生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法技术

本发明专利技术公开生物体液中植物生长调节剂6‑苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂的检测。本发明专利技术中生物体液中6‑苄基腺嘌呤和多效唑在血液及尿液中，在10μg/mL添加水平上，方法的回收率可达80％，精密度小于11％。生物体液中6‑苄基腺嘌呤、多效唑的GC‑MS方法的的检出限为0.3μg/mL，仪器检出限为0.5μg/mL。建立染毒动物模型，通过测定6‑苄基腺嘌呤和多效唑两种植物生长调节剂在染毒大鼠血液中浓度，验证方法的可靠性,为植物生长调节剂相关中毒案件的检验提供科学依据。

【技术实现步骤摘要】
生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法
本专利技术涉及法医药品分析领域。更具体地，涉及一种生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法。
技术介绍
植物生长调节剂是用于调节植物生长发育的一类农药，可在植物体内传导至作用部位，以促进或抑制其生命过程中的某些环节，使之向符合人类的需要发展。随着农业现代化进程的加速推进，运用植物生长调节剂调控植物的生长发育和产量形成(即作物化学控制技术)，已经逐渐成为农业生产中不可缺少的重要措施。与传统农药相比,植物生长调节剂具有许多优越性，它能够调控基因的表达，实现作物生长的“人为”调控。国内外已经把植物生长调节剂的应用作为21世纪农业实现超产的主要措施之一。6-苄氨基嘌呤、多效唑是近年来案件中常出现较多的植物生长调节剂。6-苄氨基嘌呤和多效唑的物化性质及药物性质总结如下：1、6-苄氨基嘌呤6-苄氨基嘌呤又名6-苄基腺嘌呤，英文名称6-Benzylaminopurine，简称6-BA，分子式为C12H11N5，分子量为225.2，熔点230-233℃，难溶于水，在醇中溶解度较大。6-苄氨基嘌呤是一种人工合成的细胞分裂素,在植物体内含量甚微,但对植物的生长发育具有显著的影响,其主要作用是促进细胞的分裂和扩大,促进侧芽的发育,抑制衰老、保绿等,具有诱导同化物向施用部位定向运输的作用，广泛用在农业、果树和园艺作物从发芽到收获的各个阶段。6-苄氨基嘌呤属低毒类农药，LD50(口服)：大鼠(雄性)2965mg/kg，大鼠(雌性)1005mg/kg。2、多效唑多效唑，又名氟丁唑，英文名paclobutrazol，其化学名为：(2RS,3RS)-1-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-戊-3-醇，分子式C15H20ClN3O，分子量为293.8，熔点165-166℃，易溶于水、甲醇。这两种植物生长调节剂具有共同的特点：均为化学合成类农药，在生产上被作为生长促进剂广泛应用，尤其是可促进细胞分裂的“无根素”—6-苄氨基嘌呤，在豆芽生产过程中的添加滥用现象更为普遍。因此建立生物体液(血、尿)中两种植物生长调节剂的快速灵敏的检验方法，并利用简单的动物模型，反应其在血液中的代谢情况以解决案件中的检验难题，是法庭科学的实际工作中的现实需要。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种简便快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠的生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法。为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂的检测。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，步骤(1)中，生物体液为血液或尿液。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，步骤(1)中，6-苄氨基嘌呤和多效唑采用液-液萃取法。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，步骤(1)中，所述液-液萃取法的萃取溶剂为环己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、或氯仿和异丙醇按照体积比为3:1组成的混合溶液。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，步骤(1)中，所述液-液萃取法包括如下步骤：取含6-苄氨基嘌呤和多效唑生物体液1mL，加入环己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿和异丙醇按照体积比为3:1组成的混合溶液振荡提取，离心10min、转速为8000r/min，转移有机相至尖底玻璃试管中，重复提取一次，合并有机相，50℃空气流下挥干，残渣用100μL甲醇溶解定容留待GC-MS检测；或者过0.22μm的有机微孔滤膜，所得物即为液-液萃取法预处理液，留待GC-MS检测。