一种甘油三酯测定试剂盒及其测定方法技术

技术编号:19712370 阅读:59 留言:0更新日期:2018-12-08 18:21
本发明专利技术提供一种甘油三酯测定试剂盒,包括液体单试剂R1,试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶、甘油激酶、甘油磷酸氧化酶、过氧化物酶、哌嗪‑1,4‑二乙磺酸、NaOH、4‑氨基安替比林、三磷酸腺苷、N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐或N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3'5‑二甲氧基苯胺钠盐、谷氨酸钠、醋酸镁、黄素腺嘌呤二核苷酸、聚乙二醇、甜菜碱溶液。本发明专利技术属于生物检测技术领域,本发明专利技术提供的甘油三酯测定试剂盒在提高试剂稳定性的同时显著增强了抗干扰能力,用于甘油三酯的测定准确性好。

【技术实现步骤摘要】
一种甘油三酯测定试剂盒及其测定方法
本专利技术属于生物检测
,尤其涉及一种甘油三酯测定试剂盒及其测定方法。
技术介绍
甘油三酯(TG)是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,是人体内含量最多的脂类,是体内能量的主要来源,也是一项重要的临床血脂常规测定指标。甘油三酯增高容易造成“血稠”,不仅与动脉粥样硬化性心血管疾病风险密切相关,还与糖尿病患者微血管并发症的发病风险密切相关,因此受到人们的日益重视。血清中甘油三脂(TG)的测定方法主要包括化学法、酶法和色谱法3大类。化学法和色谱法因操作步骤繁多、技术要求高而不适于临床常规检测中广泛应用。目前临床应用最广泛的是酶法检测血清TG水平,此方法分为一步法(对应使用的是单试剂)和两步法(对应使用的是双试剂),虽然方法略有不同,但反应原理相同:脂蛋白酯酶(LPL)催化甘油三酯水解成甘油和脂肪酸,甘油激酶(GK)催化甘油磷酸化,产生甘油-3-磷酸,在甘油磷酸氧化酶(GPO)催化下被氧化为磷酸二羟丙酮和H2O2,H2O2与4-氨基安替比林(4-AAP)和TOOS或其他酚类化合物在过氧化物酶(POD)的作用下发生Trinder反应形成醌亚胺化合物,其颜色深浅与样品中甘油三酯浓度成正比。目前已产业化开发的主要为双试剂的TG检测试剂,而单试剂的TG检测试剂主要存在稳定性和抗干扰能力较差的问题。中国专利申请CN104498586公开了一种稳定性强的单试剂血清甘油三酯检测试剂,包括4-羟乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸钠缓冲液、脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、过氧化物酶、甘油-3-磷酸氧化酶、牛血清白蛋白、4-氨基安替比林、十二烷基硫酸三乙醇胺、辅酶FAD、聚乙烯醇和过苯甲酸钠等。试剂中添加十二烷基硫酸三乙醇胺,能有效的保护脂蛋白脂肪酶的稳定性;试剂中加入了辅酶FAD和聚乙烯醇,能够有效地保护甘油-3-磷酸氧化酶中酶的活性基团使酶不易失活,从而提高酶的稳定性;试剂中加入了过苯甲酸钠,能够提高试剂对还原性物质的抗干扰能力和稳定性。现有的甘油三酯测定试剂盒使用的稳定剂种类较多,虽然可以提高稳定性,但抗干扰能力往往不够理想,尤其对羟苯磺酸钙等药物的抗干扰能力较差。因此,提供一种稳定性好且抗干扰能力好的甘油三酯测定试剂盒具有重要意义。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的问题(抗干扰能力不够理想),本专利技术提供一种甘油三酯测定试剂盒,通过添加一定浓度的聚乙二醇6000和甜菜碱,在提高试剂盒稳定性的同时显著增强了抗干扰能力,可显著降低胆红素、血红蛋白和羟苯磺酸钙等的干扰,用于甘油三酯的测定准确性好。本专利技术的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。本专利技术提供一种甘油三酯测定试剂盒,包括液体单试剂R1,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶0.1~5KU/L、甘油激酶0.1~2KU/L、甘油磷酸氧化酶1~10KU/L、过氧化物酶0.1~8KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸5~15g/L、NaOH1~5g/L、4-氨基安替比林50~80mg/L、三磷酸腺苷0.2~2g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.2~1g/L、谷氨酸钠1~10g/L、醋酸镁1~10g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸1~10mg/L、聚乙二醇2~12g/L、甜菜碱溶液0.2~0.8ml/L。优选地,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶0.5~2KU/L、甘油激酶0.3~1KU/L、甘油磷酸氧化酶2~8KU/L、过氧化物酶1~4KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸6~10g/L、NaOH1.5~4g/L、4-氨基安替比林55~70mg/L、三磷酸腺苷0.5~1.5g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.3~0.8g/L、谷氨酸钠2~5g/L、醋酸镁2~5g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸2~5mg/L、聚乙二醇4~10g/L、甜菜碱溶液0.4~0.8ml/L。更优选地,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶1KU/L、甘油激酶0.5KU/L、甘油磷酸氧化酶4KU/L、过氧化物酶2KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸8.462g/L、NaOH2.238g/L、4-氨基安替比林61mg/L、三磷酸腺苷0.6g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.45g/L、谷氨酸钠3g/L、醋酸镁3.22g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸3mg/L、聚乙二醇5g/L、甜菜碱溶液0.6ml/L。优选地,所述试剂R1还包括如下组分及其浓度:山梨酸钾0.8~1.2g/L。更优选地,所述试剂R1还包括如下组分及其浓度:山梨酸钾1g/L。优选地,所述聚乙二醇为聚乙二醇6000。优选地,所述甜菜碱溶液的浓度为1~5mol/L。更优选地,所述甜菜碱溶液的浓度为2mol/L。此外,本专利技术还提供甘油三酯测定试剂盒的测定方法,包括如下步骤:分离血清样品,向血清样品中加入试剂R1,混匀,孵育6~10min后,在546nm处测定吸光度值,计算得到甘油三酯的含量。反应一步进行,方便快捷,检测灵敏度高,且试剂稳定性和抗干扰能力好。与现有技术相比,本专利技术的有益效果是:本专利技术通过在甘油三酯测定试剂中添加一定浓度的聚乙二醇6000和甜菜碱,可通过提高试剂R1中甘油磷酸氧化酶的酶活稳定性而增强甘油三酯测定试剂盒的稳定性,测定试剂盒于2~8度条件的保质期长达12个月以上。进一步的,通过干扰物试验,发现使用聚乙二醇6000作为稳定剂的同时添加少量甜菜碱则可显著增强对胆红素、血红蛋白和羟苯磺酸钙的抗干扰能力,用于甘油三酯的测定准确性好。附图说明图1配方二的反应曲线图。图2配方六的反应曲线图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术中,所涉及的组分均为常规市售产品,或可通过本领域的常规技术手段获得。过氧化物酶PEO-302购自东洋纺(上海)生物科技有限公司。实施例一甘油三酯测定试剂盒(配方二)甘油三酯测定试剂盒包括试剂R1,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶1KU/L、甘油激酶0.5KU/L、甘油磷酸氧化酶2KU/L、过氧化物酶PEO-3022KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸8.462g/L、NaOH2.238g/L、4-氨基安替比林61mg/L、三磷酸腺苷0.6g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.45g/L、谷氨酸钠3g/L、醋酸镁3.22g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸3mg/L、山梨酸钾1g/L、聚乙二醇60005g/L、甜菜碱溶液0.6ml/L。甜菜碱溶液的浓度为2mol/L。实施例二甘油三酯测定试剂盒甘油三酯测定试剂盒包括试剂R1,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶2KU/L、甘油激酶1KU/L、甘油磷酸氧化酶1KU/L、过氧化物酶PEO-3021KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸10g/L、NaOH4g/L、4-氨基安替比林70mg/L、三磷酸腺苷1g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.8g/L、谷氨酸钠5g/本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种甘油三酯测定试剂盒,其特征在于:包括液体单试剂R1,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶0.1~5KU/L、甘油激酶0.1~2KU/L、甘油磷酸氧化酶1~10KU/L、过氧化物酶0.1~8KU/L、哌嗪‑1,4‑二乙磺酸5~15g/L、NaOH 1~5g/L、4‑氨基安替比林50~80mg/L、三磷酸腺苷0.2~2g/L、N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐或N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3'5‑二甲氧基苯胺钠盐0.2~1g/L、谷氨酸钠1~10g/L、醋酸镁1~10g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸1~10mg/L、聚乙二醇2~12g/L、甜菜碱溶液0.2~0.8ml/L。

