一种美伐他汀的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种美伐他汀的制备方法，所述制备方法以桔青霉为菌种，发酵培养获得美伐他汀；在培养所述桔青霉的发酵培养基中，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠。本发明专利技术所述的制备方法有效提高美伐他汀的生产产量，大大降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种美伐他汀的制备方法
本专利技术涉及一种美伐他汀的制备方法，尤其涉及一种通过发酵法制备美伐他汀的方法。
技术介绍
美伐他汀(mevastatin)是HMG-CoA(3-羟基-3-甲基-戊二酸单酰辅酶A)还原酶抑制剂(HMG-CoA-RI)类微生物药物，它可以经转化菌羟基化得到新型高效降血脂药普伐他汀。同时美伐他汀还有诸多非降脂作用，如抗骨质疏松、抗肿瘤等。美伐他汀主要用桔青霉菌(Penicilliumcitrinum)经深层液体发酵制取。但是目前生产中普遍存在美伐他汀产量偏低、生产成本偏高等问题。
技术实现思路
基于上述
技术介绍
，本专利技术的目的在于提供一种美伐他汀的制备方法；所述制备方法可有效提高美伐他汀的生产产量，从而降低生产成本。本专利技术所述的制备方法以桔青霉为菌种，发酵培养获得美伐他汀；在培养所述桔青霉的发酵培养基中，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠。本专利技术在发酵过程中，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠，能有效提高美伐他汀的产量；并且在发酵开始后，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠，效果更好更为显著。其中，所述发酵培养基包括如下重量份组分：蔗糖18-22份、豆粕3-5份、酵母浸膏0.4-0.6份、蛋白胨0.8-1.2份、NaCl0.08-0.12份、MgSO40.04-0.06份、KH2PO40.04-0.06份、NaNO30.08-0.12份、水70-80份；优选地，所述发酵培养基包括如下重量份组分：蔗糖20份、豆粕4份、酵母浸膏0.5份、蛋白胨1份、NaCl0.1份、MgSO40.05份、KH2PO40.05份、NaNO30.1份、水70-80份。本专利技术进一步提出的，所述乙酸钠的添加量为所述培养基的0.05-1.50％(w/w)，优选为0.1-1.0％(w/w)，更优选为0.5-0.7％(w/w)。其中，添加所述乙酸钠的时间为发酵后的第0-120个小时，优选为发酵后的第0-72个小时，更优选为发酵后的第24-48个小时。本专利技术进一步提出的，所述柠檬酸钠的添加量为所述培养基的0.05-1.50％(w/w)，优选为0.1-1.2％(w/w)，更优选为0.9-1.1％(w/w)。其中，添加所述柠檬酸钠的时间为发酵后的第0-120个小时，优选为发酵后的第0-72个小时，更优选为发酵后的第24-48个小时。本专利技术进一步提出的，所述发酵培养基中同时添加乙酸钠和柠檬酸钠，所述乙酸钠的添加量为0.05-1.50％(w/w)，柠檬酸钠的添加量为0.05-1.50％(w/w)；优选地，所述乙酸钠的添加量为0.1-1.0％(w/w)，柠檬酸钠的添加量为0.1-1.0％(w/w)；更优选地，所述乙酸钠的添加量为0.5-0.7％(w/w)，柠檬酸钠的添加量为0.5-0.7％(w/w)。其中，添加所述乙酸钠和柠檬酸钠的时间为发酵后的第0-120个小时，优选为发酵后的第0-72个小时，更优选为发酵后的第40-55个小时。在桔青霉菌(Penicilliumcitrinum)的发酵培养基中添加乙酸钠和柠檬酸钠，均可明显提高美伐他汀的产量，产量的提高可达17％；其最适添加量、最适添加时间分别为：0-72小时添加重量百分比为发酵培养基的0.10-1.00％的乙酸钠；0-72小时添加重量百分比为发酵培养基的0.10-1.00％的柠檬酸钠。其中，所述培养的发酵条件可采用本领域常规的发酵方法进行选择，本专利技术优选采用如下发酵条件：在pH值为5.5-6.5、温度为20-30℃的条件下，以200-300rpm的转速发酵培养200-260小时；优选地，在pH值为6.0、温度为24±1℃的条件下，以240-260rpm的转速，发酵培养220-250小时。本专利技术所述制备方法中，接种至发酵培养基前通常还包括将菌种接种至种子培养基中进行预培养，然后再将培养后获得的种子液接种于发酵培养基中，再进行发酵培养。所述预培养具体为：将桔青霉菌种接种至种子培养基中，在24-26℃的温度下，以150-300rpm的转速培养96-120小时。优选地，将预培养后所获得的桔青霉种子液按10-20％的接种量接种至发酵培养基中。本专利技术提供一种优选实施方式，所述制备方法具体为：将桔青霉菌种接种至种子培养基中进行预培养，将预培养后获得种子液按10-20％的接种量接种至发酵培养基中，在pH值为5.5-6.5、温度为20-30℃的条件下，以240-260rpm的转速，发酵培养220-250小时；在发酵后的第0-72个小时，向所述发酵培养基中，添加0.10-1.00％(w/w)的乙酸钠和/或柠檬酸钠；最优选为添加0.9-1.1％(w/w)的乙酸钠和/或柠檬酸钠。