一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法及应用技术

一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，属于生物活性肽的制备领域。制备方法如下：(1)称取猪皮明胶，配制猪皮明胶溶液；(2)向猪皮明胶溶液中添加蛋白酶进行酶水解；(3)加热灭活蛋白酶，终止水解，冷却，离心制得猪皮明胶肽溶液；(4)真空冷冻干燥猪皮明胶肽溶液，制得具有对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽。该方法制备的猪皮明胶肽，具有可食用性、安全性和易被人体吸收的优点，来源广泛，成本低，制备方法简单，可大规模生产；所制备的猪皮明胶肽对成骨细胞的增殖具有促进作用，可以为生产具有预防或治疗骨质疏松症效果的功能性食品或保健品提供新原料。

【技术实现步骤摘要】
一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法及应用
本专利技术属于生物活性肽的制备领域，涉及一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法及应用。背景技述骨质疏松症是一种骨量减少、骨组织微观结构退化、骨脆性增加、且易于发生骨折的一种骨骼疾病，是一种与衰老有关的退行性骨病，主要发病人群是中老年人，尤其是绝经后的妇女。据统计，目前全世界范围内的骨质疏松症患者大约达到2.5亿。在超过50岁的老年人群中，女性骨质疏松患者所占比例高达1/3，而男性骨质疏松患者所占比例则达1/5。我国骨质疏松症的发病率和死亡率都高于西方发达国家。目前，临床上多采用雌激素、双膦酸盐和降钙素等药物来预防和治疗骨质疏松症，但是这些药物的长期服用，常常会伴随有毒副作用。因此，十分有必要制备一种天然来源、无毒副作用、且对骨健康有积极作用的功能性食品或保健品。明胶是动物胶原蛋白的衍生产品，主要来源于陆生动物、水产动物的皮、骨等组织，尤其是猪皮、猪骨。明胶水解物又称胶原多肽，是明胶在蛋白酶的作用下、经过一定程度的水解后而得到的衍生产物。不同来源明胶的结构不同，不同来源的蛋白酶水解能力不同，因此会导致明胶肽的结构和功能有差异。通常，明胶肽的分子质量低，极易溶于水，更易于被人体吸收。研究结果表明，明胶及其水解物对骨的代谢与健康有积极作用。例如，去卵巢大鼠口服胶原蛋白水解物后，大鼠的骨矿物质密度和含量增加；牛胶原水解物可以促进成熟软骨细胞分泌Ⅱ型胶原；明胶水解物能够促进骨的代谢，促进骨的更新，还能够刺激成骨细胞分化，导致细胞中骨钙素分泌增多。有临床报告称，骨关节炎患者每天服用10克胶原蛋白水解物六个月后，关节功能得到改善，关节疼痛得到减轻。以上实例说明，猪皮来源的明胶肽在预防和治疗骨质疏松症方面有良好的应用前景。可是，现有猪皮明胶肽的生物活性的开发工作，主要集中于其抗氧化作用和抗肌肉疲劳作用。尚未见有关猪皮明胶肽对成骨细胞增殖促进作用的相关开发。因此，开发、制备一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽，具有广阔的应用和市场前景。
技术实现思路
本专利技术针对现有活性肽制备技术中缺乏对成骨细胞增殖具有促进作用的明胶肽的制备方法的不足，提供一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法。为了实现上述目的，本专利技术可以制备对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽，所述的制备方法包含以下步骤：步骤一：称取猪皮明胶，用去离子水配制成明胶溶液。步骤二：向明胶溶液中添加木瓜蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶，蛋白酶水解猪皮明胶，调节体系pH值，在40℃的温度下水解0.25小时至15小时。步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至沸腾15分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心处理收集上清液，得到猪皮明胶肽溶液。步骤四：通过真空冷冻干燥处理猪皮明胶肽溶液，恒重后于-20℃保存，得到对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽。优选地，步骤一中明胶溶液的质量浓度为5％(w/w)。优选地，步骤二中添加木瓜蛋白酶来水解猪皮明胶，所述木瓜蛋白酶的添加量为5千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为6.0，水解时间为12.5小时。优选地，步骤二中添加中性蛋白酶水解猪皮明胶，所述中性蛋白酶的添加量为6千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为7.0，水解时间为12.5小时优选地，步骤二中添加碱性蛋白酶水解猪皮明胶，所述碱性蛋白酶的添加量为7千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为8.5，水解时间为12.5小时。优选地，步骤三中离心处理收集上清液的离心速率为5000转/分钟，离心时间为20分钟。优选地，步骤四中所述的真空冷冻干燥过程中，控制真空度为0.01毫帕至0.5毫帕,干燥时间为8小时至18小时,冷阱温度为-72℃至-45℃。本专利技术获得的猪皮明胶肽的应用领域，是它可以作为功能性组分而应用于功能性食品或保健食品，从而促进成骨细胞的增殖。本专利技术与现有的技术相比，具有的有益效果是：(1)本专利技术中所用的猪皮明胶是常见的食品原料，具有可食用性与安全性，对人体无害，来源丰富，成本低。(2)本专利技术所涉及的猪皮明胶肽，制备方法简单、安全、可大规模生产，且所产生的猪皮明胶肽比猪皮明胶更容易被人体吸收。(3)本专利技术所涉及的猪皮明胶肽对成骨细胞增殖具有促进作用，为生产具有预防或治疗骨质疏松症效果的功能性食品或保健品提供新原料。附图说明图1是本专利技术的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽制备方法的流程图。图2是不同浓度的猪皮明胶肽作用于成骨细胞不同时间时后对成骨细胞增殖促进作用的柱状图。