一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针制备及检测甲状腺球蛋白抗体的方法技术

技术编号:19708647 阅读:34 留言:0更新日期:2018-12-08 16:49
本发明专利技术公开一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针制备及检测甲状腺球蛋白抗体的方法,利用抗原抗体特异性结合,建立一种甲状腺球蛋白抗体检测方法。本发明专利技术的甲状腺球蛋白抗体检测技术效果如下:1、首次提出了亚胺类吖啶探针与甲状腺球蛋白(Tg)(碘化糖蛋白)结合再与甲状腺球蛋白抗体结合在荧光倒置显微镜下观察甲状腺球蛋白抗体;2、利用光物理及光化学性质对探针与抗原结合作出判断;3、本发明专利技术有灵敏度高、简便快速、准确的特点,与传统的染料法比较为优越。

【技术实现步骤摘要】
一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针制备及检测甲状腺球蛋白抗体的方法
本专利技术涉及发光材料检测领域,具体涉及一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针制备方法及利用该生物技术探针检测甲状腺球蛋白抗体的方法。
技术介绍
甲状腺癌是内分泌系统中常见的一类恶性肿瘤,目前甲状腺癌的人群发病率为1/30万~1/20万。甲状腺球蛋白(Tg)是分化型甲状腺癌(DTC)的肿瘤标志物。甲状腺球蛋白(TG)常被临床用来作为监控DTC肿瘤复发的指标,但血清TG水平检测受抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、促甲状腺激素(TSH)等多种因素影响。检测血清Tg有助于对DTC复发和转移的诊断、病人预后的评价和监测治疗效果。目前临床上常用放射免疫分析法(RIA)和非放射性的免疫量度分析法(IMA)测量血清Tg。但这些方法存在较多技术问题,使其临床应用受到了限制,主要有:方法间的变异较大、灵敏度不够高、批内精确度不够好、高浓度Tg的钩变效应(hookeffect)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的干扰等。荧光探针是指具有荧光性质的化合物,其通过与待测物质相互络合反应,实现识别目标物质的目的,通过相应的荧光信号传导机制将这种识别信号转换成荧光发射波长的蓝移或红移的信号和荧光强度的变化,从而实现分子水平上的实时原位检测。吖啶及其衍生物是一类由蒽中间环上的一个碳原子被氮原子取代而形成的含氮的三元环化合物,又称氮蒽。吖啶最早是由CarlGräbe和HeinrichCaro在1871年从煤焦油中提取并获得发展。吖啶类化合物拥有特殊的结构,且有很好的光学活性,是一种非常具有潜力的荧光探针。甲状腺球蛋白(Tg)是分化型甲状腺癌(DTC)的肿瘤标志物。通过观察荧光化合物与蛋白质结合后,蛋白质结构产生的相关变化和其内源性荧光强度的变化情况,可以获很多有效实用的信息。对于阐明药物的药理作用、药代动力学特征及指导合理用药和新药的开发等方面也有非常重要的意义。蛋白质结构可以分为四个不同的结构。HSA属于简单蛋白,不同的物质在HSA上的结合位点有所不同,各个结合位点都有一定的特异性。本专利技术使用亚胺类吖啶化合物作为荧光探针与甲状腺球蛋白(Tg)结合,再与甲状腺球蛋白抗体结合,从而识别甲状腺球蛋白抗体,进而为诊断分化型甲状腺癌(DTC)提供依据。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种用于检测甲状腺球蛋白抗体的小分子荧光探针和应用。吖啶类的荧光反应体系较之其他的荧光化合物简单,不需要加入催化剂,在酸或者碱的体系中,就能发出强烈荧光,并且具有发光效率高,背景干扰小等特点,是一类具有广阔前途的荧光探针。本专利技术的另一目的是提供一类用于识别甲状腺球蛋白抗体的小分子荧光探针的合成方法,该方法具有操作方便、原料廉价、提纯简单等优点。本专利技术所采用的技术方案为:亚胺类吖啶衍生物荧光探针,其特征在于:该荧光探针具有如下结构,该荧光探针能与甲状腺球蛋白特异性结合,并能选择性识别识别甲状腺球蛋白抗体:本专利技术上述用于识别甲状腺球蛋白抗体的小分子荧光探针的合成方法,该方法步骤如下:(1)中间体化合物I的合成:在装有冷凝管和搅拌子的双颈瓶中加入3mmol吖啶酮,充N2,在氮气的气氛中加入6mlSOCl2,在105℃下回流3h,待反应结束后,冷却至室温,将反应液边搅拌边缓慢滴入冰水中,将冰,浓氨水和氯仿的混合液加入到上述液体中,分离氯仿层,干燥(无水硫酸镁),过滤,得到淡黄色液体,用乙酸乙酯:石油醚的体积比=1:2过柱色谱纯化,得到白色针状结晶,具有强烈的荧光,得中间体化合物I。(2)中间体化合物II的合成:将中间体化合物I在圆底烧瓶中在70℃下将1mmol9-氯吖啶溶于苯酚,加入2mmol碳酸铵,快速升温至120℃反应2h,待反应结束倒入10%的NaOH中,过滤,并用10%NaOH和水洗涤,得淡黄色固体,具有强蓝色荧光,得9-氨基吖啶中间体化合物II。(3)荧光探针III的合成:在圆底烧瓶中加入0.26mmol9-氨基吖啶溶于乙醇,在加入0.310mmol对羟基苯甲醛,在乙醇中80℃下回流4h。重结晶,得到所需荧光探针III。步骤(1)中柱色谱采用硅胶柱;乙酸乙酯:石油醚的体积比=1:2。步骤(1)中,吖啶酮和二氯亚砜的比值1mmol:3ml。步骤(2)中,中间体化合物I和碳酸铵的摩尔比为1:3。步骤(3)中,中间体化合物II和对羟基苯甲醛的摩尔比为1:1.5。本专利技术还提供上述小分子荧光探针用于结合甲状腺球蛋白,并特异性甲状腺球蛋白抗体。本专利技术具有以下有益效果:探针分子合成路线简单、反应条件温和、后处理简单方便。该类探针能成功结合甲状腺球蛋白并特异性识甲状腺球蛋白抗体。探针与甲状腺球蛋白结合之后,荧光强度发生了明显的变化,通过这种荧光变化,可以确定探针与甲状腺球蛋白成功结合。该类探针可以通过识别甲状腺球蛋白抗体技术,引入到目标抗体中,亚胺类吖啶化合物作为荧光探针与甲状腺球蛋白(Tg)结合,再与甲状腺球蛋白抗体结合,从而识别甲状腺球蛋白抗体,进而为诊断分化型甲状腺癌(DTC)提供依据。发展一种可用于识别甲状腺球蛋白抗体和相应具有特殊高表达的肿瘤细胞标记亚胺类吖啶类探针的光谱技术。附图说明图1本专利技术荧光探针和甲状腺球蛋白作用前后的荧光光谱图,横坐标为波长,纵坐标为荧光强度,荧光探针的浓度为1×10-5mol/ml,甲状腺球蛋白浓度为1×10-5mol/ml;图2本专利技术荧光探针与甲状腺球蛋白反应的动力学图谱,横坐标为时间,纵坐标为荧光强度,荧光探针的浓度为1×10-5mol/ml,甲状腺球蛋白浓度为1×10-5mol/ml;图3本专利技术荧光探针在不同PH中的荧光光谱图,横坐标为波长,纵坐标为归一化荧光强度,荧光探针的浓度为1×10-5mol/ml,甲状腺球蛋白浓度为1×10-5mol/ml。图4本专利技术荧光探针和甲状腺球蛋白作用后甲状腺球蛋白抗体结合后,在荧光倒置显微镜下图谱。具体实施方式下面的实施例将对本专利技术予以进一步的说明,但并不因此而限制本专利技术。实施例1:用于蛋白标记的小分子荧光探针的合成(1)中间体化合物I的合成:在装有冷凝管和搅拌子的双颈瓶中加入3mmol吖啶酮,充N2,在氮气的气氛中加入6mlSOCl2,在105℃下回流3h,待反应结束后,冷却至室温,将反应液边搅拌边缓慢滴入冰水中,将冰,浓氨水和氯仿(物质量比为1:1:1)的混合液加入到上述液体中,分离氯仿层,干燥(无水硫酸镁),过滤,得到淡黄色液体,用乙酸乙酯:石油醚的体积比=1:3过柱色谱纯化,得到白色针状结晶,具有强烈的荧光。中间体化合物I),产率86%。将中间体化合物I在圆底烧瓶中在70℃下将1mmol9-氯吖啶溶于苯酚,加入2mmol碳酸铵,快速升温至120℃反应2h,待反应结束倒入10%的NaOH中,过滤,并用10%NaOH和水洗涤,得淡黄色固体,具有强蓝色荧光。9-氨基吖啶中间体化合物II,产率93%。(2)荧光探针的合成:在圆底烧瓶中加入0.26mmol9-氨基吖啶溶于乙醇,在加入0.310mmol对羟基苯甲醛,在乙醇中80℃下回流4h。重结晶,得到所需荧光探针III。产率90%。实施例2:荧光探针与甲状腺球蛋白反应后的荧光变化Tris-HCl溶液配制为0.05mol/L、PH=7.4(内含浓度为0.1mol/L的NaCl)。在4ml的EP本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针,其特征在于:该荧光探针具有如下结构,该荧光探针能与甲状腺球蛋白特异性结合,并能选择性识别甲状腺球蛋白抗体:

