本发明专利技术公开一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,所述方法包括如下:步骤(1):蘑菇种植双孢蘑菇挑选种类并在蘑菇种植设施中种植培育试样,步骤(2):取样在双胞蘑菇采摘阶段,按时间先后划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段进行蘑菇取样。步骤(3):分析挑取不同发育阶段蘑菇的菌褶,统计不同发育阶段菌褶上发育出孢子梗的担子数量及不同担子的比例。步骤(4):确定最佳获取时期根据步骤(3)结果确定至少一个发育阶段为最佳获取时期。步骤(5):大批量采取担孢子同核体。本发明专利技术利用蘑菇处于内菌幕初现期,来获取双孢蘑菇担孢子同核体,能够大大提高获取的效率。
【技术实现步骤摘要】
一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法
本专利技术涉及蘑菇栽培育种和改良
,具体涉及高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法。
技术介绍
双孢蘑菇Agaricusbisporus(Lange)Sing,又称双孢菇、洋菇(台湾)。它在分类学上隶属于真菌门(Eumycota)、担子菌纲(Basidiomycetes)、伞菌目(Agaricales)、蘑菇科(黑伞科)(Agaricaceae)、蘑菇属(黑伞属)(Agaricus)。双孢蘑菇(Agaricusbisporus)是世界上人工栽培最广泛、产量最高、消费量最大的食用菌,具有重要的经济价值。我国自20世纪30年代引入栽培以来,已在全国各地推广种植,其中种植面积较多的有福建、山东、河南和浙江等省。双孢蘑菇是具有不同交配类型生活史的不同自然居群的物种,它分别具有次级同宗配合的交配类型-生活史,异宗配合的交配类型-生活史,以及同时具有次级同宗配合和异宗配合的双重生活史。这3种生活史主要依据其担子产生担孢子的数量和担孢子的核型是同核体还是异核体来划分。现在人们所栽培的全部品种,以及绝大部分野生居群都有属于双孢蘑菇原变种生活史,这一变种,它包括99%的法国野生居群,加拿大Alberta居群,加利福尼亚海滨居群,英国,以色列,荷兰等居群。这一变种的特征是子实体的每个担子几乎都只产生2个担孢子,且担子核减数分裂后形成的四个子核,不是随机地分别成对进入两个担子,而是非姊妹核配成一对进入一个担孢子,这样产生的担孢子都是异核体,孢子萌发形成异核体菌落,所以这个变种主要行次级同宗配合的交配类型生活史,Elliott对双孢蘑菇担子种类的统计结果为双孢担子产生概率为95%,三孢担子产生概率为4.5%,四孢担子产生概率为0.5%。1972年Raper,Elliott等人对双孢蘑菇生活史进行了详细的研究,并利用遗传标记作分析的工具,揭示了蘑菇杂交育种存在两个障碍:一是它具有独特的遗传特性,使担子上的两个孢子大多具有异核而自身可育;二是它的同核体与异核体间没有形态上的差异,即异核体也无锁状联合现象并且由于世界双孢蘑菇野生资源分缺乏,给双孢蘑菇菌种改良和选育工作带来了相当大的困难。目前双孢蘑菇同核体获得方法有原生质体法、单孢分离法。单孢子分离法通过观察分离的担子生长速度和形态挑选出单孢同核体,由于同核体数量稀少,据统计同核孢子约占孢子总数的5.6%,因此单孢分离耗时费力。现有技术缺乏一种能够高效获取效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足,本专利技术根据双孢蘑菇不同发育时期的同核率不同,通过对发育时期的选择,来获取双孢蘑菇担孢子,可有效提高同核体孢子获取效率。为了实现上述目的,本专利技术采取的技术方案是:一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,所述方法包括如下:步骤(1):蘑菇种植双孢蘑菇挑选种类并在蘑菇种植设施中种植培育试样。上述种植设施为常规蘑菇种植设施。步骤(2):取样在双胞蘑菇采摘阶段,按时间先后划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段进行蘑菇取样。步骤(3):分析挑取不同发育阶段蘑菇的菌褶,以蘑菇内菌幕的形态将发育阶段划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,统计不同发育阶段菌褶上发育出孢子梗的担子数量及不同担子的比例。步骤(4):确定最佳获取时期根据步骤(3)结果确定所述的内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段中至少一个发育阶段为最佳获取时期。步骤(5):大批量采取担孢子同核体根据步骤(4)确定的最佳获取时期,对剩余蘑菇进行大批量采取担孢子同核体。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:所述双孢蘑菇品种为W192。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:确定最佳获取时期为内菌幕初现期。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:内菌幕初现期的双孢蘑菇子双孢担子产生概率为75%,三孢担子产生概率为25%,四孢担子产生概率为0%。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:所述分析过程步骤如下:a取样,采摘不同发育阶段的双孢蘑菇子实体,包括内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期,牙签挑取不同发育阶段菌褶,避免划伤需观察的菌褶部位;b预固定,2.5%的戊二醛溶液中4℃过夜或2h以上;c漂洗,倒掉固定液,用0.1M、pH7的磷酸缓冲液漂洗三次,每次十五分钟;d再固定,1%饿酸溶液固定1-2h,置于通风橱内;e漂洗,重复步骤C;f脱水,所述梯度脱水为梯度酒精脱水;g过度,使用v/v为1:1的乙醇和乙酸乙戊酯混合液处理30分钟,纯乙酸乙戊酯处理1h;h:临界点干燥;I:利用离子溅射仪在样品表面喷上一层导电金。