一种纳豆激酶提取液及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种纳豆激酶提取液及其在制备皮肤损伤修复药物中的应用，涉及皮肤创伤修复技术领域。本发明专利技术所述纳豆激酶提取液能够减轻损伤皮肤周围的炎症反应，促进表皮生长和皮肤创面的修复，从而促进伤口愈合；还能够促进表皮生长向创缘生长，促进创面的修复；加速伤口愈合在皮肤的伤口愈合过程中能够明显增加干细胞的数量，促进皮肤细胞的增殖，加速伤口愈合；在皮肤伤口愈合过程中能够促进真皮组织中毛细血管的修复和再生，增加毛细血管的数量，促进伤口愈合。

【技术实现步骤摘要】
一种纳豆激酶提取液及其应用
本专利技术属于皮肤创伤修复
，具体涉及一种纳豆激酶提取液及其应用。
技术介绍
皮肤是人体第一道免疫防线，能够抵御病原体入侵，但位于体表，极易受损。皮肤伤口愈合是由多种细胞、因子共同参与且相互作用的复杂过程。正因为皮肤伤口愈合的复杂性，烧伤、创伤、溃疡等造成的大面积皮肤缺损，形成的创面常常难以愈合，严重影响着人们健康和生活的质量，因此如何促进创面的愈合一直是研究的重点、热点。各种理化因素(如辐射、烧伤、机械损伤、紫外线长期照射等)均可导致皮肤损伤。辐射可以使得受照射皮肤组织中水分子发生电离作用并产生大量有毒自由基(如超氧自由基，水合电子，羟自由基等)，进而造成受照射的皮肤组织放射损伤(苏燎原、刘芬菊主编，医学放射生物学基础，2013年，14页，中国原子能出版社)。烧伤时，由于烧伤创面聚集大量白细胞，并进行吞噬而产生大量超氧自由基(杨红明等，中华烧伤杂志，1993年第五期)。超氧自由基若不及时清除，可以通过Fenton反应演变成毒性更强的羟自由基，该自由基是参与破坏细胞正常代谢的抽氢反应和加成反应的重要动因(刘树铮，医学放射生物学，北京，原子能出版社，2006)，从而使受损伤皮肤创面难以愈合。因此目前的皮肤损伤多利用自由基清除技术，但是利用该原理进行皮肤修复时，渗透性较差，清除深层组织中的自由基能力弱。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种纳豆激酶提取液及其在制备皮肤损伤修复药物中的应用，可加速皮肤损伤动物模型的创面愈合、促进血管生成、缩小创面的面积、促进皮肤细胞的增殖，还可以减轻皮肤损伤周围的炎症反应。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种从上述纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)发酵产物中提取得到的纳豆激酶提取液，所述纳豆激酶提取液中有效成分的分子量位于[10k，100k)区间内；纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)，保藏编号为CGMCCNo.14434。本专利技术还提供了上述纳豆激酶提取液的制备方法，包括以下步骤：(1)将上述纳豆激酶高产菌株UJS-1接种到LB固体培养基上进行活化培养，得活化菌株；(2)将步骤(1)所述活化菌株的单菌落置于种子培养液中进行种子培养，得种子菌液；所述种子培养液包括以下质量浓度的组分：0.2～1.5％的葡萄糖，0.4～1.8％的蛋白胨，0.1～0.8％的NaC1，0.02～0.2％的酵母提取物和0.2～0.8％的牛肉膏，余量为水，pH值6.8～7.3；(3)将步骤(2)得到的所述种子菌液接种到发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基包括以下质量体积比的原料：赤豆粉2～8％，葡萄糖1～5％，NaCl0.3～0.7％，K2HPO40.05～0.2％，KH2PO40.05～0.2％，CaCl20.005～0.02％和MgSO4.7H2O0.01～0.1％，余量为水；(4)将步骤(3)得到的所述发酵液经离心后超滤，收集分子量位于[10k，100k)区间内的组分，得纳豆激酶提取液。优选的，步骤(1)所述活化培养的温度为35～40℃，湿度为60～70％RH，培养时间为24～48h。优选的，步骤(2)所述种子培养为摇床培养。优选的，所述摇床培养的温度为35～40℃，转速为200～250rpm/min，培养时间为10～20h。优选的，步骤(3)所述发酵的温度为35～40℃，时间为20～30h。优选的，步骤(4)所述离心的转速为8000～15000rpm，离心时间为5～12min。优选的，步骤(4)所述超滤时的离心转速为3000～3750rpm，离心时间为6～8h。本专利技术还提供一种纳豆激酶提取液或利用上述制备方法制备得到的纳豆激酶提取液在制备促进皮肤损伤修复药物中的应用。本专利技术提供了一种纳豆激酶提取液及其在制备皮肤损伤修复药物中的应用。利用所述纳豆激酶提取液能够减轻损伤皮肤周围的炎症反应，促进表皮生长和皮肤创面的修复，从而促进伤口愈合；还能够促进表皮生长向创缘生长，促进创面的修复；加速伤口愈合在皮肤的伤口愈合过程中能够明显增加干细胞的数量，促进皮肤细胞的增殖，加速伤口愈合；在皮肤伤口愈合过程中能够促进真皮组织中毛细血管的修复和再生，增加毛细血管的数量，促进伤口愈合。附图说明图1为纳豆激酶提取液配制方法流程图；图2为纳豆激酶提取液对皮肤全层切除模型的皮肤修复作用图；图3为纳豆激酶提取液对皮肤全层切除模型的皮肤创面计算伤口愈合百分率曲线图；图4为皮肤全层切除模型的皮肤组织进行HE染色图；图5为免疫组化检测CK10、CK19在皮肤全层切除模型的皮肤组织中的表达图；图6为免疫组化检测Nanog、Oct4在皮肤全层切除模型的皮肤组织中的表达图；图7为免疫荧光检测CD31在皮肤全层切除模型的皮肤组织中的表达图。具体实施方式本专利技术提供了一株纳豆激酶高产菌株，所述纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体保藏地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.14434，保藏日期为2017年07月17日。本专利技术提供了一种从纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)发酵产物中提取得到的纳豆激酶提取液，所述纳豆激酶提取液中有效成分的分子量位于[10k，100k)区间内；纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)，保藏编号为CGMCCNo.14434。本专利技术所述纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，具体保藏地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.14434，保藏日期为2017年07月17日。本专利技术还提供了上述纳豆激酶提取液的制备方法，包括以下步骤：(1)将上述纳豆激酶高产菌株UJS-1接种到LB固体培养基上进行活化培养，得活化菌株；(2)将步骤(1)所述活化菌株的单菌落置于种子培养液中进行种子培养，得种子菌液；所述种子培养液包括以下质量浓度的组分：0.2～1.5％的葡萄糖，0.4～1.8％的蛋白胨，0.1～0.8％的NaC1，0.02～0.2％的酵母提取物和0.2～0.8％的牛肉膏，余量为水，pH值6.8～7.3；(3)将步骤(2)得到的所述种子菌液接种到发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基包括以下质量体积比的原料：赤豆粉2～8％，葡萄糖1～5％，NaCl0.3～0.7％，K2HPO40.05～0.2％，KH2PO40.05～0.2％，CaCl20.005～0.02％和MgSO4.7H2O0.01～0.1％，余量为水；(4)将步骤(3)得到的所述发酵液经离心后超滤，收集分子量位于[10k，100k)区间内的组分，得纳豆激酶提取液。在本专利技术的制备方法中，将纳豆激酶高产菌株UJS-1接种到LB固体培养基上进行活化培养，得活化菌株。本专利技术对所述接种的接种量以及LB固体培养基并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可，所述LB固体培养基的配方优选为氯化钠1克、蛋白胨1克、酵母提取物0.5g、琼脂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从纳豆激酶高产菌株UJS‑1(Bacillussubtilis.)发酵产物中提取得到的纳豆激酶提取液，所述纳豆激酶提取液中有效成分的分子量位于[10k，100k)区间内；纳豆激酶高产菌株UJS‑1(Bacillussubtilis.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14434。

