一种富含麦角新碱的发酵液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及微生物发酵工程领域，特别涉及到一种富含麦角新碱的发酵液及其制备方法。本发明专利技术所述的制备方法，是将麦角菌的种子菌液接入液体发酵培养基中，经摇床培养即得麦角新碱发酵液；其中，所述液体发酵培养基包括：葡萄糖80～120g/L，麦芽糊精20～60g/L，酵母粉4～8g/L，豆粕粉50～80g/L，硫酸镁0.7～1.5g/L。本发明专利技术所提供的麦角新碱发酵液的制备方法，所需材料成本低廉，操作简便，条件适宜，结果稳定，且利用本发明专利技术所提供的方法所制备出的发酵液，其麦角新碱的含量超过3000ug/ml，还具有液相色谱组分高，且无较高组分的杂质的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种富含麦角新碱的发酵液及其制备方法
本专利技术涉及微生物发酵工程领域，特别涉及到一种富含麦角新碱的发酵液及其制备方法。
技术介绍
麦角新碱是妇产科临床常用药物，主要用于产后止血和收缩子宫,与麦角毒碱等相比较具有作用快、毒性小的特点，许多国家都是以野生麦角或人工栽培麦角为原料进行生产，常受到地区及气候条件等限制，不能在短期内进行大量生产，并且需要大片农田，成本亦较高。采用工业发酵法生产麦角碱是克服这些困难和缺点的一种有希望的途径。
技术实现思路
本专利技术提供一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，该方法能得到高效价、高组份的发酵液，适用于麦角新碱的规模化发酵生产。所述的制备方法为：将麦角菌的种子菌液接入液体发酵培养基中，经摇床培养即得麦角新碱发酵液；其中，所述液体发酵培养基包括(由以下组分组成)：葡萄糖80～120g/L，麦芽糊精20～60g/L，酵母粉4～8g/L，豆粕粉50～80g/L，硫酸镁0.7～1.5g/L。采用上述发酵培养基，能够控制麦角菌的发酵方向，使其大量发酵产生麦角新碱。所得发酵液的麦角新碱浓度可达3000ug/ml以上，且其麦角新碱的品质较高，无毒性，液相检测图谱看，主组分比例高，无较高组分杂质。作为优选，本专利技术所提供的液体发酵培养基由以下组分组成：葡萄糖80～90g/L，麦芽糊精25～35g/L，酵母粉5～6g/L，豆粕粉50-60g/L，硫酸镁0.8-1.2g/L。采用上述组分，能够进一步提高麦角新碱的品质和发酵过程的稳定性。所述种子菌液控制其菌龄为48-60小时，此时菌浓在25％到30％，料液不粘稠，活力旺盛；进入发酵罐能快速适应并生长。所述麦角菌的种子菌液接入液体发酵培养基的接种量控制在8±3％，高于这个范围，种子进入发酵罐后生长极为快速，不易控制，容易导致发酵液发粘，变稠，单位低；低于这个范围，进入发酵罐后前期生长期偏长，进入代谢期延后且后期单位增幅缓慢，菌丝老化自溶。优选控制上述发酵培养基的pH值在7.0～7.8，此时更适宜麦角菌的发酵生长。本专利技术所述的制备方法中，优选地，控制其发酵温度为28～32℃，温度过低会导致菌丝生长缓慢，进入代谢延后，导致前期单位增长缓慢，而且到了后期单位增长会停滞；温度过高会导致菌丝提前老化，在未到达放罐周期时菌丝开始自溶，同时产物组分会降低约10％，从而达不到理想的效果。更优选保持罐压为0.03～0.06mpa，通气量为1:0.5～1:1；控制摇床的转速150～200转/分，培养400～480h；通过上述参数的优化，能得到更为理想的发酵产物。上述麦角新碱发酵液可根据本领域常规进行提取纯化的操作，在此不做特殊限制。本专利技术中所述的麦角菌的种子菌液可以常规方法制备得到，不做特殊限制，仅提供一种较为优选的制备方法，如下：1)将麦角菌菌种接入摇瓶培养，制成摇瓶种子液；2)将所述摇瓶种子液接入种子发酵培养基中(接种量3-5％)，经培养得到种子菌液；其中，所述种子发酵培养基包括：葡萄糖20-80g/L，麦芽糊精10-20g/L，棉籽饼粉1-5g/L，酵母粉2-8g/L，硫酸镁0.5-1.5g/L；优选地，所述培养条件为：培养温度为28～32℃，种子罐压为0.03～0.06Mpa，通气比1:0.5～1:1，转速为100～200转/分，培养96～144h；上述液体发酵培养基使用的碳源、氮源与发酵罐接近，在种子能进入发酵罐后能尽早的适应发酵罐内的环境，提前进入产物代谢期；同时此培养基也能满足种子的正常生长能够提供足量的麦角菌活菌。本专利技术所述发酵方法中，还包括对培养基的灭菌操作，本领域技术人员可按照常规方法进行操作，本专利技术提供一种较为优选的灭菌方法，如下：对种子发酵培养基和液体发酵培养基进行灭菌，灭菌温度为119～123℃，灭菌时间为30min。本专利技术所提供的制备方法，所需材料成本低廉，操作简便，条件适宜，结果稳定，且利用本专利技术所提供的方法所制备出的发酵液，其麦角新碱的含量超过3000ug/ml，还具有液相色谱组分高，且无较高组分的杂质的优点。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。以下所述灭菌操作，均为灭菌温度为119～123℃，灭菌时间为30min。