇溶液(5mg/mL,1mL)以及1%制霉素(溶于70%乙醇,1mL)四种试剂,冷却至适宜温度后加入:CaCl2(1mol/L,1mL)以及链霉素(水溶,2.5%,7.5mL),摇匀并待其凝固后,得到固体线虫培养基,取0.1mL上述步骤(3)中的浓缩菌液滴入固体线虫培养基表面,均匀涂布后,使培养基表面均匀布满摄有PCB的大肠杆菌,在超净工作台上静置30到60min并进行暴露处理,使其蒸发多余水分,得到铺满大肠杆菌的线虫培养基菌坪备用;(5)向上述步骤(4)中的线虫培养基菌坪上接入等量的同时期生长状况相同的线虫,并进行不同暴露时间的培养,从而进行食物链传递实验,利用检测不同暴露时间线虫的体长、测定亲本暴露后产生的子代数量、测定亲本暴露后自身的寿命本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备第一低级生物培养基,并向制备的第一低级生物培养基中加入低级生物进行培养,得到低级生物菌液备用;(2)制备第二低级生物培养基,将制备的第二低级生物培养基进行分装,并向多个分装的低级生物培养基中摄入不同量的PCB,混合均匀后得到不同浓度的含PCB低级生物培养基备用;(3)向上述步骤(2)中的含PCB低级生物培养基内加入上述步骤(1)中的低级生物菌液进行培养,培养后取出培养的菌液进行离心,弃去上清液后加入去离子水离心,再将高度浓缩的菌液沉淀并重新溶解于去离子水中,得到浓缩菌液备用;(4)制备高级生物培养基,凝固后得到固体高级生物培养基,取上述步骤(3)中的浓缩菌液滴入固体高级生物培养基的表面,并进行均匀涂布,使培养基表面均匀布满摄有PCB的低级生物,在超净工作台上静置并进行暴露处理,使其蒸发多余水分,得到铺满低级生物的培养基菌坪备用;(5)向上述步骤(4)中的培养基菌坪上接入等量的高级生物进行不同暴露时间的培养,从而进行食物链传递实验,利用检测增加不同时间高级生物的体长、亲本产生的子代数量、亲本自身的寿命和亲本自身生殖细胞凋亡数量等生物学终点,来测定不同浓度的PCB基于食物链水平对高级生物产生的生物学效应。...

【技术特征摘要】
1.一种基于食物链水平测定PCB生物学效应的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备第一低级生物培养基,并向制备的第一低级生物培养基中加入低级生物进行培养,得到低级生物菌液备用;(2)制备第二低级生物培养基,将制备的第二低级生物培养基进行分装,并向多个分装的低级生物培养基中摄入不同量的PCB,混合均匀后得到不同浓度的含PCB低级生物培养基备用;(3)向上述步骤(2)中的含PCB低级生物培养基内加入上述步骤(1)中的低级生物菌液进行培养,培养后取出培养的菌液进行离心,弃去上清液后加入去离子水离心,再将高度浓缩的菌液沉淀并重新溶解于去离子水中,得到浓缩菌液备用;(4)制备高级生物培养基,凝固后得到固体高级生物培养基,取上述步骤(3)中的浓缩菌液滴入固体高级生物培养基的表面,并进行均匀涂布,使培养基表面均匀布满摄有PCB的低级生物,在超净工作台上静置并进行暴露处理,使其蒸发多余水分,得到铺满低级生物的培养基菌坪备用;(5)向上述步骤(4)中的培养基菌坪上接入等量的高级生物进行不同暴露时间的培养,从而进行食物链传递实验,利用检测增加不同时间高级生物的体长、亲本产生的子代数量、...

【专利技术属性】
技术研发人员:罗勋涂俊芳何梅
申请(专利权)人:淮南师范学院
类型:发明
国别省市:安徽,34

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