本发明专利技术公开一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法，首先选育出生长状态良好，生命力旺盛，代谢能力强的荧光假单胞杆菌，然后通过调配培养基，荧光假单胞杆菌进行菌种活化，为挑选最佳的菌种做准备；然后通过将其接种于特制的种子培养基上，扩大优良的荧光假单胞杆菌的菌群数量，培养至对数期，得到种子菌液，最后将种子菌液接种至特制的发酵培养基上。本发明专利技术提供的培养基既能够为荧光假单胞杆菌提供充足的营养，又能促进荧光假单胞杆菌加快生长代谢速度，从而得到含有莫匹罗星的发酵液，发酵液中莫匹罗星含量为6000ug/mL以上。
【技术实现步骤摘要】
一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法
本专利技术涉及药物领域，尤其涉及一种发酵培养基及由发酵培养基制备莫匹罗星的方法。
技术介绍
莫匹罗星，也称作假单胞菌酸A，是一种主要对革兰氏阳性菌[如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、肺炎克氏杆菌(Klebsiellapneumoniae)]和一些革兰氏阴性菌[如流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseriagonorrhoeae)]具有生长抑制作用的抗生素[A.Ward,D.M.Campoli-Richards,Drugs32,425-444(1986)]。通过抑制异亮氨酸-tRNA合酶，影响病原菌的肽合成。该抗生素的一个有利特征是它对人和动物具有非常低的毒性且其在埃姆斯(Ames)试验中为阴性，目前莫匹罗星多用于人的治疗，以治疗皮肤感染(例如脓疱病、脓皮病)、鼻和外耳感染、痤疮、烧伤、湿疹、牛皮癣、在溃疡情况中用于治疗二次感染，和用于预防医院感染。已知荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)能够产生莫匹罗星，但目前的制备方法发酵水平低，得到的发酵液中莫匹罗星的含量一般只为3000-4000ug/ml。
技术实现思路
为此，需要提供一种既能够为荧光假单胞杆菌提供充足的营养，又能促进荧光假单胞杆菌加快生长代谢速度的发酵培养基；同时还提供由发酵培养基制备莫匹罗星的方法，提高发酵液中莫匹罗星的含量。为实现上述目的，专利技术人提供了一种用于制备莫匹罗星的发酵培养基，所述发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：所述发酵培养基的PH值为6.0-7.0；所述生长促进剂为下列中的一种或两种的混合：亮氨酸或甜菜碱。本专利技术所述的发酵培养基不仅含有碳源，还含有氮源、无机盐、生长促进剂等组分，既能够为荧光假单胞杆菌提供充足的营养，又能促进荧光假单胞杆菌加快生长代谢速度，进而使发酵液中莫匹罗星的含量提高。优选的，所述碳源为下列中的一种或两种以上的混合：葡葡糖、蔗糖、甘油、豆油、花生油或淀粉。所述碳源为菌体生长繁殖提供所需的能量和合成菌体所需的碳成分。优选的，所述氮源为下列中的一种或两种以上的混合：酵母粉、酵母膏、玉米蛋白粉、黄豆饼粉、蛋白胨、棉子精粉或玉米浆。所述氮源用于构建菌体细胞物质(氨基酸、蛋白质和核酸等)。优选的，所述无机盐为下列中的一种或两种以上混合的盐：铵盐、钙盐、钠盐、钾盐、铁盐或磷盐。所述无机盐可构成菌体细胞成份,作为酶的组成部分、酶的激活剂或抑制剂，还可调节培养基的渗透压、PH、氧化还原电位等。优选的，所述消沫剂为有机硅消泡剂。更优选的，本专利技术的消泡剂为市售产品，采购于陶氏公司公司，牌号为P-2000。本专利技术还提供一种应用所述的发酵培养基制备莫匹罗星的方法，其包括以下步骤：1)筛选荧光假单胞杆菌：挑选生长状态良好的荧光假单胞杆菌；2)平皿培养：将步骤1)得到的荧光假单胞杆菌接种至灭菌过的平皿培养基上，在25～30℃下，培养15～24小时，得到涂布单菌落，取所述涂布单菌落3-5颗，每颗点种2-3粒，在25-30℃平皿培养基上培养15～24小时，得到点种单菌落；3)斜面培养：取步骤2)得到的所述点种单菌落，每颗添加1-1.5ml无菌水，待分散均匀后，取0.2-0.25ml含点种单菌落的无菌水接种至斜面培养基中，在25～30℃下，培养15～24小时，得到成熟斜面菌落，所述斜面培养基与步骤2)中所述平皿培养基的组分及含量均相同；4)摇瓶种子培养：将步骤3)中得到的成熟斜面菌落接种至摇瓶种子培养基中，在25-30℃下，在摇瓶培养设备中培养10-15h，得到摇瓶种子菌液；5)种子培养：将步骤4)得到的摇瓶种子菌液接种至种子培养基，培养至对数生长期，得到种子菌液；6)发酵培养：将步骤5)中培养至对数生长期的种子菌液接种至所述的发酵培养基上，在25-30℃下，培养60～120小时，收集产物，得到含有莫匹罗星的发酵液。本专利技术上述制备方法中，首先选育出生长状态良好，生命力旺盛，代谢能力强的荧光假单胞杆菌，然后通过调配培养基，在固体培养基对挑选出来的荧光假单胞杆菌进行菌种活化，为挑选最佳的菌种做准备；然后通过将其接种于特制的种子培养基上，在适宜的条件下培养，扩大优良的荧光假单胞杆菌的菌群数量，培养至对数期，得到种子菌液，最后将种子菌液接种至特制的发酵培养基上。本专利技术提供的培养基既能够为荧光假单胞杆菌提供充足的营养，又能促进荧光假单胞杆菌加快生长代谢速度，从而得到含有莫匹罗星的发酵液，发酵液中莫匹罗星含量为6000ug/mL以上。