【技术特征摘要】
1.一种亚胺类吖啶衍生物荧光探针,其特征在于:该荧光探针具有如下结构,该荧光探针能与甲状腺球蛋白特异性结合,并能选择性识别甲状腺球蛋白抗体:。2.一种权利要求1所述亚胺类吖啶衍生物荧光探针的合成方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)中间体化合物I的合成:在装有冷凝管和搅拌子的双颈瓶中加入3mmol吖啶酮,充N2,在氮气的气氛中加入6ml是SOCl2,在105℃下回流3h,待反应结束后,冷却至室温,将反应液边搅拌边缓慢滴入冰水中,将冰,浓氨水和氯仿的混合液加入到上述液体中,分离氯仿层,用无水硫酸镁干燥,过滤,得到淡黄色液体,用乙酸乙酯:石油醚的体积比=1:2过柱色谱纯化,得到白色针状结晶,具有强烈的荧光,得中间体化合物I;(2)中间体化合物II的合成:将中间体化合物I在圆底烧瓶中在70℃下将1mmol9-氯吖啶溶于苯酚,加入2mmol碳酸铵,快速升温至120℃反应2h,待反应结束...

【专利技术属性】
技术研发人员:柯方许建华林媚陈艳周孙英林晨
申请(专利权)人:福建医科大学
类型:发明
国别省市:福建,35

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1