与抗结核药物性肝损伤发生相关的UGT2基因多态性位点及其应用制造技术

本发明专利技术提供了与抗结核药物性肝损伤发生相关的UGT2基因多态性位点及其应用，具体地，本发明专利技术发现了一批与抗结核药物肝毒性相关性显著的基因多态性位点，实验结果表明，本发明专利技术提供的与抗结核药物性肝损伤发生相关的SNP位点能够作为敏感的抗结核药物性肝损伤易感生物标志，临床上可以用来评估使用抗结核药物的患者是否易于引发肝损伤，进而指导临床用药。

【技术实现步骤摘要】
与抗结核药物性肝损伤发生相关的UGT2基因多态性位点及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及与抗结核药物性肝损伤发生相关的药物代谢基因多态性位点。
技术介绍
由服用处方药或非处方药所造成的肝脏损伤，正成为世界范围内日益关注的医疗卫生问题。已有报道显示至少有1000种药物可引起肝脏毒性。药物性肝损伤是在药物研发过程中最受食品和药品监督管理局(FDA)关注的问题，是导致新药被淘汰，药物从市场召回，以及药物使用过程中增加临床监测的重要原因。但是，目前依靠动物实验的临床前期研究很难发现药物肝毒性，而且根据一般临床研究的规模，也常常不易检出药物的肝毒性，通常只有在大规模人群使用后，才会发现药物所造成的肝损伤。然而，到目前为止有关于药物性肝损伤的危险因素，临床特征以及潜在机制的研究报道甚少。因此，研究开发更加早期的药物肝损伤的危险因素及确立易感人群的筛选方法十分有必要。在所有可造成肝损伤的药物当中，对抗结核类药物的报道相当普遍。抗结核药物成为公认的易于导致肝脏损伤的一类药物，且与其他多种药物引起的肝脏损伤具有相似机制和病理学改变。目前，临床常用的一线抗结核药物有异烟肼(INH，H)、利福平(RFP，R)、吡嗪酰胺(PZA，Z)、乙胺丁醇(EMB，E)和链霉素(SM，S)。WHO推荐的针对结核病初治标准治疗方案为：异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇联合使用2个月作为加强期，然后异烟肼和利福平联用4个月作为巩固期。TOSTMANN等研究发现，在WHO推荐的标准抗结核药物治疗的情况下，抗结核药物性肝损(ANTI-TUBERCULOSISDRUG-INDUCEDHEPATOTOXICITY,ATDH)发生率在2％至28％之间。这个数字很大程度上取决于研究者对肝毒性的定义以及被研究人群的种族。在这些研究中，研究者发现亚洲人的发病率最高。META分析显示中国人服用抗结核药物引发肝损伤的发生率在3.6％至16.7％之间，平均发生率在10％。目前，我国的结核发病仍具有绝对发病人数多、流动人口结核病、耐药结核病及合并艾滋感染率低的特点，这一特点适宜进行人群临床研究，并易于控制各种混杂因素对研究结果的影响。因此在中国以抗结核药物为模型进行药物肝脏毒性的研究具有独特的优势。此外，药物性肝损害的发生，常导致结核病化疗过程中部分病人治疗方案的减弱甚至中断，严重影响病人的预后，更有因急性肝损伤导致肝功能衰竭甚至死亡的可能。因此，早期识别肝损伤易感人群至关重要，不仅可以提高抗结核治疗的有效性，还避免了中断治疗的病人产生耐药的可能性，也对结核病疫情的控制提供了助力，具有积极的社会意义和经济价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供与抗结核药物性肝损伤发生相关的药物代谢基因多态性位点、相应检测试剂及其用途，以便能够对抗结核药物肝毒性易感性进行判断。本专利技术的第一方面，提供了UGT2基因和/或其检测试剂的用途，用于制备试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒用于检测被检测对象对抗结核药物肝毒性的易感性。在另一优选例中，所述UGT2基因选自下组：UGT2B4基因、UGT2A1基因或其组合。在另一优选例中，所述UGT2基因包括选自下组的一个或多个基因位点：(1)UGT2B4基因rs1966151；以及(2)UGT2A1基因rs11249454。在另一优选例中，所述检测试剂包括检测选自下组的一个或多个基因位点的检测试剂：(1)UGT2B4基因rs1966151；以及(2)UGT2A1基因rs11249454。在另一优选例中，所述抗结核药物选自下组：异烟肼(INH，H)、利福平(RFP，R)、吡嗪酰胺(PZA，Z)、乙胺丁醇(EMB，E)和链霉素(SM，S)。在另一优选例中，所述被检测对象包括：人或非人哺乳动物(如家畜、家禽、实验动物等)。在另一优选例中，所述试剂或试剂盒还包括具有选自下组的一个或多个基因位点的核苷酸和/或其检测试剂：NR1I2：rs6785049NR1I2：rs2276707；和NAT2*6：rs1799930。在另一优选例中，如果所述被检测对象具有选自下组的一个或多个突变基因位点，则说明该对象对抗结核药物性肝损(ANTI-TUBERCULOSISDRUG-INDUCEDHEPATOTOXICITY,ATDH)易感：UGT2B4基因上rs1966151位点为C；和UGT2A1基因上rs11249454位点为A。在另一优选例中，如果所述被检测对象还具有选自下组的一个或多个突变基因位点，则说明该对象对抗结核药物性肝损(ANTI-TUBERCULOSISDRUG-INDUCEDHEPATOTOXICITY,ATDH)易感：NR1I2基因上rs6785049位点为G；NR1I2基因上rs2276707位点为T；和NAT2*6基因上rs1799930位点为A。在另一优选例中，所述的试剂包括引物、探针、芯片、或抗体。在另一优选例中，所述的试剂盒含有一种或多种选自下组的试剂：(A)用于基因检测的特异性引物；(B)用于基因检测的特异性探针；(C)用于基因检测的芯片；(D)用于检测突变的基因所对应的氨基酸突变的特异性抗体。在另一优选例中，所述试剂或试剂盒用于实时荧光定量PCR检测。在另一优选例中，所述实时荧光定量PCR中，退火温度为60-67℃之间，PCR扩增产物长度为80-300bp。在另一优选例中，所述实时荧光定量PCR中，荧光探针退火温度为60-70℃之间。在另一优选例中，所述探针的双末端进行化学基团的修饰，5'端修饰有荧光激发基团，3端修饰有荧光淬灭基团。在另一优选例中，所述检测为辅助性检测。本专利技术的第二方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括UGT2基因检测试剂。在另一优选例中，所述UGT2基因选自下组：UGT2B4基因、UGT2A1基因或其组合。在另一优选例中，所述检测试剂包括检测选自下组的一个或多个基因位点的检测试剂：(1)UGT2B4基因rs1966151；以及(2)UGT2A1基因rs11249454。在另一优选例中，所述试剂或试剂盒包括检测选自下组的一个或多个突变的基因位点的检测试剂：UGT2B4基因上rs1966151位点为T→C；和UGT2A1基因上rs11249454位点为A→G。在另一优选例中，所述试剂或试剂盒还包括检测选自下组的一个或多个突变的基因位点的检测试剂：NR1I2基因上rs6785049位点为G→A；NR1I2基因上rs2276707位点为C→T；NAT2*6基因上rs1799930位点为G→A。在另一优选例中，所述的试剂盒含有一种或多种选自下组的试剂：(A)用于基因检测的特异性引物；(B)用于基因检测的特异性探针；(C)用于基因检测的芯片；(D)用于检测突变的基因所对应的氨基酸突变的特异性抗体。本专利技术的第三方面，提供了一种体外检测样品是否存在单核苷酸变异的方法，包括步骤：(a)用特异性引物扩增样品的多核苷酸，得到扩增产物；和(b)检测扩增产物中是否存在以下单核苷酸变异：UGT2B4基因上rs1966151位点为T→C；和UGT2A1基因上rs11249454位点为A→G。在另一优选例中，所述步骤(b)还检测扩增产物中是否存在以下单核苷酸变异：NR1I2基因上rs6785049位点为G→A；NR1I2基因上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.UGT2基因和/或其检测试剂的用途，用于制备试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒用于检测被检测对象对抗结核药物肝毒性的易感性。

