一种款冬花液相特征图谱的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种款冬花特征图谱的构建方法，涉及中药特征图谱的构建技术领域。本发明专利技术液相特征图谱的构建方法，包括如下步骤：(1)款冬花经50％甲醇提取后过滤膜得测试溶液；(2)经高效液相色谱仪检测得化学特征图谱；(3)经图谱分析确定款冬花液相特征图谱中包含9个特征峰。本发明专利技术样本前处理简洁、方便、分析时间较短，重现性好，且能准确反映款冬花药材的某些重要的特征信息，其可用于准确鉴别款冬花的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种款冬花液相特征图谱的构建方法
本专利技术涉及中药特征图谱的构建，特别涉及一种款冬花液相特征图谱的构建方法。
技术介绍
款冬花为我国传统中药材，具有润肺下气，止咳化痰的功效，含有苯丙素类、萜类、黄酮类、甾体类、生物碱、挥发油等成分。现行的《中国药典》及部分文献对款冬花质量控制方法较为简单，仅以款冬酮作为药材质量评价的单一指标，而单一指标的测定难以真正准确鉴别药材质量。特征图谱是选取图谱中某些重要的特征信息，作为控制中药质量的重要鉴别手段。其中，特征图谱改变了以往单一成分或主斑点的鉴别模式，主要用于中药材、饮片、提取物的真伪鉴别与制剂处方多药味的鉴别，以及评价药材的道地性与制剂质量的稳定性。目前2015版《中国药典》中已有羌活、沉香药材和山楂叶、茵陈、连翘提取物建立了特征图谱，而款冬花的特征图谱药典尚未收载，也未见相关文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种能全面反映款冬花药材质量的特征图谱的构建方法。本专利技术的目的通过如下技术方案实现：一种款冬花液相特征图谱的构建方法，包括如下步骤：1、一种款冬花液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对照溶液的制备：取款冬花对照药材粉末1g，加入50％甲醇(体积浓度)20mL，超声提取0.5-1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(2)供试品溶液的制备：取款冬花粉末1g，加入50％甲醇20mL，超声提取0.5-1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(3)分别吸取对照溶液与测试溶液至高效液相色谱仪测定，得到化学特征图谱；所述液相色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃-35℃；紫外检测波长：0-25min以254nm检测，25-45min以220nm检测；流动相：A相为乙腈，B相为0.3％～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，每1次进样完成后，系统平衡5min后再次进样；梯度洗脱条件：0-10min，13％A相；10-25min，13％-40％A相；25-30min，40％-90％A相；30-45min，90％-95％A相；(4)分析供试品特征图谱中是否呈现与对照药材中的9个主要特征峰保留时间相对应的色谱峰；9个特征峰所对应的化合物分别是：1号峰：绿原酸；2号峰：芦丁；3号峰：金丝桃苷；4号峰：异绿原酸B；5号峰：异绿原酸A；6号峰：异绿原酸C；7号峰：款冬酮；8号峰：1β,8-bisangeloyloxy-3β,4β-epoxybisabola-7(14),10-diene；9号峰：款冬素酯。所述步骤(1)和(2)中超声提取时间为0.5h。所述步骤(3)中液相色谱条件中的柱温：25℃，流动相B相为0.4％磷酸水溶液。所述步骤(4)中所述特征图谱的9个特征峰，以2号峰为参照峰，相对保留时间：1号峰：0.575±0.008；3号峰：1.045±0.000；4号峰：1.087±0.001；5号峰：1.132±0.002；6号峰：1.153±0.003；7号峰：1.716±0.002；8号峰：1.855±0.002；9号峰：2.037±0.007。本专利技术所建立的款冬花特征图谱具有如下优点和效果：1.样本前处理简单、分析时间较短，重现性好；2.通过双波长切换可以更灵敏的检测款冬花中不同类型的成分；3.本专利技术所建立的款冬花特征图谱特征峰均得到结构指认，可同时检测4种酚酸类成分，3种倍半萜类成分，2种黄酮类成分，更准确的评价款冬花的药材质量。附图说明图1为不同提取条件下款冬花HPLC特征图谱对比图2为不同流动相条件下款冬花HPLC特征图谱对比图3为不同检测波长条件下款冬花HPLC特征图谱对比图4为52批款冬花药材生成的对照HPLC特征图谱图5为不同柱温考察结果图6为不同流速考察结果图7为不同色谱柱考察结果图8为52批款冬药材HPLC特征图谱结果具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细、完整的说明。各实施例中使用到的试剂和器材如下：1仪器Agilent1260高效液相色谱仪(Agilent公司)，G1311C四元梯度泵，G1329B自动进样器，G1316A柱温箱，G1314F紫外检测器，超声波清洗器(KQ5200E，昆山市超声仪器有限公司)，色谱柱VenusilMPC18(250mm×4.6mm，5μm)。2试剂乙腈(色谱纯，Fisher公司)，甲醇(色谱纯，Fisher公司)，超纯水，磷酸(色谱纯，Fisher公司)，其余试剂均为分析纯。3不同产地款冬花药材信息(见表1)表1不同产地款冬花药材信息实施例1供试品溶液制备条件、色谱条件的确定及特征峰的指认1、供试品溶液制备方法的选择六种供试品溶液不同制备方法比较：比较样品为No.14。方法一：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，超声提取半小时，放置冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。