一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针及黄曲霉毒素的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针及黄曲霉毒素的检测方法。所述探针包括具有如SEQ ID NO：1所示序列的核酸适配体和如式（Ⅰ）所示的聚集诱导发光分子AIE；

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针及黄曲霉毒素的检测方法
本专利技术属于生物检测领域，更具体地，涉及一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针及黄曲霉毒素的检测方法。
技术介绍
真菌毒素是由真菌产生的毒性次级代谢产物，对人和动物具有致癌、致畸致突变、中毒性肾损害、肝细胞毒性、免疫抑制和生殖紊乱等作用，给人和动物的生命健康带来巨大的隐患。其中黄曲霉毒素AFB1是由黄曲霉和寄生曲霉侵染粮食或食品而产生的具有毒性的次生代谢产物的总称，极易污染花生、玉米、油料种子、食用植物油及饲料，并会残留再被污染的组织中，其化学性质极其稳定、毒性最强，已被世界卫生组织列为已知的最强致癌化学物质。由于其具有痕量、剧毒、种类繁多、污染情形复杂等特点，造成人为控制的难度系数增加，同时也给实际检测带来很大难度，所以建立高效、快速的检测方法对于研究AFB1的污染状况，有效降低其危害具有重要意义。传统的AFB1检测方法有薄层色谱法(TLC)、仪器分析法(高效液相色谱法-HPLC、液质联用法-GC/MS等)、免酶联免疫化学分析法(ELISA、IAC等)、电化学检测方法和表面增强拉面法等。然而这些方法在实际应用中存在各种不足之处，如：TLC法在检测过程中需要使用有毒试剂、操作步骤复杂、灵敏度不高、重现性差等，远远不能满足当前社会对AFB1的检测需求；HPLC法虽然简化了分析过程，克服了热不稳定性，但样品前处理复杂、检测时间长，限制其实际应用；GC/MS法可以对AFB1进行定量和定性分析，但是设备复杂、操作繁琐，对操作者的专业操作水平高；免酶联免疫化学分析法在实际操作中，由于固相载体的包被在各个体之间很难达到一致，因此在进行定量测定中，每批样品检测均须用同一批次不同浓度的标准样品在同一的操作条件下制作标准曲线，不能交叉使用不同批次的酶联免疫试剂盒，导致检测成本高，同时因为酶具有不稳定性，所以用此方法易出现假阳、阴性结果、检测灵敏度不高并且需要制备特异性抗体，步骤繁琐（包被、孵育及洗脱等），检测时间长。近年来，荧光分析法因其检测灵敏度高、选择性强、使用便捷等特性而被广泛关注。但传统的荧光分析法检测AFB1需要对探针进行双标记，既需要荧光基团，又需要猝灭基团或辅助基团，增加检测成本、降低检测的可靠性。因此，研究一种检测成本低、可靠性高、检测时间短的检测方法具有重要的研究意义和应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中AFB1检测方法检测成本高、可靠性低、检测时间长的缺陷和不足，提供一种用于检测黄曲霉毒素的检测探针。本专利技术提供的检测探针为免标记探针，探针设计简单、应用成本低、操作简单，检测限低至0.08μg/L，特异性强，可广泛应用于理想缓冲溶液体系和实际样本。本专利技术的另一目的在于提供上述检测探针在检测黄曲霉毒素AFB1中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种黄曲霉毒素AFB1的检测方法。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针，所述探针包括具有如SEQIDNO：1所示序列的核酸适配体和如式（Ⅰ）所示的聚集诱导发光分子AIE；。具体地，该核酸适配体的序列为：5’-GTTCGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3’。本专利技术提供的探针基于四苯乙烯盐(TPE-Z)的聚集诱导发光特性，将AFB1的核酸适配体与TPE-Z通过静电作用力结合，形成稳定的复合物。在无AFB1存在时，TPE-Z处于分散状态，荧光猝灭；在有AFB1存在时，AFB1的核酸适配体与AFB1结合，形成双链结构，此时TPE-Z处于聚集状态，荧光恢复。通过监测荧光信号变化，判断样品中AFB1的含量。本专利技术提供的检测探针为免标记探针，探针设计简单、应用成本低、操作简单，检测限低至0.08μg/L，特异性强，可广泛应用于理想缓冲溶液体系和实际样本（葡萄酒、咖啡、牛奶）。