海洋中药木榄叶提取物及其制备方法和抗胰腺癌应用技术

本发明专利技术公开了海洋中药木榄叶提取物在制备治疗胰腺癌药物方面中应用。结果发现，木榄叶乙醇提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对胰腺癌细胞SW1990增殖均有明显抑制作用，其中，木榄叶乙酸乙酯部位抑制胰腺癌SW1990增殖作用最明显，而且其可显著抑制胰腺癌SW1990的迁移和侵袭，其抑制增殖作用与时间及浓度呈正相关，提示木榄叶乙酸乙酯部位提取物具有确切的抗胰腺癌SW1990作用。本发明专利技术研究阐明了木榄叶抗肿瘤活性部位抗胰腺癌的作用及分子机制，为充分开发木榄叶资源的药用价值提供科学依据，为中药治疗胰腺癌开辟了新途径，为木榄抗癌临床应用提供了参考。

【技术实现步骤摘要】
海洋中药木榄叶提取物及其制备方法和抗胰腺癌应用
本专利技术属于胰腺癌治疗
，尤其涉及一种海洋中药木榄叶提取物及其制备方法和抗胰腺癌应用。
技术介绍
胰腺癌是一种恶性化程度非常高的消化系肿瘤，世界各国的胰腺癌发病率趋势飞速，据不完全统计，五年的存活率不超过5％。胰腺癌的发生、发展与遗传背景、环境因素、基础疾病及生活习惯息息相关。目前认为吸烟、肥胖、糖尿病、慢性胰腺炎及胰腺癌家族病史均与胰腺癌的发病有关。现代临床对胰腺癌治疗方法有：传统放疗和化疗、外科手术、分子靶向药物。其中以外科手术是治疗胰腺癌最有效的方式，但由于胰腺癌病情的隐匿性，80％患者初次诊断时已属晚期，丧失了手术治疗的机会，且对放化疗不敏感，生物治疗目前疗效尚不确切。中医药在胰腺癌的综合治疗中发挥独特优势，并展现出一定的发展前景。因此发挥中药多方面、多靶点调整人体阴阳平衡、驱邪补正的独特优点，寻求安全有效的抗胰腺癌中药是治疗胰腺癌的重要研究方向。木榄Bruguieragymnorhiza(L.)Savigny为红树科木榄属植物，木榄叶是木榄干燥的叶子。木榄在中国分布广泛，其主要分布于广西、广东、福建和台湾等沿海地带。据记载，木榄味苦，性凉，归胆经。功效主治是解毒截疟，具有治疗腹泻、疟疾、高血压、糖尿病和便秘以及抗癌等功效。国内外学者从木榄中分离得到黄酮、二硫化合物、萜类、脂肪酸、甾醇、鞣质、木质素与芳香类等大量化学成分。现代药理研究表明木榄具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗糖尿病等多种活性。文献报道，木榄叶的氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和甲醇提取物，皆显示出对肝细胞HepG2有选择性的细胞毒性，木榄叶己烷提取物对MCF-7乳腺癌细胞的选择性毒性作用。尽管如此，未见木榄叶提取物用于治疗胰腺癌的报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种海洋中药木榄叶提取物及其制备方法和抗胰腺癌应用，为充分开发木榄叶资源的药用价值提供科学依据，为中药胰腺癌治疗开辟新途径。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：海洋中药木榄叶提取物在制备治疗胰腺癌药物方面中应用。治疗胰腺癌药物为抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的药物或诱导胰腺癌细胞凋亡的药物。胰腺癌细胞为人胰腺癌细胞SW1990。用于制备治疗胰腺癌药物的海洋中药木榄叶提取物。提取物为木榄叶乙醇提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物。上述乙醇提取物的制备方法，干燥木榄叶粉碎成粗粉备用；量取25倍量95％乙醇倒入木榄叶粗粉中，密封冷浸7天后，收集冷浸液，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥尽乙醇，得到木榄叶乙醇提取物的浸膏。上述石油醚提取物的制备方法，取木榄叶乙醇提取物的浸膏，倒入分液漏斗，量筒量取1倍量石油醚溶剂加入分液漏斗，上下颠倒混匀，静止，收集萃取液；多次萃取，直至加入的石油醚溶液振荡静置后不变色；合并萃取液，用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥发石油醚，得到木榄叶石油醚提取物浸膏。上述乙酸乙酯提取物的制备方法，往分液漏斗中的浸膏加入1倍量乙酸乙酯溶剂，上下颠倒混匀，静止，收集萃取液；多次萃取，直至加入的乙酸乙酯溶液振荡静置不变色；合并萃取液，用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥发乙酸乙酯，得到木榄叶乙酸乙酯提取物浸膏。专利技术人采用MTS法筛选木榄叶乙醇提取物及其3个溶剂萃取部位对肿瘤细胞的体外抑制作用，筛选木榄叶抗肿瘤活性部位。结果发现，木榄叶乙醇提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对胰腺癌细胞SW1990增殖均有明显抑制作用，其中，木榄叶乙酸乙酯部位抑制胰腺癌SW1990增殖作用最明显，而且其可显著抑制胰腺癌SW1990的迁移和侵袭，其抑制增殖作用与时间及浓度呈正相关，提示木榄叶乙酸乙酯部位提取物具有确切的抗胰腺癌SW1990作用。