【技术特征摘要】
1.一种从纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)发酵产物中提取得到的纳豆激酶提取液，所述纳豆激酶提取液中有效成分的分子量位于[10k，100k)区间内；纳豆激酶高产菌株UJS-1(Bacillussubtilis.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14434。2.权利要求1所述纳豆激酶提取液的制备方法，包括以下步骤：(1)将权利要求1所述纳豆激酶高产菌株UJS-1接种到LB固体培养基上进行活化培养，得活化菌株；(2)将步骤(1)所述活化菌株的单菌落置于种子培养液中进行种子培养，得种子菌液；所述种子培养液包括以下质量浓度的组分：0.2～1.5％的葡萄糖，0.4～1.8％的蛋白胨，0.1～0.8％的NaC1，0.02～0.2％的酵母提取物和0.2～0.8％的牛肉膏，余量为水，pH值6.8～7.3；(3)将步骤(2)得到的所述种子菌液接种到发酵培养基中进行发酵，得发酵液；所述发酵培养基包括以下质量体积比的原料：赤豆粉2～8％，葡萄糖1～5％，NaCl0.3～0.7％，K2HPO40.05～0.2％，KH2PO40.05～0.2％，CaCl20....

【专利技术属性】
技术研发人员：龚爱华，张斌，唐宇，刘玉婉，别庆丽，董海新，周建伟，金呈强，李晓哲，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32