具体实施方式下面通过附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步说明，但并不局限于此，凡对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。具体实施方式一：本实施方式中对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，包含以下步骤：步骤一：称取猪皮明胶，用去离子水配制成明胶溶液。步骤二：向明胶溶液中添加木瓜蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶，蛋白酶水解猪皮明胶，调节体系pH值，在40℃的温度下水解0.25小时至15小时。步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至沸腾15分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心处理收集上清液，得到猪皮明胶肽溶液。步骤四：通过真空冷冻干燥处理猪皮明胶肽溶液，恒重后于-20℃保存，得到对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽。具体实施方式二：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤一中明胶溶液的质量浓度为5％(w/w)。具体实施方式三：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤二中添加木瓜蛋白酶水解猪皮明胶，所述木瓜蛋白酶的添加量为5千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为6.0，水解时间为12.5小时。具体实施方式四：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤二中添加中性蛋白酶水解猪皮明胶，所述中性蛋白酶的添加量为6千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为7.0，水解时间为12.5小时。具体实施方式五：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤二中添加碱性蛋白酶水解猪皮明胶，所述碱性蛋白酶的添加量为7千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为8.5，水解时间为12.5小时。具体实施方式六：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤三中离心处理收集上清液的离心速率为5000转/分钟，离心时间为20分钟。具体实施方式七：具体实施方式一所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，步骤四中所述的真空冷冻干燥过程中，控制真空度为0.01毫帕至0.5毫帕,干燥时间为8小时至18小时,冷阱温度为-72℃至-45℃。具体实施方式八：本实施方式将具体实施方式一所制得的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽作为功能性组分应用于功能性食品或保健食品中。实施例1本实施例记载的是一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，所述的制备步骤包括：步骤一：称取猪皮明胶，用去离子水配制成质量浓度为5％(w/w)的明胶溶液。步骤二：向明胶溶液中添加木瓜蛋白酶水解猪皮明胶，木瓜蛋白酶添加量为5千本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包含以下步骤：步骤一：称取猪皮明胶，用去离子水配制成明胶溶液；步骤二：向明胶溶液中添加木瓜蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶，蛋白酶水解猪皮明胶，调节体系pH值，在40℃的温度下水解0.25小时至15小时；步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至沸腾15分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心处理收集上清液，得到猪皮明胶肽溶液；步骤四：通过真空冷冻干燥处理猪皮明胶肽溶液，恒重后于‑20℃保存，得到对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽。

【技术特征摘要】
1.一种对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包含以下步骤：步骤一：称取猪皮明胶，用去离子水配制成明胶溶液；步骤二：向明胶溶液中添加木瓜蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶，蛋白酶水解猪皮明胶，调节体系pH值，在40℃的温度下水解0.25小时至15小时；步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至沸腾15分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心处理收集上清液，得到猪皮明胶肽溶液；步骤四：通过真空冷冻干燥处理猪皮明胶肽溶液，恒重后于-20℃保存，得到对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽。2.根据权利要求1所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽的制备方法，其特征在于，步骤一中明胶溶液的质量浓度为5％(w/w)。3.根据权利要求1所述的对成骨细胞增殖具有促进作用的猪皮明胶肽制备方法，其特征在于，步骤二中添加木瓜蛋白酶水解猪皮明胶，所述木瓜蛋白酶的添加量为5千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为6.0，水解时间为12.5小时。4.根据权利要求1所述的对成骨细胞增殖具有促进...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵新淮，卢明，马春敏，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23