糖化血红蛋白的测定方法及糖化血红蛋白测定装置制造方法及图纸

技术编号:19877058 阅读:57 留言:0更新日期:2018-12-22 17:28
本发明专利技术的目的在于,在利用阳离子交换色谱测定含有异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的血液样本的情况下,排除该异常血红蛋白带来的影响,得到反映提供血液样本的受试者的症状的SA1c测定结果。本发明专利技术通过SA1c的比例(%)的测定方法来解决上述课题,该方法的特征在于,在鉴定来自异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的峰的情况下,计算出该峰的面积,使用该计算结果测定校正后的SA1c的比例(%)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖化血红蛋白的测定方法及糖化血红蛋白测定装置
本专利技术涉及通过液相色谱法测定血液样本中的糖化血红蛋白的方法和装置,具体涉及对于可能混合存在含有异常血红蛋白的血液样本的血液样本组能够实施作为糖尿病诊断指标的糖化血红蛋白的测定的糖化血红蛋白的测定方法和测定装置。
技术介绍
血红蛋白具有由2个α链及2个β链构成的α2β2结构,除了占总血红蛋白约97%的血红蛋白A以外,由血红蛋白F、血红蛋白A2构成,所述血红蛋白F具有由2个α链及2个γ链构成的α2γ2结构、且占总血红蛋白的不足1%,所述血红蛋白A2具有由2个α链及2个δ链构成的α2δ2结构、且占总血红蛋白的不足1%。血红蛋白与存在于血中的糖(血糖)、其代谢物非酶促地结合(糖化)而形成糖化血红蛋白。占总血红蛋白的大半的血红蛋白A糖化而成的血红蛋白A1严格来说并不是糖化血红蛋白的全部,但在临床上多作为与糖化血红蛋白相同含义处理。血红蛋白A1可以进一步分离为A1a、A1b、A1c,不受饮食等引起的临时性血糖值上升的影响、反映过去2~3个月的血糖值变化而使浓度发生变化的、所谓的稳定型的血红蛋白A1c(以下,有时简称为“sA1c”)相对于总血红蛋白的比例(以下,有时简称为“A1c%”)被广泛用作糖尿病的诊断、糖尿病患者的随访指标。糖化血红蛋白的测定以往通过液相色谱法的方法来实施。对于利用液相色谱法进行的糖化血红蛋白的测定而言,大致分为以下方法:使用固定有离子交换物质的填充材料,利用电荷不同将各种血红蛋白分级进行测定的利用阳离子交换色谱的测定方法;使用固定有对糖的亲和性高的氨基苯硼酸基的填充材料的基于亲和色谱的测定方法。基于亲和色谱的测定方法利用对于糖链部分的亲和性,因此可测定包含sA1c的各种糖化血红蛋白(非专利文献2),在该情况下也利用糖化血红蛋白相对于总血红蛋白的比例。另一方面,在基于阳离子交换色谱的测定方法中,可以在分离各种血红蛋白的基础上,仅测定sA1c来计算相对于总血红蛋白的比例A1c%。血红蛋白中也存在因血红蛋白基因发生突变而产生的血红蛋白E、血红蛋白D、血红蛋白S、血红蛋白C等各种异常血红蛋白。而且,近年来报告了以下情况(非专利文献1~3):虽然稀少,但在应实施糖化血红蛋白测定的血液样本含有上述基因突变的结果产生的各种异常血红蛋白的情况下,在基于亲和色谱的测定方法中,可以得到反映提供血液样本的受试者的症状的测定结果,另一方面,在基于阳离子色谱的测定方法中,sA1c%测定值显示出很低的值,有时难以反映提供血液样本的受试者的症状。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开平9-264889号公报非专利文献非专利文献1:R.R.LittleandW.L.Roberts,JDiabetesSciTechnol,Vol3(3),446-451(2009).非专利文献2:R.R.Littleetal.,ClinChem,Vol54(8),1277-1282(2008).非专利文献3:L.Bryetal.,ClinChem,Vol47(2),153-163(2001).
技术实现思路
专利技术要解决的课题在应实施测定的血液样本含有异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的情况下,通过阳离子交换色谱法实施sA1c的测定时,这些异常血红蛋白成分的一部分与血红蛋白A的非糖化成分A0同时或在其后洗脱。在该情况下,即使将与其对应的显著峰值从A1c%的计算中排除,A1c%也显示出很低的值,另一方面可以认为,在基于亲和色谱的糖化血红蛋白的测定中,糖化血红蛋白占总血红蛋白的值不受影响。因此,本专利技术在于,在通过阳离子交换色谱对含有已知全世界保有者很多的异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的血液样本进行测定的情况下,排除这些异常血红蛋白带来的影响,得到反映提供血液样本的受试者的症状的A1c%测定结果。解决课题的方法本专利技术人等发现,将含有异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的血液样本供于阳离子交换色谱而获得色谱图,进行分析,结果是出现了健康人的色谱图中没有的峰。进一步发现,对基于该峰的面积而校正的A1c%进行计算时,该校正的结果与通过不容易受到异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的影响的亲和色谱得到的测定结果良好相关,从而完成了本专利技术。即,本专利技术是为了解决上述课题而进行深入研究,从而完成的。[1]一种稳定型糖化血红蛋白sA1c的测定方法,该方法包括:(1)在使血液样本溶血后供于阳离子交换色谱,从其它血红蛋白中分离并洗脱sA1c,获得显示出各血红蛋白分级的洗脱的色谱图的工序;(2)根据获得的色谱图鉴定sA1c的峰,对该峰面积进行计算的工序;(3)根据获得的色谱图鉴定除sA1c以外的血红蛋白的峰,对这些峰面积进行计算的工序;以及(4)对sA1c的峰面积占总血红蛋白的峰面积的比例(%)进行计算的工序;(5)根据在血红蛋白A的非糖化峰之后出现的峰鉴定异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰的工序;(6)使用鉴定后的异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰面积等推测其糖化峰的面积的工序,其中,使用该推测计算结果对所述工序4中的sA1c的峰面积的比例(%)进行校正。[2]根据[1]中记载的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的峰时,在该异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的糖化峰与血红蛋白A的非糖化峰A0重合而洗脱,且sA1c相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积之和的比例等于该异常血红蛋白的糖化峰面积相对于其它峰面积之和的比例的前提下,校正sA1c的峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%)。