黄夹次甙乙多晶型的晶型特征、制备方法及在抗癌上的应用技术

本发明专利技术提供了化合物黄夹次甙乙(17beta‑Neriifolin)(以下简称17bNF)的多种晶型制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。本发明专利技术中首次提供在自然界不存在的17bNF的四种无溶剂化晶型、无定形粉末、以及11种包括乙醇等溶剂化的多晶型固体的制备方法，以及通过X射线粉末衍射等晶体学研究手段对这些晶型所做的鉴定和表征。此外，通过裸鼠动物试验对其中的5种晶型固体进行了抗癌活性试验，因此提供了17bNF各种晶型在抗肿瘤、抗癌症上的应用。

【技术实现步骤摘要】
黄夹次甙乙多晶型的晶型特征、制备方法及在抗癌上的应用专利
本专利技术涉及17bNF的多种在自然界不存在的固态形式，即17bNF的多晶型物和无定形物的发现以及这些新形式的制备方法。专利技术背景癌细胞是变异的细胞，可无限增值，侵蚀周围健康的组织细胞，并且容易转移和扩散。目前，常规治疗癌症的药物在杀死癌细胞的同时都会对健康的组织细胞产生严重的损伤。专利号CN104736157A记载了一种能够摧毁肿瘤细胞而对正常细胞和组织不会造成重大损害的活性药物，命名为17β-neriifolin，即本专利技术所述的17bNF。17bNF的化学名为:(3β,5β)-3-[(6-deoxy-3-O-methyl-α-L-glucopyranosyl)oxy]-14-hydroxycard-20(22)-enolide。具有以下结构：不同17bNF晶型由于分子构象不同，晶体的物理性质会有差异，在相关药物制备中也会影响药物的稳定性，溶解性、溶解速度以及活性等。制剂专家可根据不同晶型的特征选用和设计不同的辅料和药物剂型。在制备过程中，不同晶型的形成也会受到溶液量以及环境条件的影响。在实验室中，晶体的不同晶型可通过这些晶型的热行为及X射线粉末衍射等进行区分，热行为可通过热重分析(TGA)和差示扫描热量法(DSC)等技术进行测量。本专利技术提供了在自然界不存在的17bNF的四种无溶剂化晶型，分别定义为晶型Ⅰ(17bNF-I)、晶型Ⅱ(17bNF-II)、晶型Ⅲ(17bNF-III)和晶型Ⅳ(17bNF-IV)；；十一种溶剂化合物，分别定义为晶型0(17bNF-0)、晶型Ⅴ、晶型Ⅵ、晶型Ⅶ、晶型Ⅷ、晶型Ⅸ、晶型Ⅹ、晶型Ⅺ、晶型Ⅻ、晶型ⅩⅢ和晶型ⅩⅣ。还有无定型的17bNF，以及它们的制备方法、表征数据以及应用方法。专利技术概述本专利技术的一个方面提供了一种选自以下的数据为特征的17bNF新晶型：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.0°±0.2°、12.0°±0.2°、13.4°±0.2°、14.9°±0.2°、16.0°±0.2°、17.1°±0.2°、18.1°±0.2°、19.6°±0.2°、20.0°±0.2°、21.1°±0.2°、25.5°±0.2°；吸热峰约为156℃和208℃的差示扫描量热热谱；在200℃前失重约6.4％的TGA图谱，该晶型为乙醇溶剂化合物。所述固态晶型定义为17bNF晶型0(17bNF-0)。将该晶型加热至180-200℃脱除溶剂后转变为17bNF晶型Ⅰ(17bNF-I)。在另一方面，本专利技术提供了制备具有17bNF晶型0(17bNF-0)的至少一种特征(诸如此处公开的XRPD峰和/或DSC峰和/或TGA数据)的方法，包括如下步骤：取17bNF固体在50％-95％的乙醇水溶液中加热回流溶解；将上述溶液在室温条件下静置析晶；过滤并收集、干燥固体。在另一方面，本专利技术提供以选自以下数据为特征的17bNF新晶型：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.1°±0.2°、11.2°±0.2°、11.4°±0.2°、12.2°±0.2°、15.5°±0.2°、16.4°±0.2°、17.5°±0.2°、19.7°±0.2°、20.4°±0.2°，吸热峰约为228℃的DSC热谱，以及在250℃前失重约0.6％的TGA图谱。所述固态晶型定义为晶型Ⅰ(17bNF-I)。在另一方面，本专利技术提供了制备具有晶型Ⅰ(17bNF-I)的至少一种特征的17bNF的方法，包括如下步骤：将17bNF粉末或包括17bNF-0在内的晶型固体在甲醇、乙醇、四氢呋喃、丙酮、异丁醇、乙酸异丙酯、2-丁酮、异丙醇、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、甲基叔丁基醚、水等溶剂中溶解或混悬；分别过滤上述溶液或混悬液，取滤液；取17bNF的甲醇溶液，或者将17bNF的甲醇溶液分别与17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％的比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的乙醇溶液，或者将17bNF的乙醇溶液分别与17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的异丙醇混悬液滤液分别与17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的四氢呋喃溶液，或者将17bNF的四氢呋喃溶液分别与17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液，或者将17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液分别与17bNF的丙酮溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的乙腈混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的丙酮溶液，或者将17bNF的丙酮溶液分别与17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲苯混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的异丁醇溶液，或者将17bNF的