獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途制造技术

技术编号:19853829 阅读:35 留言:0更新日期:2018-12-22 10:45
本发明专利技术公开了獐牙菜苦苷(Swertiamain)在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,通过建立氧糖剥夺模型从而探究獐牙菜苦苷对氧糖剥夺后的PC‑12细胞的保护作用及可能的作用机制,本发明专利技术的实验结果表明在氧糖剥夺再灌注之后,它降低了细胞内的活性氧,丙二醛含量,提高了超氧化物歧化酶,过氧化氢酶,谷胱甘肽过氧化物酶的含量;除此之外,獐牙菜苦苷可以降低PC‑12细胞的凋亡率以及凋亡相关蛋白的表达,减少氧糖剥夺再灌注引起的PC12细胞凋亡,说明獐牙菜苦苷的保护作用可能与抗氧化和抗凋亡有关,这些结果证明獐牙菜苦苷对缺血性损伤有保护作用。

【技术实现步骤摘要】
獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途
本专利技术涉及獐牙菜苦苷的应用,特别涉及獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途。
技术介绍
缺血性脑病(ischemicbraindisease)又称缺血性中风,目前已成为全球范围内主要致死、致残的疾病之一,严重威胁着人类的生命与健康。缺血性卒中后,临床上进行溶栓治疗会引起进一步的脑损伤即脑缺血再灌注损伤,对于缺血再灌注引起的神经元损伤,目前临床治疗措施少,因此,继续寻找抗脑缺血再灌注损伤的神经保护药物仍是研究的热点。有关脑缺血再灌注损伤发生机制复杂,研究认为脑血流中断和再灌注导致的脑细胞损伤是一个多因素、多机制、快速的恶性级联反应。其主要发病机制包括兴奋性氨基酸释放、钙超载、氧化应激、能量代谢障碍、最终导致细胞凋亡或坏死。随着对细胞抗氧化研究的进一步深入,人们逐渐认识到细胞抗氧化在继发于缺血性脑损伤发病机制中发挥着重要作用。再灌注时,脑内ROS急剧增多,引起抗氧化酶的失活、线粒体功能异常、能量代谢障碍、细胞凋亡等。因此,目前抗氧化机制参与脑缺血损伤仍是基础与临床研究的热点。秦艽是中国传统药用植物,研究报道秦艽对脑缺血损伤有保护作用。獐牙菜苦苷是秦艽中裂环烯醚萜类的主要成分。獐牙菜苦苷具有镇痛、抗炎、抗氧化的药理活性,且研究报道獐牙菜苦苷可以通过抑制氧化应激减少四氯化碳诱导的肝损伤,其在体外的抗氧化活性也有研究,獐牙菜苦苷可以通过抗炎作用对匹罗卡品诱导的癫痫有保护作用,其在体外的神经系统活性也有被研究。但其对脑缺血神经损伤、神经退行性疾病等神经损伤性疾病的保护作用目前尚未见报道,将其发展为缺血性脑卒中治疗药物具有极高的潜在价值与社会意义。
技术实现思路
本专利技术的目的通过对獐牙菜苦苷药理作用的研究,提供獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途。本专利技术通过以下技术方案来实现专利技术目的:獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,所述獐牙菜苦苷的分子结构式如式(1)所示:具体地,所述缺血性卒中为急性期或修复期的缺血性脑卒中。具体地,所述獐牙菜苦苷的单次应用量仅限于不引起中枢抑制的剂量。具体地,所述獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为0.1μmol/l~10μmol/l。优选地,所述獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为0.1μmol/l。优选地,所述獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为1μmol/l。优选地,所述獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为10μmol/l。具体地,所述药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型、注射剂型或粉针剂型。具体地,所述的獐牙菜苦苷作为唯一活性成分在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途。本专利技术公开的獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,具有如下有益效果:本专利技术通过建立氧糖剥夺再灌注模型(OGD/RP)从而探究獐牙菜苦苷对氧糖剥夺再灌注后的PC-12细胞的保护作用及可能的机制,在氧糖剥夺再灌注之后,它降低了细胞内的活性氧,丙二醛含量,提高了超氧化物歧化酶,过氧化氢酶,谷胱甘肽过氧化物酶的含量;除此之外,芦荟苷可以稳定线粒体膜电位,减少胞内钙离子浓度,降低PC-12细胞的凋亡率以及凋亡相关蛋白的表达,减少氧糖剥夺再灌注引起的PC12细胞凋亡,对缺血性损伤有保护作用。附图说明图1为獐牙菜苦苷显著增加细胞存活率图。图2为獐牙菜苦苷显著降低乳酸脱氢酶的漏出率图。图3为獐牙菜苦苷显著降低ROS的水平图。图4为獐牙菜苦苷显著降低MDA的含量图。图5为獐牙菜苦苷显著提高SOD的活性图。图6为獐牙菜苦苷显著提高CAT的活性图。图7为獐牙菜苦苷显著提高GPx的活性图。