本专利技术所述的制备方法中，通常还包括在发酵之后对发酵液进行分离提纯的步骤。例如对发酵液进行过滤、萃取、浓缩、结晶、干燥，以获得美伐他汀成品。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。除特别说明外，以下实施例中所使用的％均为重量百分比。以下实施例使用的桔青霉菌种来源于北大医药重庆大新药业股份有限公司菌种中心。以下实施例中采用的桔青霉种子液按如下方法获得：将桔青霉菌(Penicilliumcitrinum)斜面(即菌种)接种于摇瓶种子培养基中，在25±1℃的温度下，摇床转速250rpm，周期96-120小时，即得桔青霉种子液。以下实施例采用的发酵培养基重量百分比为：蔗糖20％、豆粕4％、酵母浸膏0.5％、蛋白胨1％、NaCl0.1％、MgSO40.05％、KH2PO40.05％、NaNO30.1％、余量为水。以下实施例中美伐他汀的含量测定采用HPLC进行检测。实施例1本实施例提供一种美伐他汀的制备方法，具体为：将桔青霉菌种子液按10-20％的接种量接种至发酵培养基中，在pH值为6.0、温度为24±1℃的条件下，以250rpm的转速，发酵培养220小时；在发酵后的第0个小时(即刚刚开始发酵时)，向所述发酵培养基中，添加占所述发酵培养基重量比为0.05％的乙酸钠。实施例2-6本实施例提供一种美伐他汀的制备方法，与实施例1的区别仅在于乙酸钠的添加量不同，分别为0.10％、0.30％、0.60％、1.00％、1.50％。以不添加乙酸钠的发酵培养基作为对照，取样测定实施例1-6美伐他汀的含量，如下表：表1由表1的结果可见，在发酵培养基中添加乙酸钠可明显提高美伐他汀的生物合成，优选的添加量范围为0.10-1.00％。实施例7本实施例提供一种美伐他汀的制备方法，具体为：将桔青霉菌种子液按10-20％的接种量接种至发酵培养基中，在pH值为6.0、温度为24±1℃的条件下，以250rpm的转速，发酵培养250小时；在发酵后的第0个小时(即刚刚开始发酵时)，向所述发酵培养基中，添加占所述发酵培养基重量比为0.6％的乙酸钠。实施例8-12本实施例提供一种美伐他汀的制备方法，与实施例7的区别仅在于乙酸钠的添加时间不同，分别为发酵后的第24、48、72、96、120个小时。以不添加乙酸钠的发酵培养基作为对照，取样测定实施例7-12美伐他汀的含量，如下表：表2由表2的结果可见，在发酵0-120小时向发酵培养基中添加乙酸钠均可明显提高美伐他汀的生物合成，更优选的添加时间为发酵后0-72小时。实施例13本实施例提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种美伐他汀的制备方法，以桔青霉为菌种，经发酵培养获得美伐他汀，其特征在于，在培养所述桔青霉的发酵培养基中，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠。

【技术特征摘要】
1.一种美伐他汀的制备方法，以桔青霉为菌种，经发酵培养获得美伐他汀，其特征在于，在培养所述桔青霉的发酵培养基中，添加乙酸钠和/或柠檬酸钠。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下重量份组分：蔗糖18-22份、豆粕3-5份、酵母浸膏0.4-0.6份、蛋白胨0.8-1.2份、NaCl0.08-0.12份、MgSO40.04-0.06份、KH2PO40.04-0.06份、NaNO30.08-0.12份、水70-80份；优选地，所述发酵培养基包括如下重量份组分：蔗糖20份、豆粕4份、酵母浸膏0.5份、蛋白胨1份、NaCl0.1份、MgSO40.05份、KH2PO40.05份、NaNO30.1份、水70-80份。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸钠的添加量为所述培养基的0.05-1.50％(w/w)，优选为0.1-1.0％(w/w)，更优选为0.5-0.7％(w/w)。4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，添加所述乙酸钠的时间为发酵后的第0-120个小时，优选为发酵后的第0-72个小时，更优选为发酵后的第24-48个小时。5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述柠檬酸钠的添加量为所述培养基的0.05-1.50％(w/w)，优选为0.1-1.2％(w/w)，更优选为0.9-1.1％(w/w)。6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，添加所述柠檬酸钠的时间为发酵后的第0-120个小时，优选为发酵后的第0-72个小时，更优选为发酵后的第24-48个小时。7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基中同时添加乙酸钠和柠檬酸钠，添加所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈华桥，张葵，
申请(专利权)人：北大方正集团有限公司，北大医药重庆大新药业股份有限公司，北大医疗产业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11