优选的，所述步骤2)的平皿培养基包括以下重量百分含量的组分：葡萄糖0.05-0.2％；蛋白胨0.5-1.5％；酵母粉0.2-0.8％；氯化钠0.5-1.5％；琼脂粉1.5-2.5％；余量为水；所述平皿培养基的pH值为6.5-7.5。该平皿培养基可使培育的菌落外观饱满。优选的，所述步骤4)的摇瓶种子培养基包括以下重量百分含量的组分：酵母粉1-2.5％；葡萄糖0.2-0.5％；磷酸氢二钠0.2-0.6％；磷酸二氢钾0.2-0.4％；消泡剂0.01-0.1％；余量为水；所述摇瓶种子培养基的pH值为6.0-7.0；所述消泡剂为有机硅消泡剂。该摇瓶种子培养基可为菌种提供充足的营养，使菌种生命力旺盛。优选的，所述步骤5)的种子培养基包括包括以下重量百分含量的组分：酵母粉1-2.5％；葡萄糖0.2-0.5％；磷酸氢二钠0.2-0.6％；磷酸二氢钾0.2-0.4％；消泡剂0.01-0.1％；余量为水；所述种子培养基的pH值为6.0-7.0。该种子培养基可为菌种提供充足的营养，使菌种生命力旺盛。优选的，所述步骤6)的发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：葡萄糖0.2-0.5％，甘油2-5％；豆油1-2.5％；黄豆饼粉4-8％；硫酸铵0.2-0.4％；氯化钠1-2％；无水氯化钙1-2％；碳酸钙0.1-0.3％，三氯化铁0.005-0.01％，甜菜碱0.4-0.65％；消泡剂0.01-0.02％；余量为水；所述发酵培养基的pH值为6.0-7.0。本专利技术的优点如下：1、本专利技术的发酵培养基既能够为荧光假单胞杆菌提供充足的营养，又能促进荧光假单胞杆菌加快生长代谢速度，从而使发酵液的莫匹罗星的含量高。2、本专利技术通过微生物特定条下发酵培养生产莫匹罗星。通过在平皿培养、斜面培养、摇瓶培养、种子培养和发酵培养等步骤中采用不同的培养基配方、工艺达到高产，使得发酵液中莫匹罗星含量为6000ug/mL以上。具体实施方式为详细说明技术方案的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例详予说明。本专利技术公开一种用于制备莫匹罗星的发酵培养基，所述发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：所述发酵培养基的PH值为6.0-7.0；所述生长促进剂为下列中的一种或两种的混合：亮氨酸或甜菜碱。实施例1：发酵培养基本实施例的发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：所述发酵培养基的PH值为6.0-7.0；实施例2：发酵培养基本实施例的发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：所述发酵培养基的PH值为6.0-7本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于制备莫匹罗星的发酵培养基，其特征在于：所述发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：
【技术特征摘要】
1.一种用于制备莫匹罗星的发酵培养基，其特征在于：所述发酵培养基包括以下重量百分含量的组分：所述发酵培养基的PH值为6.0-7.0；所述生长促进剂为下列中的一种或两种的混合：亮氨酸或甜菜碱。2.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于：所述碳源为下列中的一种或两种以上的混合：葡葡糖、蔗糖、甘油、豆油、花生油或淀粉。3.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于：所述氮源为下列中的一种或两种以上的混合：酵母粉、酵母膏、玉米蛋白粉、黄豆饼粉、蛋白胨、棉子精粉或玉米浆。4.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于：所述无机盐为下列中的一种或两种以上混合的盐：铵盐、钙盐、钠盐、钾盐、铁盐或磷盐。5.根据权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于：所述消沫剂为有机硅消泡剂。6.应用权利要求1-5之一所述的发酵培养基制备莫匹罗星的方法，其特征在于：其包括以下步骤：1)筛选荧光假单胞杆菌：挑选生长状态良好的荧光假单胞杆菌；2)平皿培养：将步骤1)得到的荧光假单胞杆菌接种至灭菌过的平皿培养基上，在25～30℃下，培养15～24小时，得到涂布单菌落，取所述涂布单菌落3-5颗，每颗点种2-3粒，在25-30℃平皿培养基上培养15～24小时，得到点种单菌落；3)斜面培养：取步骤2)得到的所述点种单菌落，每颗添加1-1.5ml无菌水，待分散均匀后，取0.2-0.25ml含点种单菌落的无菌水接种至斜面培养基中，在25～30℃下，培养15～24小时，得到成熟斜面菌落，所述斜面培养基与步骤2)中所述平皿培养基的组分及含量均相同；4)摇瓶种子培养：将步骤3)中得到的成熟斜面菌落接种至摇瓶种子培养基中，在25-30℃下，在摇瓶培养设备中培养10-15h，得到摇瓶种子菌液；5)种子培养：将步骤4)得到的摇瓶种子菌液接种...
【专利技术属性】
技术研发人员：张茂华，蒋永飞，蔡秀平，苏元佳，
申请(专利权)人：福建康鸿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35
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