本发明专利技术提供一种具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质及其制备方法与应用，该蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其分子量为10172.2 Da。该蛋白质可通过从间斑寇蛛卵粒转录组中获得编码基因，然后利用大肠杆菌异源表达制备。该蛋白质能特异性作用于人乳腺癌细胞系MDA‑MB‑231细胞，抑制MDA‑MB‑231细胞增殖和转移，并诱导其凋亡，从而实现抗乳腺癌的作用，能应用于制备抑制MDA‑MB‑231细胞生长的药物、作为前体分子制备治疗乳腺癌的药物以及与其他抗肿瘤药物联用制备治疗乳腺癌的药物。具有抗乳腺癌活性的蛋白质可以从多个方面抑制乳腺癌细胞，从而不仅可以作为治疗乳腺癌药物开发的前体分子，而且可在肿瘤发生、发展机理等相关研究中发挥作用，显示出有价值的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质及其制法与应用
本专利技术涉及一种具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质及其制备方法与应用，尤其涉及一种能抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖和转移、诱导其凋亡的间斑寇蛛卵粒蛋白质及其制备方法与应用。
技术介绍
女性乳腺癌是世界上普遍发生的恶性癌症之一，患病风险一般随着年龄的增加而增加，严重威胁女性的身体健康乃至生命安全。乳腺癌的发病率正在增长，这与寿命增长，城市化水平增加和西方生活方式的广泛采纳等均有关。在中国，乳腺癌发病率在11.61/10万人，其发病率是相对较高的。同时因为乳腺癌的准确筛查诊断、干预和有效治疗方案，使乳腺癌患者生存率逐渐增加，死亡率也在逐步下降。目前，治疗乳腺癌的方法主要包括手术治疗、放疗和化疗等。目前，用化疗法治疗乳腺癌的主要问题是现有化疗小分子治疗药物特异性不强，因而其副作用大，病人遭受许多不必要的痛苦；此外，传统的小分子治癌药物还易产生耐药性，随着用药时间的延长，药效下降，用药量增加。因此，发现和研制作用特异性强、能定向作用于癌细胞的治癌药物是目前相关领域的研究热点。能产生抗癌活性蛋白质和多肽的有毒动物为新型抗癌药物的筛选提供了丰富的资源。与传统的小分子治癌药物相比，蛋白质类治癌药物具有作用靶细胞明确、特异性强和不易产生耐药性等优点。在已公开的有关抗乳腺癌蛋白的报道中：CN105194646A公开一种虾蛄多肽在抗乳腺癌中的应用，尤其涉及虾蛄多肽在抑制乳腺癌SKBR-3细胞增殖药物中的应用。CN104784677A公开蜂毒肽在制备抑制乳腺癌细胞侵润转移药物中的应用，具体的，所述蜂毒肽可阻断CD147和MMP9表达，从而抑制MCF-7细胞的浸润和转移。CN104418952B公开一类双特异性抗体，为包含Trastuzumab和Pertuzumab的抗原结合区的抗体蛋白，可特异性与ErbB2分子细胞外II区和IV区结合，并且具有显著体外和体内抗乳腺癌的作用。本专利技术拟提供一种从间斑寇蛛卵粒中发现的一种新的具有抗乳腺癌活性的蛋白质，目前暂未见有关间斑寇蛛卵粒中具有抗乳腺癌活性蛋白质的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从间斑寇蛛卵粒中发现的，能特异性作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞，抑制其增殖和转移，且能诱导其凋亡的具有抗乳腺癌活性的蛋白质。为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：提供一种具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，其分子量为10172.2Da。SEQIDNO：1如下：(由91个氨基酸组成)SQAGEWGSGAGKGGGSGGSVRDAGGSFGKMEAAREEEYFRKQQKEQLKALKSHLHEEIDHHEEEIERLQEEIKRHKKKISDLAKEEKKIDG进一步地，编码上述氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质的基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。SEQIDNO：2如下：(由336个碱基对组成)上述编码基因的核苷酸序列中：64-336个碱基对为成熟肽编码区。对于活性蛋白质和多肽来说，与其活性或生物学功能直接相关的往往只是分子中的一部分。所以，在非功能区进行一些改变往往不会改变分子的活性。因此本专利技术还提供上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，在其如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且仍具有抗乳腺癌活性的衍生蛋白质。本专利技术还提供上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质的制备方法，具体是从间斑寇蛛卵粒转录组中获得编码基因，编码基因具有如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，然后利用大肠杆菌异源表达获得氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质。