上述检测探针在检测黄曲霉毒素AFB1中的应用也在本专利技术的保护范围内。优选地，所述应用为检测探针在葡萄酒、咖啡、牛奶样品中检测黄曲霉毒素AFB1。一种黄曲霉毒素的检测方法，包括如下步骤：S1：向待测液中添加权利要求1中所述核酸适配体、AIE和缓冲溶液得反应液；所述反应液中核酸适配体的浓度不小于5.0×10-7mol/L；所述核酸适配体和AIE的浓度比不小于1:50。S2：所述反应液于25~37℃反应后，根据荧光检测时的荧光强度即可测得黄曲霉毒素AFB1的含量。本专利技术提供的方法可实现黄曲霉毒素AFB1的快速检测（检测时间约为60min），可靠性高，成本低。优选地，所述反应液中核酸适配体的浓度为5.0×10-7mol/L；所述AIE的浓度为2.5×10-5mol/L。优选地，所述缓冲溶液为磷酸(PBS)缓冲溶液。优选地，所述缓冲溶液的pH为7.47±0.5。更为优选地，所述PBS溶液的pH为7.47，包括2.5mMMgCl2和0.5mMCaCl2。优选地，S1中待测液和所述检测探针在混合前还包括所述检测探针于90~95℃下加热3~5min的步骤。优选地，S1中反应的温度为30℃。优选地，S1步骤前还包括所述核酸适配体于90~95℃下，加热3~5min，冷却的步骤。更为优选地，所述加热的温度为95℃，时间为4min。优选地，所述荧光检测的激发波长为350nm，发射波长扫描范围400~650nm。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的检测探针为免标记探针，探针设计简单、应用成本低、操作简单，检测限低至0.08μg/L，特异性强，可广泛应用于理想缓冲溶液体系和实际样本（葡萄酒、咖啡、牛奶）。附图说明图1是实施例1提供的探针检测黄曲霉毒素AFB1的原理图；图2是黄曲霉毒素AFB1对溶液荧光强度的影响图；图3是不同反应时间的荧光强强度与零时刻荧光强度比值图；图4是不同温度的黄曲霉毒素AFB1荧光强度检测结果；图5是不同浓度的黄曲霉毒素AFB1荧光强度检测结果；图6是实施例1提供的探针检测葡萄酒溶液中黄曲霉毒素AFB1荧光强度图；图7是实施例1提供的探针检测咖啡溶液中黄曲霉毒素AFB1荧光强度图；图8是实施例1提供的探针检测婴幼儿奶粉中黄曲霉毒素AFB1荧光强度图。具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料，试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。实施例1本实施例提供一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针，包括具有如下序列：GTTCGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCAC的核酸适配体（黄曲霉毒素AFB1的核酸适配体）和聚集诱导发光分子AIE。对本实施例提供的检测探针用于检测黄曲霉毒素的检测条件探索如下：（1）探索黄曲霉毒素AFB1的影响以商业购买的黄曲霉毒素AFB1为待测物，配制1g/L溶液。取2个1.5mL离心管，向第1个离心管中，加入四苯乙烯盐（TPE-Z）、黄曲霉毒素AFB1的核酸适配体(AF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针，其特征在于，所述探针包括具有如SEQ ID NO：1所示序列的核酸适配体和如式（Ⅰ）所示的聚集诱导发光分子AIE；

【技术特征摘要】
1.一种用于检测黄曲霉毒素AFB1的检测探针，其特征在于，所述探针包括具有如SEQIDNO：1所示序列的核酸适配体和如式（Ⅰ）所示的聚集诱导发光分子AIE；。2.权利要求1所述检测探针在检测黄曲霉毒素AFB1中的应用。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述应用为检测探针在白酒、葡萄酒、啤酒、咖啡、牛奶或谷物样品中检测黄曲霉毒素AFB1。4.一种黄曲霉毒素AFB1的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：向待测液中添加权利要求1中所述核酸适配体、AIE和缓冲溶液得反应液；所述反应液中核酸适配体的浓度不小于5.0×10-7mol/L；所述核酸适配体和AIE的浓度比不小于1:50；S2：所述反应液于25...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾永梅，李程鹏，李志果，刘培炼，冯宗财，
申请(专利权)人：岭南师范学院，
类型：发明
国别省市：广东,44