用于位点特异性缀合之抗体和抗体片段制造技术

本发明专利技术涉及包含用于位点特异性缀合的取代的半胱氨酸的多肽、抗体和其抗原结合片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于位点特异性缀合之抗体和抗体片段
本专利技术关于经工程化以导入用于位点特异性缀合之氨基酸的抗体及其抗原结合片段。先前技术抗体已被缀合至多种细胞毒性药物，包括烷化DNA(例如双联霉素(duocarmycin)及卡利奇霉素(calicheamicin))、扰乱微管(例如类美坦素(maytansinoid)及耳抑素(auristatin))或结合DNA(例如蒽环(anthracycline))之小分子。一种包含缀合卡利奇霉素的人化抗CD33抗体的这类抗体-药物缀合物(antibody-drugconjugate,ADC)-MylotargTM(吉妥珠单抗奥唑米星(gemtuzumabozogamicin))，已经获准用于治疗急性骨髓性白血病。AdcetrisTM(布吐西单抗维多汀(brentuximabvedotin))是一种包含缀合耳抑素单甲基耳抑素E(monomethylauristatinE,MMAE)之抗CD30嵌合抗体的ADC，其已经核准用于治疗霍奇金氏淋巴瘤及退行性大细胞淋巴瘤。尽管ADC用于癌症治疗的前景看好，细胞毒性药物通常经由赖氨酸侧链来缀合抗体，或者通过将存在于抗体中之链间双硫键还原，以提供经活化之半胱氨酸氢硫基来缀合抗体。然而，此非特异性缀合之方式具有许多缺点。举例来说，药物缀合抗体赖氨酸残基受到抗体中有许多个可供缀合之赖氨酸残基(约30个)的事实影响而复杂化。由于药物对抗体比例(DAR)的理想数目远远较低(例如约4:1)，因此赖氨酸缀合通常产生非常异质的缀合特性。另外，许多赖氨酸位于CDR区的关键抗原结合位点，药物缀合可能导致抗体亲和性降低。另一方面，虽然硫醇媒介之缀合主要是以八个与绞链双硫键有关的半胱氨酸为目标，但仍难以预测及识别八个半胱氨酸中的哪四个能在不同制剂中一致地缀合。最近，游离半胱氨酸残基之基因工程已经使得位点特异性缀合能够利用基于硫醇之化学来进行。位点特异性ADC具有同质特性及定义良好的缀合位点，且显示有效的体外(invitro)细胞毒性及高度体内内(invivo)抗肿瘤活性。WO2013/093809揭示在特定位点包含氨基酸取代以导入用于缀合之半胱氨酸残基的工程化的抗体恒定区(Fc、Cγ、Cλ、Cκ)或其片段。数个在IgG重链及λ/κ轻链恒定区之Cys突变位点系经揭示。成功使用经导入之Cys残基于位点特异性缀合，有赖于选择适当位点的能力，其中Cys取代不改变蛋白结构或功能。另外，使用不同缀合位点导致不同特征，诸如ADC的生物稳定性或可缀合性。因此，利用位点特异性缀合策略来制备具有经定义之缀合位点及所欲之ADC特征的ADC将是高度有用的。
技术实现思路
本专利技术关于包含用于位点特异性缀合之经取代的半胱氨酸之多肽、抗体及彼之抗原结合片段。所属
中具有通常知识者将认可或使用不多于例行实验可确定本文所述之本专利技术的特定实施例之许多均等物。该等均等物意欲由下列实施例(E)涵盖。E1.一种多肽，其包含抗体重链恒定结构域，该恒定结构域在根据卡巴(Kabat)之EU指数编号的位置290上包含工程化的半胱氨酸残基。E2.如E1之多肽，其中该恒定结构域包含IgG重链CH2结构域。E3.如E2之多肽，其中该IgG系IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。E4.一种多肽，其包含抗体重链恒定结构域，当该恒定结构域与SEQIDNO:61比对时，该恒定结构域在对应SEQIDNO:61之残基60的位置上包含工程化的半胱氨酸残基。E5.如E4之多肽，其中该工程化的半胱氨酸残基系位于IgGCH2结构域之根据卡巴之EU指数编号的位置290上。E6.如E5之多肽，其中该IgG系IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。E7.如E1或E4之多肽，其中该恒定结构域包含IgA(例如IgA1或IgA2)重链CH2结构域。E8.如E1或E4之多肽，其中该恒定结构域包含IgD重链CH2结构域。E9.如E1或E4之多肽，其中该恒定结构域包含IgE重链CH2结构域。E10.如E1或E4之多肽，其中该恒定结构域包含IgM重链CH2结构域。E11.如E1至E10中任一项之多肽，其中该恒定结构域系人抗体恒定结构域。E12.如E1至E11中任一项之多肽，其中该恒定结构域在选自由根据卡巴之EU指数编号的118、246、249、265、267、270、276、278、283、292、293、294、300、302、303、314、315、318、320、332、333、334、336、345、347、354、355、358、360、362、370、373、375、376、378、380、382、386、388、390、392、393、401、404、411、413、414、416、418、419、421、428、431、432、437、438、439、443、444及其任何组合所组成之群组的位置上进一步包含工程化的半胱氨酸残基。E13.