一种快速制备异淡红乳菇素的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速制备异淡红乳菇素的方法。本发明专利技术提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13‑二环氧‑5,7(13)‑乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种快速制备异淡红乳菇素的方法
本专利技术涉及化学领域，尤其涉及一种快速制备异淡红乳菇素的方法。
技术介绍
异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯是存在于绒白乳菇子实体中的两种化合物，研究表明异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯为有效的血管内皮生长因子165激活剂，二者可以通过激活血管内皮生长因子165表达促进骨髓间充质干细胞成骨分化(中国专利申请号：2018109771474；2018109771489)。异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式如图1所示。目前，制备异淡红乳菇素或3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的方法无不依赖于反复硅胶柱层析，甚至需要借助凝胶柱层析。但是，无论是硅胶柱层析还是凝胶柱层析均只能局限于实验室规模，还无法适用于工厂大规模分离制备。工厂大规模制备最常用的柱层析当属大孔树脂和微孔树脂，大孔树脂可以实现粗分，微孔树脂可以相对实现细分。但是，由于大孔树脂和微孔树脂理论塔板数不高，只能适用于一小部分化合物的工业化分离纯化，且需要选择好恰当的树脂型号。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种快速制备异淡红乳菇素的方法。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种制备异淡红乳菇素的方法，包括如下步骤：步骤S1、绒白乳菇子实体的提取干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。步骤S2、LX-68大孔树脂富集上样和吸附：计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。步骤S3、MCIGELCHP20P微孔树脂纯化上样和吸附：计算需要使用的MCIGELCHP20P微孔树脂，然后将该MCIGELCHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集4.2～4.5BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即得到异淡红乳菇素。进一步地，步骤S1采用95％乙醇提取。进一步地，步骤S1每公斤子实体使用5L95％乙醇。进一步地，步骤S1共浸泡提取3次，每次12h。进一步地，步骤S2按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的LX-68大孔树脂。进一步地，步骤S3按照每100gLX-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的MCIGELCHP20P微孔树脂。本专利技术提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。附图说明图1是异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式。图2是异淡红乳菇素的HPLC色谱图，A为异淡红乳菇素对照品，B为本专利技术制备得到的异淡红乳菇素。图3是3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的HPLC色谱图，A为3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯对照品，B为本专利技术制备得到的3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。具体实施方式一、实验材料LX-68大孔树脂购自郑州和成新材料科技有限公司；MCIGELCHP20P微孔树脂购自三菱化学；绒白乳菇新鲜子实体采自云南，洗净后风干。二、实验方法和实验结果1、绒白乳菇子实体的提取干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用95％乙醇常温浸泡提取，每公斤子实体使用5L的95％乙醇，共浸泡提取3次，每次12h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。2、LX-68大孔树脂富集上样和吸附：按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后将该LX-68大孔树脂装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。3、MCIGELCHP20P微孔树脂纯化上样和吸附：按照每100gLX-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的MCIGELCHP20P微孔树脂，然后将该MCIGELCHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，分别收集4.2～4.5BV、7.6～8.0BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即分别得到异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。使用HPLC法分别测定上述方法制备得到的异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的纯度，色谱柱采用AgilentZORBAXExtend-C18(4.6×250mm，5μm)，流动相及洗脱梯度为40min内乙腈浓度从0上升至100％，流速为1.0mL/min，异淡红乳菇素检测波长为215nm，3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯检测波长为255nm，供试品溶液的浓度为1mg/mL，上样量为10μL。结果本专利技术方法制备得到的异淡红乳菇素的HPLC归一化纯度为99.2％，3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的HPLC归一化纯度为99.5％。色谱图如图2、3所示。综上可见，本专利技术提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析，仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99％以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯，制备方法简单，应用前景广阔。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备异淡红乳菇素的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、绒白乳菇子实体的提取干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。步骤S2、LX‑68大孔树脂富集上样和吸附：计算需要使用的LX‑68大孔树脂，然后装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7‑7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX‑68大孔树脂富集液。步骤S3、MCI GEL CHP20P微孔树脂纯化上样和吸附：计算需要使用的MCI GEL CHP20P微孔树脂，然后将该MCI GEL CHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用30％甲醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用60％甲醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集4.2～4.5BV的60％甲醇洗脱液，浓缩干燥即得到异淡红乳菇素。...

【技术特征摘要】
1.一种制备异淡红乳菇素的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、绒白乳菇子实体的提取干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液，脱脂棉过滤备用。步骤S2、LX-68大孔树脂富集上样和吸附：计算需要使用的LX-68大孔树脂，然后装填在长径比为5:1的树脂柱内，在吸附流速为1.5BV/h的条件下上样，上样结束后关闭树脂柱的阀门，静置吸附0.5h；洗脱：先用40％乙醇以3BV/h洗脱流速洗脱2h，再用75％乙醇以4BV/h洗脱流速进行洗脱，收集7-7.5BV的75％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，得到LX-68大孔树脂富集液。步骤S3、MCIGELCHP20P微孔树脂纯化上样和吸附：计算需要使用的MCIGELCHP20P微孔树脂，然后将该MCIGELCHP20P微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢珊珊，
申请(专利权)人：青海七彩花生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：青海,63