同时，细胞凋亡影响试验表明，木榄叶乙酸乙酯部位提取物抑制胰腺癌SW1990的作用可能与其上调Caspase-3、Bax、Bc1-2蛋白表达，下调Bc1-2/Bax蛋白比值密切相关。本专利技术研究阐明了木榄叶抗肿瘤活性部位抗胰腺癌的作用及分子机制，为充分开发木榄叶资源的药用价值提供科学依据，为中药胰腺癌治疗开辟了新途径，为木榄抗癌临床应用提供了参考。附图说明图1是不同浓度木榄叶乙酸乙酯部位对SW1990细胞平板克隆形成的抑制作用结果图，图中：a对照组，b10μg/ml，c20μg/ml。图2是不同浓度木榄叶乙酸乙酯部位对SW1990细胞侵袭能力的影响结果图(倒置显微镜100×)，图中：a对照组，b15μg/ml，c30μg/ml，d60μg/ml。图3是不同浓度木榄叶乙酸乙酯部位对Caspase-3、Bc1-2、Bax基因蛋白表达影响结果图，图中：1空白对照组，2药物组25μg/ml，3药物组50μg/ml，4药物组100μg/ml，5药物组150μg/ml。具体实施方式一、木榄叶提取物对人胰腺癌细胞SW1990增殖的影响1、材料1.1药材：木榄叶，批号20160710，采自防城港北仑河口红树林保护区。经广西中医药大学李永华教授鉴定，木榄叶为红树科植物木榄Bruguieragymnorrhiza(L.)Savigny.的干燥叶子。1.2细胞株人胰腺癌细胞株：SW1990。1.3试剂L15不完全培养基，购自江苏凯基生物技术股份有限公司(批号：20171026)、0.25％含EDTA胰酶，购自美国Gibco公司(批号：1895789)；胎牛血清，购自美国Gibco公司(批号1660517)；紫杉醇(PTX)：购自美国Invitrogen公司(货号：sp8020)；细胞增殖检测试剂盒(MTS)：购自美国promega公司(批号：0000219902)；1.4实验药物乙醇提取物的制备——准确称取干燥木榄叶1000.0g，粉碎机粉碎成粗粉备用；量筒量取25倍量95％乙醇倒入木榄叶粗粉中，密封冷浸7天后，收集冷浸液，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥尽乙醇，得到木榄叶乙醇提取物的浸膏。石油醚部位的制备——取1/2的木榄叶乙醇提取物的浸膏，倒入分液漏斗，量筒量取1倍量石油醚溶剂加入分液漏斗，上下颠倒混匀，静止，石油醚溶剂由澄清变为有色溶液，收集萃取液；多次萃取，直至加入的石油醚溶液振荡静置后不变色；合并萃取液，用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥发石油醚，得到木榄叶石油醚部位浸膏。乙酸乙酯部位的制备——石油醚萃取完成后，往分液漏斗中剩余的1/2木榄叶乙醇提取物的浸膏加入1倍量乙酸乙酯溶剂，上下颠倒混匀，静止，乙酸乙酯溶剂由澄清变为有色溶液，收集萃取液；多次萃取，直至加入的乙酸乙酯溶液振荡静置不变色；合并萃取液，用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅上挥发乙酸乙酯，得到木榄叶乙酸乙酯部位浸膏。2.方法2.1木榄叶不同提取物对人胰腺癌细胞株SW1990增殖的影响(1)取对数生长期肿瘤细胞，吸弃原培养基，PBS清洗细胞2次，加入含EDTA的0.25％胰酶，将培养瓶放入培养箱中消化3min左右。用含10％胎牛血清的完全培养基终止消化，离心3min，1000转/min，吸弃上层原培养基，加入5ml完全培养基重悬、计数，将细胞的密度调整为4×104个/ml，在96孔板中每孔加入100μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.海洋中药木榄叶提取物在制备治疗胰腺癌药物方面中应用。

【技术特征摘要】
1.海洋中药木榄叶提取物在制备治疗胰腺癌药物方面中应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述治疗胰腺癌药物为抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的药物或诱导胰腺癌细胞凋亡的药物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述胰腺癌细胞为人胰腺癌细胞SW1990。4.用于制备治疗胰腺癌药物的海洋中药木榄叶提取物。5.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物为木榄叶乙醇提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物。6.权利要求4所述提取物的制备方法，其特征在于：干燥木榄叶粉碎成粗粉备用；量取25倍量95％乙醇倒入木榄叶粗粉中，密封冷浸7天后，收集冷浸液，过滤，滤液用旋转蒸发仪浓缩成粘稠液，倒入蒸发皿置于水浴锅...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓家刚，谢蕾卉，杜正彩，侯小涛，郝二伟，谢金玲，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：广西,45