异丁醇溶液分别与17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的水混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的乙酸异丙酯溶液与17bNF的2-丁酮溶液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的乙腈混悬液滤液分别与17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲基叔丁基醚混本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以乙醇溶剂化合物存在的17bNF晶型0(简称17bNF‑0)的特征为：粉末X‑射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.0°±0.2°、12.0°±0.2°、13.4°±0.2°、14.9°±0.2°、16.0°±0.2°、17.1°±0.2°、18.1°±0.2°、19.6°±0.2°、20.0°±0.2°、21.1°±0.2°、25.5°±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在146‑166℃及198‑218℃处有吸热峰；热重(TGA)图谱在200℃前约有6.4％的失重，其相关表征图谱特征如图1、图2、图3。

【技术特征摘要】
1.以乙醇溶剂化合物存在的17bNF晶型0(简称17bNF-0)的特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.0°±0.2°、12.0°±0.2°、13.4°±0.2°、14.9°±0.2°、16.0°±0.2°、17.1°±0.2°、18.1°±0.2°、19.6°±0.2°、20.0°±0.2°、21.1°±0.2°、25.5°±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在146-166℃及198-218℃处有吸热峰；热重(TGA)图谱在200℃前约有6.4％的失重，其相关表征图谱特征如图1、图2、图3。2.一种权利要求1的17bNF乙醇溶剂化合物晶型0(17bNF-0)的制备方法，包括以下步骤：a、取少量17bNF固体在50％-95％的乙醇水溶液中加热回流溶解；b、将a步骤的溶液在室温条件下静置析晶；c、过滤并收集、干燥固体。3.权利要求1的晶型加热至180-200℃脱除乙醇溶剂后转变为17bNF的一种无溶剂化晶型固体——晶型Ⅰ(简称17bNF-I)。其晶型特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.1°±0.2°、11.2°±0.2°、11.4°±0.2°、12.2°±0.2°、15.5°±0.2°、16.4°±0.2°、17.5°±0.2°、19.7°±0.2°、20.4°±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在218-238℃处有吸热峰；热重(TGA)图谱在250℃前约有0.6％的失重。其相关表征图谱特征如图4、图5、图6。4.权利要求3的17bNF无溶剂化晶型Ⅰ(17bNF-I)的其它制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF粉末或包括17bNF-0在内的晶型固体，分别在甲醇、乙醇、四氢呋喃、丙酮、异丁醇、乙酸异丙酯、2-丁酮、异丙醇、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、甲基叔丁基醚、水等溶剂中溶解或混悬；b、分别过滤步骤a中的溶液或混悬液，取滤液；c、取17bNF的甲醇溶液，或者将17bNF的甲醇溶液分别与17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％的比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的乙醇溶液，或者将17bNF的乙醇溶液分别与17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的异丙醇混悬液滤液分别与17bNF的四氢呋喃溶液、17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的异丙醇混悬液滤液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的四氢呋喃溶液，或者将17bNF的四氢呋喃溶液分别与17bNF的丙酮溶液、17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液，或者将17bNF的乙酸乙酯混悬液滤液分别与17bNF的丙酮溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的乙腈混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的丙酮溶液，或者将17bNF的丙酮溶液分别与17bNF的异丁醇溶液、17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲苯混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的异丁醇溶液，或者将17bNF的异丁醇溶液分别与17bNF的乙酸异丙酯溶液、17bNF的乙腈混悬液滤液、17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的水混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的乙酸异丙酯溶液与17bNF的2-丁酮溶液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或将17bNF的乙腈混悬液滤液分别与17bNF的2-丁酮溶液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；或取17bNF的2-丁酮溶液，或者将17bNF的2-丁酮溶液分别与17bNF的甲苯混悬液滤液、17bNF的水混悬液滤液、17bNF的甲基叔丁基醚混悬液滤液按30％:70％至70％:30％比例混合，或者更好是按40％:60％至60％:40％比例混合，或者再更好是按50％:50％比例混合；d、将上述17bNF在单一溶剂中的溶液或混悬滤液，或17bNF在二种溶剂中的溶液或混悬滤液的混合液在自然环境或类似条件下挥干。