以下所述麦角新碱的浓度采用HPLC法进行测量。以下各实施例所采用的种子罐菌液由如下方法制备得到：1)取麦角菌接入摇瓶培养，制成摇瓶种子液；2)在种子发酵罐中配制种子发酵培养基，种子罐为500L，装料量为300L。种子发酵培养基组成如下：葡萄糖18Kg，麦芽糊精4.5Kg，棉籽饼粉0.9Kg，酵母粉1.2Kg，硫酸镁0.21Kg，其余为水；其中所述种子发酵培养基的初始pH为7.3；3)对种子发酵培养基进行灭菌，灭菌后的种子发酵培养基的初始pH为7.2。4)将摇瓶种子液接入种子发酵培养基中培养，其中接种体积百分比为3-5％，培养温度为28～32℃，种子罐压为0.03～0.06mpa，通气比1:0.5，转速为110转/分，培养100h，得到种子罐菌液。实施例1本实施例提供了一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，具体包括以下步骤：1)在液体发酵罐中配制液体发酵培养基，发酵罐为5000L，装料量为3000L，发酵液体培养基包括以下组分和组分含量：葡萄糖350Kg，麦芽糊精90Kg，酵母粉23Kg，豆粕粉150Kg，硫酸镁3Kg，其余为水；其中所述液体发酵培养基的初始pH为7.4。2)对液体发酵培养基进行灭菌，灭菌后的液体发酵培养基的初始pH值为7.3。3)将种子罐菌液无菌转入液体发酵培养基中，其中，接种体积百分比为8％，发酵温度为28～32℃，罐压为0.03～0.06mpa，通气量为1:0.8，转速180转/分，培养440h。得到效价为3325ug/ml的麦角新碱发酵液。实施例2本实施例提供了一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，具体包括以下步骤：1)在液体发酵罐中配制液体发酵培养基，发酵罐为5000L，装料量为3000L，发酵液体培养基包括以下组分和组分含量：葡萄糖250Kg，麦芽糊精90Kg，酵母粉15Kg，豆粕粉150Kg，硫酸镁3Kg，其余为水；其中所述液体发酵培养基的初始pH为7.8；2)对液体发酵培养基进行灭菌，灭菌后的液体发酵培养基的初始pH值为7.5。3)将种子罐菌液无菌转入液体发酵培养基中，其中，接种体积百分比为5％，发酵温度为28～32℃，罐压为0.03～0.06mpa，通气量为1:0.8，转速180转/分，培养432h。放罐，得到效价为3126ug/ml的麦角新碱发酵液。实施例3本实施例提供一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，具体包括以下步骤：1)在液体发酵罐中配制液体发酵培养基，发酵罐为5000L，装料量为3000L，发酵液体培养基包括以下组分和组分含量：葡萄糖300Kg，麦芽糊精180Kg，酵母粉24Kg，豆粕粉200Kg，硫酸镁4Kg，其余为水；其中所述液体发酵培养基的初始pH为7.6；2)对液体发酵培养基进行灭菌，灭菌后的液体发酵培养基的初始pH值为7.2。3)将种子罐菌液无菌转入液体发酵培养基中，其中，接种体积百分比为6％，发酵温度为28～32℃，罐压为0.03～0.06mpa，通气量为1:1，转速180转/分，培养456h。放罐，得到效价为3323ug/ml的麦角新碱发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，其特征在于，将麦角菌的种子菌液接入液体发酵培养基中，经摇床培养即得麦角新碱发酵液；其中，所述液体发酵培养基包括：葡萄糖80～120g/L，麦芽糊精20～60g/L，酵母粉4～8g/L，豆粕粉50～80g/L，硫酸镁0.7～1.5g/L。

【技术特征摘要】
1.一种富含麦角新碱的发酵液的制备方法，其特征在于，将麦角菌的种子菌液接入液体发酵培养基中，经摇床培养即得麦角新碱发酵液；其中，所述液体发酵培养基包括：葡萄糖80～120g/L，麦芽糊精20～60g/L，酵母粉4～8g/L，豆粕粉50～80g/L，硫酸镁0.7～1.5g/L。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述液体发酵培养基由以下组分组成：葡萄糖80～90g/L，麦芽糊精25～35g/L，酵母粉5～6g/L，豆粕粉50-60g/L，硫酸镁0.8-1.2g/L。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述培养的温度为28～32℃。4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述培养的过程中，保持罐压为0.03～0.06mpa，通气量为1:0.5～1:1。5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述摇床培养的转速为150-200转/分。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷川洋，杜森林，张葵，
申请(专利权)人：北大方正集团有限公司，北大医药重庆大新药业股份有限公司，北大医疗产业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11