观察:将处理过的菌褶平放到粘在有导电性和粘性的炭膜的扫描电子显微镜样品台上;统计不同发育阶段菌褶上发育出孢子梗的担子数量及不同担子的比例。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:所述步骤(5)中至少重复循环实施步骤(2)、步骤(3)、步骤(4)至少一次。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:所述酒精脱水步骤为依次使用浓度为50%、70%、80%、90%、95%的酒精浸泡15min;100%浸泡20min。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:蘑菇内菌幕初现期的内菌幕形状为圆环状并环绕包裹菌柄。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:所述蘑菇内菌幕初现期的内菌幕最下端的高度与菌褶的高度差大于0.2-0.5mm,所述内菌幕形成的圆环宽度为所述菌柄直径的0.2-0.5倍。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:实施所述方法的系统包括临界点干燥仪(EmitechK850)、离子溅射仪(HitachiE1045)、扫描电子显微镜(HitachiTM3000)。作为优选,本专利技术提供的的方法进一步设置为:上述种植设施由多个种植组件拼接而成,上述种植组件包括底板,上述底板中央纵向设置有蘑菇条播箱,上述条播箱内种植有蘑菇。用于将蘑菇间隔成行种植,方便检测和收割。上述蘑菇的上空悬设有丝杠,丝杠两端设有与底板竖直相连的支撑座;上述丝杠上设有可沿丝杠运动的滚珠丝杠移动台,上述移动台的一侧设有蘑菇切割装置,上述移动台的另一侧设有蘑菇检测装置,上述蘑菇检测装置的后端还设有蘑菇收集装置,上述蘑菇检测装置的前端设有控制装置;移动台带动蘑菇检测装置依次检测蘑菇,蘑菇符合收割要求的时候,控制器控制蘑菇切割装置割断蘑菇,同时将蘑菇推到一侧设置的蘑菇收集装置中。控制装置,其包括控制器;上述控制器连接滚珠丝杠移动台的移动电机;蘑菇切割装置,其包括盘刀,上述盘刀通过转轴与从动轮相连,上述从动轮通过皮带与主动轮相连,上述主动轮与盘刀电机相连,上述盘刀电机的前端设有推板,上述盘刀电机的后端与电动水平推拉杆相连,上述盘刀电机的底部设有滑板,上述滑板底部设有滚轮或滚珠,上述滚轮设于滑槽中;上述滑槽设于安装板上。上述盘刀电机和电动水平推拉杆通过电路与控制器相连。用于割断蘑菇。上述蘑菇检测装置包括至少一个激光三维扫描仪或者非接触式高度检测仪,上述激光三维扫描仪或者非接触式高度检测仪上设有用于发射激光或者射线到蘑菇上并用于检测内菌幕初现期的内菌幕最下端的高度与菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:所述方法包括如下:步骤(1):蘑菇种植双孢蘑菇挑选种类并在蘑菇种植设施中种植培育试样;步骤(2):取样在双胞蘑菇采摘阶段,按时间先后划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段进行蘑菇取样;步骤(3):分析挑取不同发育阶段蘑菇的菌褶,以蘑菇内菌幕的形态将发育阶段划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,统计不同发育阶段菌褶上发育出孢子梗的担子数量及不同担子的比例;步骤(4):确定最佳获取时期根据步骤(3)结果确定所述的内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段中至少一个发育阶段为最佳获取时期;步骤(5):大批量采取担孢子同核体根据步骤(4)确定的最佳获取时期,对剩余蘑菇进行大批量采取担孢子同核体。
【技术特征摘要】
1.一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:所述方法包括如下:步骤(1):蘑菇种植双孢蘑菇挑选种类并在蘑菇种植设施中种植培育试样;步骤(2):取样在双胞蘑菇采摘阶段,按时间先后划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段进行蘑菇取样;步骤(3):分析挑取不同发育阶段蘑菇的菌褶,以蘑菇内菌幕的形态将发育阶段划分为内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,统计不同发育阶段菌褶上发育出孢子梗的担子数量及不同担子的比例;步骤(4):确定最佳获取时期根据步骤(3)结果确定所述的内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期五个发育阶段中至少一个发育阶段为最佳获取时期;步骤(5):大批量采取担孢子同核体根据步骤(4)确定的最佳获取时期,对剩余蘑菇进行大批量采取担孢子同核体。2.根据权利要求1所述的一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:所述双孢蘑菇品种为W192。3.根据权利要求1所述的一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:确定最佳获取时期为内菌幕初现期。4.根据权利要求3所述的一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:内菌幕初现期的双孢蘑菇子双孢担子产生概率为75%,三孢担子产生概率为25%,四孢担子产生概率为0%。5.根据权利要求1所述的一种高效获取双孢蘑菇担孢子同核体的方法,其特征在于:所述分析过程步骤如下:a取样,采摘不同发育阶段的双孢蘑菇子实体,包括内菌幕未现期,内菌幕初现期,内菌幕内凹期,内菌幕平坦期,内菌幕裂缝期,牙签挑取不同发育阶段菌褶,避免划伤需观察的菌褶部位;...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵建霞,
申请(专利权)人:浙江省农业科学院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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