米糠粕浸汁在生产普伐他汀中的应用制造技术

本发明专利技术涉及米糠粕浸汁在生产普伐他汀中的应用，具体的，在以美伐他汀为发酵底物，通过马杜拉放线菌发酵生产普伐他汀的过程中，将米糠粕浸汁添加到所述马杜拉放线菌的培养基中。本发明专利技术将米糠粕浸汁添加到马杜拉放线菌的培养基中，能够提高马杜拉放线菌对美伐他汀的耐受性，同时提高马杜拉放线菌对美伐他汀的转化能力和普伐他汀发酵水平，从而提高普伐他汀产量，降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
米糠粕浸汁在生产普伐他汀中的应用
本专利技术属于发酵工程
，具体涉及一种提高普伐他汀发酵产量的方法。
技术介绍
普伐他汀是3～羟基3～甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，最初用于治疗高血脂症和家族性高胆固醇。后来适应症不断扩大，可以减缓动脉粥样硬化的发展，减少冠状动脉粥样硬化病变和临床心血管事件的发生。长期服用普伐他汀，无论病人是否患有冠心病，都能减低各种原因所致的死亡率。因此，普伐他汀成为目前他汀类药物中仅有的可用于胆固醇水平较高的或者冠心病的病人进行心脏病、中风一级和二级防御的药物。也有研究显示，普伐他汀还能降低糖尿病和阿尔茨海默病的发生率；能抑制肝癌细胞的增殖；能有效地治疗溃疡性结肠炎，副作用少，半年复发率低；在治疗慢性心力衰竭、舒张性心力衰竭方面，可改善心功能，改善心室重塑。普伐他汀的生产通常由两步发酵过程获得，虽然也有报道或专利(WO99/10499、WO2007/147827、US6,274,360和EP1,266,967)描述可用一步发酵的方法生产获得普伐他汀，但由于技术复杂及生产效率等原因，普伐他汀的工业化生产仍以两步发酵为主。普伐他汀的两步发酵过程为：首先，通过桔青霉(Penicilliumcitrinum)等微生物发酵生产获得其次级代谢产物美伐他汀Mevastatin(又名康百汀Compactin)，然后，通过微生物酶的转化作用，将美伐他汀转化为普伐他汀。现有的专利或文献资料公开的将美伐他汀转化为普伐他汀的微生物主要包括以下几类：丝状霉菌(Mortierellamaculata，WO00/46175)、根毛霉菌(MucorRhizopus，US4448979)、诺卡氏菌(Norcardia，US5830695)、马杜拉放线菌(Actinomadura，WO96/40863)、链霉菌(StreptomycesCarbopilus，EP215665)、脱叶链霉菌(Streptomycesexfoliates，WO98/45410)和粉白小多孢菌(Micropolysporaroseoalba，CN03141475A)等。按照公开的专利，上述的霉菌、丝状细菌、放线菌和链霉菌均可以将美伐他汀转化成普伐他汀。然而，由于美伐他汀对微生物转化菌的毒害作用，使得微生物不能耐受添加到培养物中的甚至是低浓度的美伐他汀。现有技术下微生物转化菌对底物美伐他汀的耐受浓度为0.01～0.05％。尽管李周灵等(WO98/45410)获得的脱叶链霉菌YJ～118表现了较高(0.1～0.5％)的底物抗性，Metkinen(MetkinenNewsMarch2000，MetkinenOy，Finland；reviewedbyManzoniandRollini，2002，ApplMicrobiolBiotechnol58：555～564)也获得了对3g/L美伐他汀具有抗性的Streptomyces突变菌株，但其普伐他汀产率不高。WO96/40863公开了马杜拉放线菌(Actinomadura)ATCC55678转化美伐他汀生产普伐他汀的方法，中国专利CN102757986B公开了以马杜拉放线菌为转化菌，在发酵过程中使用微量元素溶液以提高普伐他汀产量的方法，同时也研究了发酵培养过程中分别控制菌体增殖培养温度和美伐他汀转化温度对普伐他汀产量提高的有益作用。但两者均未提及米糠粕浸汁在其中的应用，也未提及米糠粕浸汁对普伐他汀产量提高的有益作用。目前，普伐他汀发酵生产水平大多在15g/L左右，作为商业应用的规模生产，这样的生产水平仍有较大的提高空间。对于二步发酵法生产普伐他汀来说，其第二步由微生物转化美伐他汀为普伐他汀是影响普伐他汀产量的关键性步骤。而在这一步中，如何提高微生物对底物美伐他汀的转化能力和普伐他汀发酵水平是降低普伐他汀生产成本、增加普伐他汀产量以提高经济效益的最有效途径。
技术实现思路