[3]根据[1]中记载的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白C的峰时,在该异常血红蛋白C的糖化峰在血红蛋白A的非糖化峰A0之后洗脱的前提下,校正sA1c的峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%)。[4]根据[1]或[2]中记载的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的峰时,在该异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的糖化峰与血红蛋白A的非糖化峰A0重合而洗脱,且sA1c相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积之和的比例等于该异常血红蛋白的糖化峰面积相对于其它峰面积之和的比例的前提下,按照下式校正sA1c峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%)。[数学式1]A1c%=100sA1c/(A0+α)=100X1c/(X0+β+X1c)A’=A0+X1cX1c=[(A’+α-sA1c)-√{(A’+α-sA1c)2-4sA1c(X0+β)}]/2这里,A’是A0和与其同时洗脱的异常血红蛋白的糖化峰面积之和,表示色谱图上观测为A0的峰面积,sA1c、A0分别表示血红蛋白A的糖化、非糖化峰面积,X1c及X0分别表示与A0同时洗脱的异常血红蛋白的糖化峰面积、在A0之后洗脱的异常血红蛋白的非糖化峰面积,而且α=A1a+A1b+LA1c+sA1c,β为从在A0之后洗脱的峰总面积中除去X0而得到的值。[5]根据[1]或[3]所述的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白C的峰时,在该异常血红蛋白C的糖化峰在血红蛋白A的非糖化峰A0之后洗脱的前提下,按照下式校正sA1c的峰面积相对于与本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种稳定型糖化血红蛋白sA1c的测定方法,该方法包括:(1)在使血液样本溶血后供于阳离子交换色谱,从其它血红蛋白中分离并洗脱sA1c,获得显示出各血红蛋白分级的洗脱的色谱图的工序;(2)根据获得的色谱图鉴定sA1c的峰,对该峰面积进行计算的工序;(3)根据获得的色谱图鉴定除sA1c以外的血红蛋白的峰,对这些峰面积进行计算的工序;以及(4)对sA1c的峰面积占总血红蛋白的峰面积的比例(%)进行计算的工序;(5)根据在血红蛋白A的非糖化峰之后出现的峰鉴定异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰的工序;(6)使用鉴定后的异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰面积等推测其糖化峰的面积的工序,其中,使用该推测计算结果对所述工序4中的sA1c的峰面积的比例(%)进行校正。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.11 JP 2016-0951911.一种稳定型糖化血红蛋白sA1c的测定方法,该方法包括:(1)在使血液样本溶血后供于阳离子交换色谱,从其它血红蛋白中分离并洗脱sA1c,获得显示出各血红蛋白分级的洗脱的色谱图的工序;(2)根据获得的色谱图鉴定sA1c的峰,对该峰面积进行计算的工序;(3)根据获得的色谱图鉴定除sA1c以外的血红蛋白的峰,对这些峰面积进行计算的工序;以及(4)对sA1c的峰面积占总血红蛋白的峰面积的比例(%)进行计算的工序;(5)根据在血红蛋白A的非糖化峰之后出现的峰鉴定异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰的工序;(6)使用鉴定后的异常血红蛋白D、异常血红蛋白S或异常血红蛋白C的非糖化峰面积等推测其糖化峰的面积的工序,其中,使用该推测计算结果对所述工序4中的sA1c的峰面积的比例(%)进行校正。2.根据权利要求1所述的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的峰时,在该异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的糖化峰与血红蛋白A的非糖化峰A0重合而洗脱,且sA1c相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积之和的比例等于该异常血红蛋白的糖化峰面积相对于其它峰面积之和的比例的前提下,校正sA1c的峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%)。3.根据权利要求1所述的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白C的峰时,在该异常血红蛋白C的糖化峰在血红蛋白A的非糖化峰A0之后洗脱的前提下,校正sA1c的峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%)。4.根据权利要求1或2所述的方法,其中,在所述工序5中,在鉴定异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的峰时,在该异常血红蛋白D或异常血红蛋白S的糖化峰与血红蛋白A的非糖化峰A0重合而洗脱、且sA1c相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积之和的比例等于该异常血红蛋白的糖化峰面积相对于其它峰面积之和的比例的前提下,按照下式校正sA1c峰面积相对于与血红蛋白A相关的全部峰面积的比例(%),A1c%=100sA1c/(A0+α)=100X1c/(X0+β+X1c)A’=A0+X1cX1c=[(A’+α-sA1c)-√{(A’+α-sA1c)2-4sA1c(X0+β)}]/2式中,A’是A0和与其同时洗脱的异常血红蛋白的糖化峰面积之和,表示色谱图上观测为A0的峰面积,sA1c、A0分别表示血红蛋白A...

【专利技术属性】
技术研发人员:长谷川幸行
申请(专利权)人:东曹株式会社
类型:发明
国别省市:日本,JP

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1