多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多花黄精内生细菌菌株ZJU‑C612‑1，为贝莱斯芽孢杆菌ZJU‑C612‑1 Bacillus velezensis ZJU‑C612‑1，保藏编号：CCTCC NO：M 2018311。本发明专利技术还公开了其用途：抑制铁皮石斛炭疽病菌、多花黄精叶枯病病菌、大豆炭疽病、小麦赤霉病菌、茄病镰刀菌、棉花立枯丝核病菌、西瓜枯萎病菌的生长；以及促进滇黄精组培苗、多黄黄精块茎生长。

【技术实现步骤摘要】
多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1及其应用
本专利技术属微生物领域，具体为一株具抑菌、促生作用的多花黄精内生细菌ZJU-C612-1及其应用。
技术介绍
植物内生菌(Endophyte)是指全生活史或生活史中的某一阶段寄生于植物组织中，并对植物本身不造成明显可见病害及功能改变的微生物。研究表明，许多植物内生菌具有生防和促生作用。内生菌生防作用机理主要包括营养和空间位点竞争、产生抑菌物质和诱导植物抗病性。而内生菌产生促生作用的原因主要有两方面，一方面，许多内生菌可以产生生长素、赤霉素和细胞激动素等植物生长激素，这些激素可以有效促进植物的生长发育；另一方面，内生菌能够增强植物的固氮能力和对钾、钙、磷、铁等营养元素的吸收能力。多花黄精为百合科黄精属植物，是入选《中国药典》的3个品种之一。作为集药用、食用、观赏和保健于一身的中药材黄精的原生药，肥厚的地下根茎为多花黄精主要的药用部位,干燥根茎具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效。多花黄精主产于湖南、安徽、江西、浙江等地，生产上以根茎繁殖为佳，因其药用价值和营养保健等功能价值不断被人们挖掘，现在的黄精原材料处于供不应求的状况。近年来，随着药用植物的分类、化学药理和栽培方式等方面的深入研究之后，其内生菌的多样性已成为当今研究的热点。然而，目前仅有少量文献报道黄精内生菌的研究，为此开展多黄黄精内生菌的研究具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种具有生防和促生作用的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)新菌株ZJU-C612-1及其用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1(贝莱斯芽孢杆菌BacillusvelezensisZJU-C612-1)，保藏名称：贝莱斯芽孢杆菌ZJU-C612-1BacillusvelezensisZJU-C612-1，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2018311，保藏日期：2018年5月28日。该多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1能够抑制炭疽菌属(铁皮石斛炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、大豆炭疽病(C.truncatum))，镰刀菌属((多花黄精叶枯病病菌(Fusariumoxysporum)、小麦赤霉病菌(F.graminearum)、茄病镰刀菌(F.solami)、西瓜枯萎病菌(F.oxyporumf.sp.Niveum))，丝核菌属(棉花立枯丝核病菌(Rhizoctonia.solani))3个属7种植物致病菌菌丝的生长。该多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1能够促进滇黄精组培苗和多黄黄精块茎生长。本专利技术发现一株具有生防、促生作用的菌株ZJU-C612-1，该菌分离自多黄黄精，为多花黄精内生细菌；即，本专利技术在多花黄精内生细菌中发现了该株具有生防和促生作用的多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1，经鉴定该菌为贝莱斯芽孢杆菌。它能够产生多种抑菌性活性物质，包括蛋白酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、嗜铁素和脂肽类抗生素，对铁皮石斛炭疽病菌、多花黄精叶枯病病菌、大豆炭疽病、小麦赤霉病菌、茄病镰刀菌、棉花立枯丝核病菌和西瓜枯萎病菌3个属7种植物致病菌菌丝的生长具有良好的抑制作用。此外，该菌还能够产生赤霉素(GA)、玉米素(ZT)、激动素(KT)、生长素(IAA)4种植物激素，对滇黄精组培苗和多黄黄精块茎的生长具有促进作用。该菌的发现为多花黄精内生细菌的开发和利用提供了良好的基础。