如E1至E12中任一项之多肽，其中该恒定结构域在选自由根据卡巴之EU指数编号的118、334、347、373、375、380、388、392、421、443及其任何组合所组成之群组的位置上进一步包含工程化的半胱氨酸残基。E14.如E1至E13中任一项之多肽，其中该恒定结构域在根据卡巴之EU指数编号的位置334上进一步包含工程化的半胱氨酸残基。E15.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含如E1至E14中任一项之多肽。E16.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：(a)如E1至E14中任一项之多肽，及(b)抗体轻链恒定区，其包含(i)在根据卡巴编号的位置183上之工程化的半胱氨酸残基；或(ii)当该恒定结构域与SEQIDNO:63比对时，在对应SEQIDNO:63之残基76的位置上之工程化的半胱氨酸残基。E17.一种抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含：(a)如E1至E14中任一项之多肽，及(b)抗体轻链恒定区，其包含(i)在根据卡巴编号的110、111、125、149、155、158、161、185、188、189、191、197、205、206、207、208、210或其任何组合的位置上之工程化的半胱氨酸残基；(ii)当该恒定结构域与SEQIDNO:63(κ轻链)比对时，在对应SEQIDNO:63之残基4、42、81、100、103或其任何组合的位置上之工程化的半胱氨酸残基；或(iii)当该恒定结构域与SEQIDNO:64(λ轻链)比对时，在对应SEQIDNO:64之残基4、5、19、43、49、52、55、78、81、82、84、90、96、97、98、99、101或其任何组合的位置上之工程化的半胱氨酸残基。E18.如E16或E17之抗体或其抗原结合片段，其中该轻链恒定区包含κ轻链恒定结构域(CLκ)。E19.如E16或E17之抗体或其抗原结合片段，其中该轻链恒定区包含λ轻链恒定结构域(CLλ)。E20.一种化合物，其包含如E1至E14中任一项之多肽，或如E15至E19中任一项之抗体或其抗原结合片段，其中该多肽或抗体系经由该工程化的半胱氨酸位点缀合一或多种治疗剂。E21.如E20之化合物，其中该治疗剂系经由连接子缀合该多肽或该抗体或其抗原结合片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其包含抗体重链恒定结构域，所述恒定结构域在根据卡巴的EU指数编号的位置290上包含工程化的半胱氨酸残基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.30 US 62/260,854;2016.02.01 US 62/289,744;1.一种多肽，其包含抗体重链恒定结构域，所述恒定结构域在根据卡巴的EU指数编号的位置290上包含工程化的半胱氨酸残基。2.如权利要求第1项的多肽，其中所述恒定结构域包含IgG重链CH2结构域。3.一种多肽，其包含抗体重链恒定结构域，当所述恒定结构域与SEQIDNO:61比对时，所述恒定结构域在对应SEQIDNO:61的残基60的位置上包含工程化的半胱氨酸残基。4.如权利要求第3项的多肽，其中所述经取代的半胱氨酸残基系位于IgGCH2结构域的根据卡巴的EU指数编号的位置290上。5.如权利要求第1至4项中任一项的多肽，其中所述恒定结构域在下述位置上进一步包含工程化的半胱氨酸残基，所述位置选自由根据卡巴的EU指数编号的118、246、249、265、S267、270、276、278、283、292、293、294、300、302、303、314、315、318、320、332、333、334、336、345、347、354、355、358、360、362、370、373、375、376、378、380、382、386、388、390、392、393、401、404、411、413、414、416、418、419、421、428、431、432、437、438、439、443、444及其任何组合所组成的群组。6.如权利要求第1至5项中任一项的多肽，其中所述恒定结构域在下述位置上进一步包含工程化的半胱氨酸残基，所述位置选自由根据卡巴的EU指数编号的118、334、347、373、375、380、388、392、421、443及其任何组合所组成的群组。7.如权利要求第1至5项中任一项的多肽，其中所述恒定结构域在根据卡巴的EU指数编号的位置334上进一步包含工程化的半胱氨酸残基。8.一种抗体或其抗原结合片段，包含如权利要求第1至7项中任一项的多肽。9.一种抗体或其抗原结合片段...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·马，K·A·马凯特，E·I·格拉西亚尼，P·萨普拉，L·N·图梅，N·A·普拉沙德，K·M·汉多克，E·M·贝内特，L·奇思蒂亚科娃，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：美国,US