由于上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质能特异性作用于人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞，抑制MDA-MB-231细胞增殖和转移，并诱导其凋亡，从而实现抗乳腺癌的作用。本专利技术还提供上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质在制备抑制乳腺癌细胞生长的药物中的应用。尤其是在制备抑制MDA-MB-231细胞生长的药物中的应用。上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质作为前体分子在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质与其他抗肿瘤药物联用在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。上述具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质在制备乳腺癌发生、发展机制研究的工具试剂中的应用。上述方案中：1、MDA-MB-231取自人乳腺肿瘤患者的胸腔积液，为上皮样细胞，该细胞系为ER-，PR-，HER2-三重阴性，具备EGF，TGF-a和WNT7B癌基因的表达能力；在使用ALS处理过的BALB/c小鼠和裸鼠体内均可形成分化程度较低(III级)的腺癌；对化疗具有中等响应。2、间斑寇蛛(Latrodectustredecimguttatus)(俗称“黑寡妇”蜘蛛)。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术首次从间斑寇蛛卵粒中发现一种能抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖和转移，并能诱导其凋亡的新蛋白质。所以，该蛋白能从抑制乳腺癌细胞增殖和迁移，以及诱导其凋亡等多个方面发挥治疗乳腺癌的作用。(2)本专利技术从间斑寇蛛卵粒转录组中选取一个基因序列，经克隆和异源表达得到一种分子量为10172.2Da的蛋白质。该蛋白对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞活力(增殖)的抑制性影响显著大于对非癌HEK293细胞的影响，证明该蛋白对乳腺癌细胞的抑制作用具有选择性。该蛋白可以从多个方面抑制乳腺癌细胞，从而不仅可以作为治疗乳腺癌药物开发的前体分子，而且可在肿瘤发生、发展机理等相关研究中发挥作用，显示出有价值的应用前景。与传统的小分子治癌药物相比，以这种蛋白质为前体分子开发的蛋白质类治癌药物具有作用靶标明确、作用特异性强和不易产生耐药性等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术抗乳腺癌蛋白基因克隆的重组质粒图谱(图中具有抗乳腺癌活性的蛋白命名为Latroeggtoxin-V)；图2为图1中表达载体的鉴定(A)和诱导表达效果(B)的SDS-PAGE检测图；图3为本专利技术抗乳腺癌蛋白融合蛋白经肠激酶酶切后的RP-HPLC分离图(图中第二个主要峰为目的峰)；图4为对本专利技术抗乳腺癌蛋白质的质谱法分子量测定图谱；图5为本专利技术抗乳腺癌蛋白质对MDA-MB-231细胞增殖、HEK293细胞的抑制作用比较；(图中：relativecellviability指细胞相对活力)图6a为Hoechst33258染色观察本专利技术抗乳腺癌蛋白质诱导MDA-MB-231细胞凋亡的效果，其中箭头所指为凋亡细胞；图6b为对照组(未经处理的MDA-MB-231细胞)的情况；图7a为采用细胞划痕实验观察不同浓度的抗乳腺癌蛋白处理后的MDA-MB-231细胞的迁移；图7b为不同浓度的抗乳腺本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其分子量为10172.2Da。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，其分子量为10172.2Da。2.根据权利要求1所述的具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，其特征在于，编码上述氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的蛋白质的基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。3.根据权利要求1所述的具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质，其特征在于，还包括在其如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且仍具有抗乳腺癌活性的衍生蛋白质。4.具有抗乳腺癌活性的间斑寇蛛卵粒蛋白质的制备方法，其特征在于，具体是从间斑寇蛛卵粒转录组中获得编码基因，编码基因具有如SEQIDNO：2所示的核苷酸序列，然后利用大肠杆菌异源表达获得氨基酸序列如SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：王贤纯，徐德宏，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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