虽然在专利CN102703342和CN102286412中告知了贝莱斯芽孢杆菌能够分别用于防治杂交竹梢枯病和番茄枯萎病，但这两种病害的致病菌与本专利技术的7种植物致病菌不同。另外，有文献报道贝莱斯芽孢杆菌能够用于防治小麦白粉病(Caietal.,2017)、甘蓝黑斑病(Shunaetal.,2011)等病害，这些病害与本专利技术的7种病害也不相同。菌株ZJU-C612-1的发酵液能够促进滇黄精组培苗和多黄黄精块茎的生长。MengQ等(2016)发现贝莱斯芽孢杆菌BAC03能够不同程度地促进甜菜，胡萝卜，黄瓜，胡椒，土豆，萝卜，南瓜，西红柿和萝卜等共9种植物的生长，但关于贝莱斯芽孢杆菌促进滇黄精组培苗和多黄黄精田间苗的生长的文献未见报道。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1菌株为ZJU-C612-1筛选实验图，多花黄精叶枯病病菌。图2为菌株ZJU-C612-1形态特征图；A：菌株ZJU-C612-1在LB培养基上的菌落形态；B：菌株ZJU-C612-1电镜下观察的菌体形态；C为处于芽孢形成后期的形态图，D为C的局部放大示意图；图3为菌株ZJU-C612-1产蛋白酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、嗜铁素、几丁质酶能力测定结果图；A：蛋白酶；B：纤维素酶；C：β-葡聚糖酶；D：嗜铁素；E：几丁质酶。图4为菌株ZJU-C612-1产脂肽类抗生素质谱图；Intens.[a.u.]；A：m/z800～3000的质谱图；B：质谱图A中m/z1000～1100的局部放大；C：质谱图A中m/z1400～1500的局部放大。图5菌株ZJU-C612-1发酵提取液中GA、KT、ZT、IAA的色谱图；A1、A2、A3、A4图分别为GA、KT、ZT、IAA标样的色谱图；B1、B2、B3、B4图分别为发酵液中GA、KT、ZT、IAA的色谱图。图6为菌株ZJU-C612-1对6种植物致病菌的拮抗效果图；A：小麦赤霉病菌，B：立枯丝核菌，C：大豆炭疽病，D：胶孢炭疽菌，E：西瓜枯萎病菌，F：茄病镰刀菌。图7为菌株ZJU-C612-1对滇黄精组瓶苗的促生作用图；A：MS；B：MS+激素；C：无细胞滤液与MS比为1：100；D：无细胞滤液与MS比为3：100；E：无细胞滤液与MS比为5：100。图8为菌株ZJU-C612-1对多花黄精块茎的促生作用图；A：无菌LB对照；B：OD600＝0.5；C：OD600＝0.05。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1、菌株ZJU-C612-1的筛选多花黄精采集于浙江省江山市(北纬28”22’26.97，东经118”30’36.14)，由浙江省江山市保安乡技术推广站提供，内生细菌的分离采用常规组织分离法(可参照CN103122331A《一种植物内生菌的分离方法》)，共分离获得11株内生细菌。拮抗菌株的筛选采用平板对峙法，具体步骤是：(1)将内生细菌在LB固体平板上活化，选取一环单菌落接种到1mL的LB液体培养基中，置于37℃，200r/min振荡培养箱中培养12h作为菌种，以1％(体积％)接种量接种内生细菌到新的LB液体培养基(4mL/10mLEP管)中，37℃，200r/min振荡培养24h，获得内生细菌发酵液备用。(2)以多花黄精叶枯病病原菌为指示菌，进行拮抗菌的筛选。取多花黄精叶枯病病原菌菌丝块接种到新的PDA培养基上，在28℃下活化培养7d，沿菌落边缘用打孔器取直径5mm的菌饼，放入平板中央，距菌落两侧2.0cm处点置2ul内生细菌发酵液，观察各菌株对指示菌的抑制效果，4d后测量两侧抑菌带宽度，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多花黄精内生细菌菌株ZJU‑C612‑1，其特征是：为贝莱斯芽孢杆菌ZJU‑C612‑1Bacillus velezensis ZJU‑C612‑1，保藏编号：CCTCC NO：M 2018311。

【技术特征摘要】
1.多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1，其特征是：为贝莱斯芽孢杆菌ZJU-C612-1BacillusvelezensisZJU-C612-1，保藏编号：CCTCCNO：M2018311。2.如权利要求1所述的多花黄精内生细菌菌株ZJU-C612-1的用途，其特征是：抑制铁皮石斛炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、多花黄精叶枯病病菌(Fus...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛碧增，迟惠荣，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33