5.一种权利要求3的17bNF无溶剂化晶型Ⅰ(17bNF-I)的另一种制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF-0固体混悬在乙醚中不断搅拌；b、过滤混悬液，收集并干燥固体，制得17bNF无溶剂化晶型Ⅰ。6.无溶剂化的17bNF晶型Ⅱ(简称17bNF-II)特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.4°±0.2°、10.1°±0.2°、12.6°±0.2°、12.8°±0.2°、13.3°±0.2°、14.8°±0.2°、15.5°±0.2°、16.5°±0.2°、17.8°±0.2°、18.1°±0.2°、18.4°±0.2°、18.7°±0.2°、19.3°±0.2°、20.2°±0.2°、21.9°±0.2°、22.4°±0.2°、23.4°±0.2°、24.3°±0.2°、25.8°±0.2°、26.4°±0.2°、27.0°±0.2°、27.5°±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在78-98℃、140-160℃及221-241℃处有吸热峰，在144-164℃有放热峰；热重(TGA)图谱在100℃前约有2.9％的失重，其相关表征图谱特征如图7、图8、图9。7.一种权利要求6的17bNF晶型Ⅱ(17bNF-II)的制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF-0固体混悬在水中不断搅拌；b、过滤混悬液，收集并干燥固体，制得17bNF晶型Ⅱ(17bNF-II)。8.权利要求6的晶型(17bNF-II)经TGA加热到150-170℃后转变为17bNF的另一种无溶剂化晶型——晶型Ⅲ(简称17bNF-III)。其晶型特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为6.1±0.2°、6.4±0.2°、9.7±0.2°、11.4±0.2°、12.2±0.2°、12.8±0.2°、15.3±0.2°、15.6±0.2°、16.3±0.2°、16.6±0.2°、16.8±0.2°、17.4±0.2°、19.5±0.2°、20.3±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在219-239℃处有吸热峰。其相关表征图谱特征如图10、图11、图12。9.一种权利要求8的17bNF无溶剂化晶型Ⅲ(17bNF-Ⅲ)的制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF-0固体混悬在乙腈中不断搅拌；b、过滤混悬液，收集并干燥固体，制得17bNF的乙腈溶剂化合物；c、将该溶剂化合物加热到150-170℃脱溶剂得到17bNF无溶剂化晶型Ⅲ(17bNF-III)。10.以无溶剂化晶型形态存在的17bNF的又一种晶型——晶型Ⅳ(简称17bNF-IV)的特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为5.6°±0.2°、12.6°±0.2°、13.5°±0.2°、14.2°±0.2°、14.5°±0.2°、15.3°±0.2°、16.5°±0.2°、18.1°±0.2°、18.8°±0.2°、19.6°±0.2°、19.9°±0.2°、20.6°±0.2°、22.0°±0.2°、24.2°±0.2°、24.9°±0.2°、25.4°±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在180-200℃及222-242℃处有吸热峰；加热至180-200℃后晶型转变为17bNF晶型Ⅰ。其相关表征图谱特征如图13、图14、图15。11.一种权利要求10的17bNF无溶剂化晶型Ⅳ(17bNF-IV)的制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF-0固体在甲基叔丁基醚中混悬制得混悬液；b、将混悬液进行搅拌打浆处理；更好是加入少量晶种(17bNF-IV)；c、过滤混悬液，收集并干燥固体制得无溶剂化晶型Ⅳ(17bNF-IV)。12.以溶剂化合物形态存在的17bNF晶型Ⅴ的特征为：粉末X-射线衍射图谱特征峰2θ值主要为5.3±0.2°、10.6±0.2°、11.8±0.2°、12.1±0.2°、13.3±0.2°、14.3±0.2°、14.9±0.2°、15.9±0.2°、17.2±0.2°、17.4±0.2°、17.7±0.2°、18.0±0.2°、18.3±0.2°、25.6±0.2°；差示扫描量热法(DSC)图谱在98-118℃、144-164℃和217-237℃处有吸热峰；热重(TGA)图谱在140℃时约有5.6％的失重，在190℃时约有6.8％的失重。其相关表征图谱特征如图16、图17、图18。13.一种权利要求12的17bNF晶型Ⅴ的制备方法，包括以下步骤：a、将17bNF-0固体混悬在异丙醇中不断搅拌；b、过滤混悬液，收集并干燥固体，制得17bNF晶型Ⅴ。14.权利要求12的晶型经TGA加热到180-200℃后转变为17bNF的另一种溶剂化合物晶型——晶型Ⅵ。其晶型...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁纯，刘海滨，张泽明，宋国强，李雨珊，张伟强，
申请(专利权)人：恩智广州医药科技有限公司，恩智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44