一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种与胰腺癌癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用，该标志物为let‑7b‑5p,miR‑192‑5p,miR‑19a‑3p,miR‑19b‑3p,miR‑223‑3p和miR‑25‑3p中的一种或多种。血清miRNA作为新型的生物标志物，具有稳定性好、微创易获取，灵敏性和特异性高的特点。这类分子标志物的开发利用将为包括肿瘤在内的各种疾病的诊断以及进一步治疗提供新的方向。本研究将更有针对性的得出具有临床诊断潜能的胰腺癌血清miRNA标记物。研究证实了这组miRNA作为诊断胰腺癌的无创标记物的可靠性以及可重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用
本专利技术属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与胰腺癌癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物及其应用。
技术介绍
胰腺癌(Pancreaticcancer,PC)是一种恶性程度很高、高度致死的消化道恶性肿瘤，其发病率和死亡率近年来明显上升。相比于其他恶性肿瘤，胰腺癌的诊断和治疗均很困难。目前，手术治疗仍是治疗胰腺癌的最有效方法，但是绝大部分患者疾病早期时并无症状，并在就诊时已处于中晚期，使得5年生存率小于10％。目前针对胰腺癌的分子和临床特征的研究不断深入，临床筛查和治疗方法也有长足进步，但是，这些方法或者过于依赖检测者经验，或者价格太高无法推广，或者检测灵敏度和特异性还有待加强。因此，迫切需要开发新的可靠的非侵入性早期诊断标记物，促进早期干预和治疗，延长病人的生存期。微小RNA(Microribonucleicacids，miRNAs)的发现是最近这些年来重大发现之一。成熟的miRNA是一类进化保守，长度在18-25个核苷酸的小非编码RNA分子。据研究，miRNA可在转录后水平调控机体1/3以上的基因，从而参与机体的众多生理病理过程。miRNA的表达具有时间特异性以及组织特异性。同时，一些miRNA能够参与特定的生理病理以及特异的疾病过程。因此，某些特异的miRNA可以作为某些生理病理以及某些疾病例如肿瘤等疾病的标志物。2008年，Mitchell在外周血中检测到游离的miRNA，发现其能够稳定存在于外周血，并且能够作为诊断肿瘤的无创标志物。这一研究发现拉开了全球众多研究者开始探索循环miRNA作为无创标志物的大幕。现有研究证实了循环miRNA在包括肺癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌中的潜在诊断价值。目前对于循环miRNA在胰腺癌中的诊断价值研究并不充分，并且由于研究方法及纳入人群的差异，各研究结果并不完全一致。因此，本研究利用ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及基于qRT-PCR的相对定量法，通过对大样本的胰腺癌血清的研究，旨在寻找对胰腺癌具有潜在诊断价值的血清miRNA。并对这些miRNA在胰腺癌组织中以及外周血清外泌体中的表达进行验证，以进一步明确其与胰腺癌的关系。若根据这类miRNA设计针对于胰腺癌的诊断试剂盒，将会推动我国胰腺癌的诊治水平，也为将来对胰腺癌的进一步研究提供思路。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物。本专利技术的另一目的在于提供上述血清miRNA标志物及其引物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒以及在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。本专利技术的又一目的在于提供用于胰腺癌辅助诊断和治疗的试剂盒及药物。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，该标志物为let-7b-5p(ugagguaguagguugugugguu),miR-192-5p(cugaccuaugaauugacagcc),miR-19a-3p(ugugcaaaucuaugcaaaacuga),miR-19b-3p(ugugcaaauccaugcaaaacuga),miR-223-3p(ugucaguuugucaaauacccca)和miR-25-3p(cauugcacuugucucggucuga)中的一种或多种。该血清miRNA标志物优选为let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中两种或两以上的组合，进一步优选为let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p六种miRNA所组成的组合。上述的血清miRNA标志物在辅助诊断胰腺癌中的应用。上述的血清miRNA标志物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒或治疗胰腺癌药物中的应用。一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物的引物，该引物包含let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血清miRNA中let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中两种或两以上miRNA的引物；进一步优选为包含血清miRNA中let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p六种miRNA的引物。上述的引物在辅助诊断胰腺癌或制备胰腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。一种胰腺癌辅助诊断试剂盒，该试剂盒中含有血清miRNA中let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为含有血清miRNA中let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中两种或两种以上miRNA的引物；进一步优选为含有血清miRNA中let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p六种miRNA的引物。该试剂盒中还包括PCR技术常用的试剂或/和免疫组化技术常用的试剂。该试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术所涉及的与胰腺癌诊断相关的血清miRNA标志物let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中的每种miRNA的序列均已公开，但是将各miRNA标志物进行组合作为胰腺癌辅助诊断标志物需要本领域技术人员付出创造性劳动。各miRNA标志物的扩增引物均可通过市场购买获得，本专利技术实施例中使用的血清miRNA标志物的引物为购自广州锐博公司所合成生产的特异性miRNA茎环RT-PCR引物。具体地说，本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)血清miRNA差异表达谱分析：分析胰腺癌和正常对照人群中差异表达的血清miRNA，并对差异表达miRNAs进行进一步大样本多阶段验证。(3)通过多阶段的验证，明确这些miRNA诊断胰腺癌的能力。(4)血清miRNA诊断试剂盒的研制：根据胰腺癌与正常人群血清中的差异表达miRNA开发miRNAs诊断试剂盒，实现对胰腺癌患者的无创辅助诊断。(4)分析这些miRNA在胰腺癌组织、动脉血清以及外泌体中的表达情况，揭示这些miRNA与胰腺癌的关系，为将来研制可能与这些miRNA相关的治疗胰腺癌的药物提供依据。本专利技术人以标准操作程序(SOP)采集符合标准的血液样本，系统收集完整的人口学资料、临床资料，并采用了ExiqonmiRNAqPCRpanel芯片以及qRT-PCR方法等。具体来说研究的实验方法主要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，其特征在于该标志物为let‑7b‑5p,miR‑192‑5p,miR‑19a‑3p,miR‑19b‑3p,miR‑223‑3p和miR‑25‑3p中的一种或多种。

【技术特征摘要】
1.一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物，其特征在于该标志物为let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的血清miRNA标志物，其特征在于该血清miRNA标志物为let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中两种或两以上的组合，优选为let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p六种miRNA所组成的组合。3.权利要求1或2所述的血清miRNA标志物在辅助诊断胰腺癌中的应用。4.权利要求1或2所述的血清miRNA标志物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒或制备治疗胰腺癌药物中的应用。5.一种与胰腺癌辅助诊断相关的血清miRNA标志物的引物，其特征在于该引物包含let-7b-5p,miR-192-5p,miR-19a-3p,miR-19b-3p,miR-223-3p和miR-25-3p中的一种或多种miRNA的引物；优选为包含血清let-7b-5p,miR-192-5p,miR...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗毅，朱伟，卫积书，周鑫，黄泽波，陆子鹏，邹璇，
申请(专利权)人：朱伟，
类型：发明
国别省市：江苏,32