【技术特征摘要】
1.UGT2基因和/或其检测试剂的用途，用于制备试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒用于检测被检测对象对抗结核药物肝毒性的易感性。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述UGT2基因选自下组：UGT2B4基因、UGT2A1基因或其组合。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述UGT2基因包括选自下组的一个或多个基因位点：(1)UGT2B4基因rs1966151；以及(2)UGT2A1基因rs11249454；或者所述检测试剂包括检测选自下组的一个或多个基因位点的检测试剂：(1)UGT2B4基因rs1966151；以及(2)UGT2A1基因rs11249454。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗结核药物选自下组：异烟肼(INH，H)、利福平(RFP，R)、吡嗪酰胺(PZA，Z)、乙胺丁醇(EMB，E)、链霉素(SM，S)及其组合。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂或试剂盒还包括具有选自下组的一个或多个基因位点的核苷酸和/或其检测试剂：NR1I2：rs6785049NR1I2：rs2276707；和NAT2*6：rs1799930。6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，如果所述被检测对象具有选自下组的一个或多个突变基因位点，则说明该对象对抗结核药物性肝损(ANTI-TUBERCULOSISDRUG-INDUCEDHEPATOTOXICITY,ATDH)易感：UGT2B4基因上rs1966151位点为C...

【专利技术属性】
技术研发人员：帅怡，周彤，肖萍，王彦琴，霍倩，娄丹，吴凡，仲伟鉴，沈鑫，吴哲渊，
申请(专利权)人：上海市预防医学研究院，上海善准生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31