一种快速收集昆虫病原线虫的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速收集昆虫病原线虫的方法。将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫的海绵培养基装入筛网中，绑紧，按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。本发明专利技术能够方便快捷的将海绵固体培养基中的昆虫病原线虫清洗干净，并且在整个清洗过程中不会对昆虫病原线虫造成损害，成活率达到95％以上。而其他条件，比如转速高的话，线虫的死亡率上升，而转速低的话，影响线虫的洗出率，还有筛网网孔大小，加水多少，以及转停比，清洗时间都对线虫的存活率以及洗出率造成比较大的影响。

【技术实现步骤摘要】
一种快速收集昆虫病原线虫的方法
本专利技术属于生物农药领域，具体涉及一种快速收集昆虫病原线虫的方法。
技术介绍
：昆虫病原线虫是一种生物活体制剂，作为新型生物农药已广泛用于防治农林、牧草、花卉和卫生等重要害虫。昆虫病原线虫能够主动搜寻寄主昆虫，对于防治蛀干及地下害虫的幼虫效果明显，产生很大的经济、生态和社会效益。昆虫病原线虫的感染期幼虫是昆虫病原线虫生活史中唯一能在寄主昆虫体外存活的龄期，是商业化生产和商品化制剂的主要活性成分。昆虫病原线虫的产业化培养是昆虫病原线虫推广及商业化应用的基础。昆虫病原线虫可以通过寄主昆虫进行活体培养，亦可以在体外通过固体培养基培养或用发酵罐进行液体培养。固体培养基(如海绵)培养具有共生细菌型变的影响小、技术要求低、资本投入低、规模小时失败的风险较低等优点。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种快速收集昆虫病原线虫的方法。本专利技术的快速收集昆虫病原线虫的方法，包括以下步骤：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫的海绵培养基装入筛网中，绑紧，按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。优选，清洗后的含有海绵培养基的筛网再按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀，如此再重复若干次。优选为1次，总计经过3次清洗，洗出率可达90％。优选，所述的将含有海绵培养基的筛网是放入洗衣机的洗衣桶内，然后按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例加水到洗衣桶内。优选，将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫的海绵培养基装入网孔大小为60目的筛网中，绑紧，置于洗衣机的洗衣桶内，加水，加水的量是海绵培养基质量的10倍，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为40rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈)，清洗45分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。本专利技术能够方便快捷的将海绵固体培养基中的昆虫病原线虫清洗干净，并且在整个清洗过程中不会对昆虫病原线虫造成损害，存活率达到95％以上。而在其他条件，比如转速高的话，线虫的死亡率上升，而转速低的话，影响线虫的洗出率，还有筛网网孔大小，加水多少，以及转停比，清洗时间都对线虫的存活率以及洗出率造成比较大的影响。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1：第一次清洗：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫-斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)的海绵培养基3kg(清洗线虫前取样检查海绵培养基中昆虫病原线虫的存活情况，每克海绵培养基含有昆虫病原线虫总数约30万头，存活率95％以上)装入网孔大小为60目的筛网中，绑紧，置于洗衣机的洗衣桶内，加水30L，开启洗衣机，搅拌转速为40rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转1.5s，停1.5s)，清洗45分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。第一次清洗，洗出率(洗出的线虫/总线虫数)为55％左右，存活率为95％以上，清洗过程不会对昆虫病原线虫的存活率产生影响。第二次清洗：然后再将第一次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水30L，开启洗衣机，搅拌转速为40rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转1.5s，停1.5s)，清洗45分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。第三次清洗：然后再将第二次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水30L，开启洗衣机，搅拌转速为40rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转1.5s，停1.5s)，清洗45分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。清洗3kg海绵培养基1次可以收集昆虫病原线虫约4-6亿头，每克海绵培养基含有昆虫病原线虫总数约20万头，清洗3次后，收集到的昆虫病原线虫总数增多，昆虫病原线虫洗出率接近90％，每克昆虫病原线虫沉淀含昆虫病原线虫约4百万头，存活率95％以上，本专利技术的清洗过程不会对昆虫病原线虫的存活率产生影响。实施例2：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫-斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)的海绵培养基3kg装入网孔大小为60目的筛网中，绑紧，置于洗衣机的洗衣桶内，加水24L，开启洗衣机，搅拌转速为30rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转2s，停2s)，清洗50分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。洗出率(洗出的线虫/总线虫数)为50％左右，存活率为95％以上，清洗过程不会对昆虫病原线虫的存活率产生影响。第二次清洗：然后再将第一次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水24L，开启洗衣机，搅拌转速为30rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转2s，停2s)，清洗50分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。第三次清洗：然后再将第二次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水24L，开启洗衣机，搅拌转速为30rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈，换算即转2s，停2s)，清洗50分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。清洗3kg海绵培养基1次可以收集昆虫病原线虫约4-6亿头，每克海绵培养基含有昆虫病原线虫总数约20万头，清洗3次后，收集到的昆虫病原线虫总数增多，昆虫病原线虫洗出率接近90％，每克昆虫病原线虫沉淀含昆虫病原线虫约4百万头，存活率95％以上，本专利技术的清洗过程不会对昆虫病原线虫的存活率产生影响。实施例3：第一次清洗：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫-斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)的海绵培养基3kg装入网孔大小为60目的筛网中，绑紧，置于洗衣机的洗衣桶内，加水36L，开启洗衣机，搅拌转速为50rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈)，清洗40分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。洗出率(洗出的线虫/总线虫数)为50％左右，存活率为95％以上，清洗过程不会对昆虫病原线虫的存活率产生影响。第二次清洗：然后再将第一次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水36L，开启洗衣机，搅拌转速为50rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈)，清洗40分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。第三次清洗：然后再将第二次清洗后的含有海绵培养基的筛网置于洗衣机的洗衣桶内，加水36L，开启洗衣机，搅拌转速为50rpm，转停比为1:1(转一圈，停一圈)，清洗40分钟后，洗衣机排出的液体进入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。清洗3kg海绵培养基1次可以收集昆虫病原线虫约4-6亿头，每克海绵培养基含有昆虫病原线虫总数约20万头，清洗3次后，收集本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速收集昆虫病原线虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫的海绵培养基装入筛网中，绑紧，按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。

【技术特征摘要】
1.一种快速收集昆虫病原线虫的方法，其特征在于，包括以下步骤：将海绵作为固体培养基培养的含有昆虫病原线虫的海绵培养基装入筛网中，绑紧，按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀。2.根据权利要求1所述的快速收集昆虫病原线虫的方法，其特征在于，清洗后的含有海绵培养基的筛网再按照海绵培养基：水质量比为1:8～12的比例将含有海绵培养基的筛网置于水，然后在搅拌条件下进行清洗，搅拌转速为30～50rpm，转停结合，清洗40～50分钟后，过滤，将滤液排入沉降箱中沉淀，收集底层的昆虫病原线虫沉淀，如此再重复...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜珣，韩日畴，
申请(专利权)人：广东省生物资源应用研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44