【技术特征摘要】
1.一种甘油三酯测定试剂盒,其特征在于:包括液体单试剂R1,所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶0.1~5KU/L、甘油激酶0.1~2KU/L、甘油磷酸氧化酶1~10KU/L、过氧化物酶0.1~8KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸5~15g/L、NaOH1~5g/L、4-氨基安替比林50~80mg/L、三磷酸腺苷0.2~2g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.2~1g/L、谷氨酸钠1~10g/L、醋酸镁1~10g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸1~10mg/L、聚乙二醇2~12g/L、甜菜碱溶液0.2~0.8ml/L。2.根据权利要求1所述的甘油三酯测定试剂盒,其特征在于:所述试剂R1包括如下组分及其浓度:脂蛋白酯酶0.5~2KU/L、甘油激酶0.3~1KU/L、甘油磷酸氧化酶2~8KU/L、过氧化物酶1~4KU/L、哌嗪-1,4-二乙磺酸6~10g/L、NaOH1.5~4g/L、4-氨基安替比林55~70mg/L、三磷酸腺苷0.5~1.5g/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺钠盐0.3~0.8g/L、谷氨酸钠2~5g/L、醋酸镁2~5g/L、黄素腺嘌呤二核苷酸2~5mg/L、聚乙二醇4~10g/L、甜菜碱溶液0.4~0.8ml/L。3.根据权利要求2所述的甘油三酯测...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘光华杨玉军陈楚华刘秋明
申请(专利权)人:广州市伊川生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:广东,44

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