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，步骤(2)中，利用气相色谱质谱GC/MS检验方法检测含6-苄氨基嘌呤和多效唑生物体液中6-苄氨基嘌呤和多效唑含量时的色谱条件及质谱条件如下：气相色谱条件：色谱柱：DB-5MS弹性石英毛细管柱，规格：30m×0.25mm×0.25μm；程序升温：80℃起始，保持2min，以30℃/min升至280℃，保持15min；进样口温度280℃；载气：氦气；流速：1mL/min；分流比：10:1；进样量1μL；质谱条件：传输线温度200℃；离子源温度200℃；离子源：EI，电子轰击能量70eV；扫描方式：SCAN；扫描范围：40amu～450amu；溶剂延迟时间：2.5min。上述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，含6-BA和多效唑生物体液保存在-20℃条件下，保存时间小于或等于1个月；经冷冻的含6-BA和多效唑体液，冻融后72h内进行检测。本专利技术的有益效果如下：(1)生物体液中6-苄基腺嘌呤和多效唑在血液及尿液中，在10μg/mL添加水平上，方法的回收率可达80％，精密度小于11％。(2)生物体液中6-苄基腺嘌呤、多效唑的GC-MS方法的检出限为0.3μg/mL，仪器检出限为0.5μg/mL。(3)建立染毒动物模型，通过测定6-苄基腺嘌呤和多效唑两种植物生长调节剂在染毒大鼠血液中浓度，验证方法的可靠性,为植物生长调节剂相关中毒案件的检验提供科学依据。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明。图16-苄氨基嘌呤的化学结构；图2多效唑的化学结构；图36-BA标准工作曲线；图4多效唑标准工作曲线；图5空白血样6-BA的提取离子流图；图6添加血样中6-BA的提取离子流图；图7空白尿样6-BA的提取离子流图；图8添加尿样中6-BA的提取离子流图；图9空白血样多效唑的提取离子流图；图10添加血样中多效唑的提取离子流图；图11空白尿样多效唑的提取离子流图；图12添加尿样中多效唑的提取离子流图；图136-BA质谱图；图14多效唑质谱图。具体实施方式为了更清楚地说明本专利技术，下面结合优选实施例和附图对本专利技术做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本专利技术的保护范围。第一部分生物体液中6-苄氨基嘌呤多效唑检测方法一、实验部分1实验材料1.1药品与试剂6-苄基腺嘌呤购自Dr.Ehrenstorfer公司(德国)，纯度99.0％；多效唑购自Dr.Ehrenstorfer公司(德国)，纯度99.0％；甲醇(色谱纯，FisherScientific公司)；乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、(分析纯，北京化学试剂公司)；0.22μm过滤膜(北京八方公司)；去离子水经Milliporesimplicity纯水系统制备。1.2生物样品空白人全血购自北京市红十字血液中心；空白尿采自一周内未服用任何药物的健康志愿者。1.3标准溶液的配制1.3.1储备液的配制：6-苄氨基嘌呤储备液的配制：精确称取6-苄氨基嘌呤标准品10mg于10mL容量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的6-苄氨基嘌呤储备液，4℃冰箱中保存，备用。多效唑储备液的配制：精确称取多效唑标准品10mg于10mL容量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的多效唑储备液，4℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物体液中植物生长调节剂6‑苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂的检测。

【技术特征摘要】
1.生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)生物体液预处理；(2)植物生长调节剂的检测。2.根据权利要求1所述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，生物体液为血液或尿液。3.根据权利要求2所述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，6-苄氨基嘌呤和多效唑采用液-液萃取法。4.根据权利要求3所述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述液-液萃取法的萃取溶剂为环己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿和异丙醇按照体积比为3:1组成的混合溶液。5.根据权利要求4所述生物体液中植物生长调节剂6-苄基腺嘌呤和多效唑的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述液-液萃取法包括如下步骤：取含6-苄氨基嘌呤和多效唑生物体液1mL，加入环己烷、乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿和异丙醇按照体积比为3:1组成的混合溶液振荡提取，离心10min、转速为8000r/min，转移有机相至尖底玻璃试管中，重复提取一次，合并有机相，50℃空气流下挥干，残渣用10...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔冠峰，任昕昕，宋歌，王瑞花，王爱华，董林沛，侯小平，常靖，董颖，黄健，张云峰，魏春明，杜鸿雁，王芳琳，于忠山，
申请(专利权)人：公安部物证鉴定中心，
类型：发明
国别省市：北京,11