本专利技术的目的首先是提供米糠粕浸汁在以微生物发酵法生产普伐他汀中的应用。优选的，具体的应用方式为，以美伐他汀为发酵底物，通过马杜拉放线菌发酵生产普伐他汀的过程中，在所述马杜拉放线菌的培养基中添加米糠粕浸汁。优选的，所述米糠粕由如下方法制备得到：取米糠粕，加入为其重量10～15倍量的水，浸泡3～8h，加热至50～100℃，回流提取1h，过滤，所得滤液即为米糠粕浸汁。优选的，将所述米糠粕浸汁以3.0～10.0ml/L的浓度添加到所述培养基中。研究发现，以美伐他汀为发酵底物，通过马杜拉放线菌发酵生产普伐他汀的过程中，将米糠粕浸汁添加到马杜拉放线菌的培养基中，可有效地可提高马杜拉放线菌对美伐他汀的耐受性和转化能力，提高普伐他汀的发酵水平，从而提高普伐他汀的产量。本专利技术的另一目的是保护一种用于生产普伐他汀的马杜拉放线菌的培养基，其具体组成为，在传统的马杜拉放线菌的培养基中添加米糠粕浸汁。作为优选的方案，每升所述的培养基，由包括如下重量份的原料制备而成：葡萄糖56～58g、酵母提取物22～24g、大豆蛋白胨6～7g、K2HPO4·3H2O1～2g、MgSO4·7H2O0.5～1g、(NH4)2SO41～2g、米糠粕浸汁3.0～10.0ml和消沫剂0.5～1.0g，水补足余量。优选的，所述培养基中米糠粕浸汁的浓度为4.0～8.0ml。优选的，所述培养基中添加的米糠粕浸汁由如下方法制备而成：取米糠粕，加入为其重量10～15倍量的水，浸泡3-8h，加热至50～100℃，回流提取1h，过滤，所得滤液即为米糠粕浸汁。本专利技术的最后一个目的是保护利用本申请所述的培养基生产普伐他汀的方法，包括如下步骤：1)将活化后的马杜拉放线菌接种到所述培养中；2)所述马杜拉放线菌接种后30～40h，在所述培养基中添加美伐他汀，发酵生产普伐他汀，发酵过程中控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.6～1.0g/L，持续时间为120～145h，然后停止补加美伐他汀，继续发酵10-20h后结束发酵，得普伐他汀；优选的，所述步骤2)为：控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.8-1.0g/L。优选的，所述步骤2)中持续时间为125-140h，然后停止补加美伐他汀，继续发酵12-18h后结束发酵。优选的，所述马杜拉放线菌接种后，调整发酵温度为32-34℃，添加美伐木他汀后，调整发酵温度为30-32℃。作为优选的方法，包括如下步骤：1)将活化后的马杜拉放线菌接种到培养基中，每升所述的培养基，由包括如下重量份的原料制备而成：葡萄糖56～58g、酵母提取物22～24g、大豆蛋白胨6～7g、K2HPO4·3H2O1～2g、MgSO4·7H2O0.5～1g、(NH4)2SO41～2g、米糠粕浸汁3.0～10.0ml和消沫剂0.5～1.0g，水补足余量；2)所述马杜拉放线菌接种后30～40h，在所述培养基中添加美伐他汀，发酵生产普伐他汀，发酵过程中控制美伐他汀在发酵液中的浓度为0.6～1.0g/L，持续时间为120～145h，然后停止补加美伐他汀，继续发酵10-20h后结束发酵，得普伐他汀。作为更优选的方法，包括如下步骤：1)将活化后的马杜拉放线菌接种到培养基中，调整发酵温度为32-34℃，每升所述的培养基，由包括如下重量份的原料制备而成：葡萄糖56～58g、酵母提取物22～24g、大豆蛋白胨6～7g、K本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.米糠粕浸汁在以微生物发酵法生产普伐他汀中的应用。

【技术特征摘要】
1.米糠粕浸汁在以微生物发酵法生产普伐他汀中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以美伐他汀为发酵底物，通过马杜拉放线菌发酵生产普伐他汀的过程中，在所述马杜拉放线菌的培养基中添加米糠粕浸汁。3.一种用于生产普伐他汀的马杜拉放线菌的培养基，其特征在于，所述培养基中添加有米糠粕浸汁。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述米糠粕浸汁的添加量为3.0～10.0ml/L。5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，每升所述的培养基，由包括如下重量份的原料制备而成：葡萄糖56～58g、酵母提取物22～24g、大豆蛋白胨6～7g、K2HPO4·3H2O1～2g、MgSO4·7H2O0.5～1g、(NH4)2SO41～2g、米糠粕浸汁3.0～10.0ml和消沫剂0.5～1.0g，水补足余量。6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述培养基中米糠粕浸汁的添加量为4.0～8.0ml。7.根据权利要求4～6任一项所述的培养基，其特征在于，所述米糠粕浸汁由如下方法制备而成：取米糠粕，加入为其重量10～15倍量的水，浸泡3-8h，加热至50～100℃，回流提取1h，过滤，所得滤液即为米糠粕浸汁。8...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈华桥，张葵，
申请(专利权)人：北大方正集团有限公司，北大医药重庆大新药业股份有限公司，北大医疗产业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11