方法二：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20mL，，超声提取半小时，放置冷却至室温，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。方法三：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入30％甲醇20mL，超声提取半小时，放置冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。方法四：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇20mL，超声提取半小时，放置冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。方法五：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20mL，超声提取半小时，放置冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。方法六：精密称定款冬花粉末1g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇20mL，称定重量，超声提取一小时，放置冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。六种供试品溶液不同制备方法比较：通过对不同溶剂(乙醇、甲醇)，不同提取时间(0.5h、1h)、不同体积分数甲醇(30％、50％、75％)对款冬花中绿原酸的提取效率考察，结果显示：50％甲醇，料液比1:20，超声提取0.5h，款冬花中绿原酸的提取效率最高，峰面积最大，分离度较好，作为最终实验方法，色谱图见附图1。2、流动相系统的考察：考察不同系统的流动相，比较甲醇-水系统，乙腈-水系统，乙腈-水(0.03％甲酸)系统、乙腈-水(0.03％乙酸)系统、乙腈(0.03％甲酸)-水(0.03％甲酸)系统、乙腈-水(0.4％磷酸)系统下色谱图出峰情况。结果表明：(1)甲醇-水系统与乙腈-水系统均可看到7个较高的色谱峰，但甲醇-水系统下各色谱峰出峰时间较晚,乙腈-水系统下特征色谱峰数目较少；(2)对比乙腈-水(0.03％乙酸)系统与乙腈-水(0.03％甲酸)系统发现，上述两个流动相系统中基线漂移较严重，且乙腈-0.03％乙酸水系统中各峰分离度低，拖尾明显，但甲酸对酚酸类成分的分离效果更好，而对倍半萜类成分的分离影响不大；(3)在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种款冬花液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对照溶液的制备：取款冬花对照药材粉末1g，加入50％甲醇20mL，超声提取0.5‑1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(2)供试品溶液的制备：取款冬花粉末1g，加入50％甲醇20mL，超声提取0.5‑1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(3)分别吸取对照溶液与测试溶液至高效液相色谱仪测定，得到化学特征图谱；所述液相色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃‑35℃；紫外检测波长：0‑25min以254nm检测，25‑45min以220nm检测；流动相：A相为乙腈，B相为0.3％～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，每1次进样完成后，系统平衡5min后再次进样；所述梯度洗脱条件：0‑10min，13％A相；10‑25min，13％‑40％A相；25‑30min，40％‑90％A相；30‑45min，90％‑95％A相；(4)分析供试品特征图谱中是否呈现与对照药材中的9个主要特征峰保留时间相对应的色谱峰；9个特征峰所对应的化合物分别是：1号峰：绿原酸；2号峰：芦丁；3号峰：金丝桃苷；4号峰：异绿原酸B；5号峰：异绿原酸A；6号峰：异绿原酸C；7号峰：款冬酮；8号峰：1β,8‑bisangeloyloxy‑3β,4β‑epoxybisabola‑7(14),10‑diene；9号峰：款冬素酯。...

【技术特征摘要】
1.一种款冬花液相特征图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对照溶液的制备：取款冬花对照药材粉末1g，加入50％甲醇20mL，超声提取0.5-1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(2)供试品溶液的制备：取款冬花粉末1g，加入50％甲醇20mL，超声提取0.5-1h，以50％甲醇补足损失重量，溶液过0.22μm微孔滤膜即可；(3)分别吸取对照溶液与测试溶液至高效液相色谱仪测定，得到化学特征图谱；所述液相色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温：25℃-35℃；紫外检测波长：0-25min以254nm检测，25-45min以220nm检测；流动相：A相为乙腈，B相为0.3％～0.5％磷酸水溶液，梯度洗脱，每1次进样完成后，系统平衡5min后再次进样；所述梯度洗脱条件：0-10min，13％A相；10-25min，13％-40％A相；25-30min，40％-90％A相；30-45min，90％-95％A相；(4)分析供试品特征图谱中是否呈现与对照药材中的9个主要特征峰保留时间相对应的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李震宇，卢紫娟，秦雪梅，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14