图8为獐牙菜苦苷可以显著降低cleavedcaspase-3活性水平,提高Bcl-2/Bax的比例图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的说明:实施例1獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其中,獐牙菜苦苷的分子结构式如式(1)所示缺血性卒中为急性期或修复期的缺血性脑卒中,獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为0.1μmol/l,药物的剂型为药剂学上允许的粉针剂型。实施例2獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其中,獐牙菜苦苷的分子结构式如式(1)所示缺血性卒中为急性期或修复期的缺血性脑卒中,獐牙菜苦苷在细胞中单次应用量为1μmol/l,药物的剂型为药剂学上允许的注射剂型。实施例3獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其分子结构式如式(1)所示缺血性卒中为急性期或修复期的缺血性脑卒中,獐牙菜苦苷在细胞中单次应用量为10μmol/l,药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型。实施例1至3的效果可以通过下面的细胞实验得到验证:一、实验材料1.1实验试剂及仪器PC-12细胞(昆明动物研究所),1640培养基、FBS来源于gibco,配制EBSS所有化学试剂来自索莱宝,甲氮甲唑蓝(MTT)购自广州化学试剂厂;酶标仪购自Thermo公司;乳酸脱氢酶LDH,丙二醛MDA,超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GPx、ROS测定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品;钙离子,MMP试剂盒:碧云天试剂公司;AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒:上海贝博生物公司。TUNEL:Roche,Indian-apolis,IN,USA;ProCaspase-3、cleavedcaspase-3、Bax抗体:USA,abcam;Bcl-2、β-actin、山羊抗兔抗体:Proteintech。荧光显微镜(BX51,日本olympus公司)。电泳仪、电转仪、凝胶成像仪。PCR仪、实时定量PCR仪,核酸浓度测定仪(均购自美国Bio-RAD公司)。激光共聚焦显微镜(TCS-SP,德国LEICA公司)。流式分析仪(美国BDFACSCalibur)。1.2OGD/RP模型建立制作细胞氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucosedeprivation/reperfusion,OGD/RP)模型组:PC-12细胞于培养第3d换以无糖EBSS平衡盐缓冲液充分冲洗若干次,使葡萄糖终浓度小于1mol/L,加入无糖Earle’s平衡盐溶液(EBSS液),并放入缺氧盒内,持续缓慢通入含有CO2和N2的混合气体4h,取出并吸弃平衡盐缓冲液,换以完全培养基置入CO2培养箱孵育,模拟体内缺血再灌注的过程,孵育24h。1.3实验分组及给药实验分为正常组、OGD/RP模型组、尼莫地平阳性对照组以及獐牙菜苦苷不同浓度组(0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol/l):换以无糖EBSS液建立缺糖缺氧模型,在再灌注时间点前分别加入高、中、低(0.1μmol/l、1μmol/l、10μmol/l)三个浓度的獐牙菜苦苷,其他处理同氧糖剥夺再灌注模型组;尼莫地平阳性对照组:换以无糖EBSS液以建立氧糖剥夺模型,在再灌注时间点前加入尼莫地平,其他处理同氧糖剥夺再灌注模型组;正常组:对细胞不做任何处理。二、实验过程(一)獐牙菜苦苷对OGD/RP损伤PC-12细胞的细胞存活率的影响1.1实验方法:MTT检测,给予不同药物处理的细胞经氧糖剥夺恢复氧糖正常培养24h后,加入5mg/mLMTT溶液20μL,继续孵育4h后终止培养。小心吸弃上清液,每孔加入150μL二甲基亚砜DMSO混匀,选择490nm波长测定各孔光吸收值,本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其特征在于:所述獐牙菜苦苷的分子结构式如式(1)所示:

【技术特征摘要】
1.獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其特征在于:所述獐牙菜苦苷的分子结构式如式(1)所示:2.根据权利要求1所述的獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其特征在于:所述缺血性卒中为急性期或修复期的缺血性脑卒中。3.根据权利要求1所述的獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其特征在于:所述獐牙菜苦苷的单次应用量仅限于不引起中枢抑制的剂量。4.根据权利要求1所述的獐牙菜苦苷在制备治疗缺血性脑卒中药物中的用途,其特征在于:所述獐牙菜苦苷的在细胞中单次应用量为0.1μmol/l-10μmol/l。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员:余建强王慧刘宁李玉香彭晓东
申请(专利权)人:宁夏医科大学
类型:发明
国别省市:宁夏,64

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