一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；将分别配制的肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到肌红蛋白的测定试剂盒。采用该试剂盒进行MYO检测，检测性能大大提高，反应时间大大缩短。

A Kit for Detecting Myoglobin Content by Magnetic Particle Chemiluminescence

The invention discloses a kit for detecting myoglobin content by magnetic particle chemiluminescence method, which is characterized by including calibration products, quality control products, anti-reagents, magnetic particle reagents and luminescent substrates. The magnetic particle reagent is made by coupling anti-isothiocyanate fluorescein antibody with carboxyl magnetic beads, and the luminescent substrates are dissolved in ALPS. The calibration products of myoglobin, myoglobin control products, anti-reagents, magnetic particle reagents and light-emitting substrates were separately placed in packaging containers, and the determination kits of myoglobin were obtained. Using this kit for MYO detection, the detection performance is greatly improved and the reaction time is greatly shortened.

【技术实现步骤摘要】
一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒
本专利技术属于免疫检测领域，具体涉及一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒。
技术介绍
肌红蛋白(MYOglobin，MYO,Mb)是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，是肌肉内储存氧的蛋白质，它的氧饱和曲线为双曲线型。肌肉中运载氧的蛋白质，由153个氨基酸残基组成，含有血红素，和血红蛋白同源，与氧的结合能力介于血红蛋白和细胞色素氧化酶之间，可帮助肌细胞将氧转运到线粒体。肌红蛋白的主要功能是在肌肉中有运输和储存氧功能，其作用机理主要是蛋白质的结构决定的。由于铁与卟啉及多肽链氨基酸残基的连接，这种构象非常有利于运氧和储氧功能，同时也使血红素在多肽链中保持稳定。但是过量劳动、劳累、阳光辐射、空气污染、吸烟、农药等会产生过量的自由基。自由基，在化学上叶城“游离基”，是含有一个不成对电子的原子团。原子形成分子式，自由基夺取其他物质的电子被氧化，肌红蛋白是富氧链蛋白，更容易遭到自由基攻击。遭到自由基攻击从而引起多中疾病，如心脏病、老年痴呆症、帕金森病和肿瘤，于肌红蛋白被氧化存在着密切的关系。测定血清肌红蛋白肌红蛋白可作为急性心肌梗死(AMI)诊断的早期最灵敏的指标。但特异性差,骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病,都可导致其升高。MYO阳性虽不能确诊AMI,但可用于早期排除AMI诊断的重要指标,如MYO阴性,则基本排除心肌梗死,还可用于再梗死的诊断,结合临床,如MYO重新升高,应考虑为再梗死或者梗死延展。增高：见于急性心肌梗死早期、急性肌损伤、肌营养不良、肌萎缩、多发性肌炎、急性或慢性肾功能衰竭、严重充血性心力衰竭和长期休克等。在心肌梗死后1.5h即可增高，但1～2d内即恢复正常。
技术实现思路
为解决现有技术中的上述问题，本专利技术提供了一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒，采用该试剂盒进行MYO检测，检测性能大大提高，反应时间大大缩短。所采用的技术方案为：一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；将分别配制的肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到肌红蛋白的测定试剂盒。进一步地，还包括清洗液，所述清洗液是将160NaCl、4gKCl、24.2g三羟甲基氨基甲烷(Tris)、1mL吐温20溶于900mL双蒸水中，用HCl调整至PH7.4，用双蒸水定容至1000mL配制而成。进一步地，所述校准品、质控品、抗试剂按照如下方法配制而成：A、校准品、质控品的配制：用校准品缓冲溶液溶解肌红蛋白抗原，配制抗试剂的校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲溶液是通过在1L的新生牛血清中加入0.01g-0.05g的四环素和0.1g-0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；B、抗试剂的配制：1)抗试剂缓冲液的制备：所述缓冲溶液为PBS体系，pH值为5-6；将10g-20g的Na2PO3H·12H2O、1-2g的NaPO3H2·12H2O、1g-5g的绵羊血清、3g-10g的新生牛血清、1g-5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用4MHCl调节pH，制得抗试剂缓冲液；2)异硫氰酸荧光素与肌红蛋白抗体偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体：首先用缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0-5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，然后按照质量比为肌红蛋白抗体：异硫氰酸荧光素溶液＝1:1.1-1:1.5的二者转移到棕色玻璃瓶里，充分混匀；充分反应后使用pH为8-9的碳酸盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体；3)碱性磷酸酶与肌红蛋白抗体偶联，获得碱性磷酸酶标记的肌红蛋白抗体：首先用缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0-5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液，抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团分别活化后按照摩尔比为碱性磷酸酶：肌红蛋白＝1:1-1:3的反应比在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应，充分反应后,使用pH为8-9的Tris缓冲液平衡，凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体；筛选出效果最优的分子片段进行测试；将步骤2)中获得的异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体和步骤3)中获得的碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中，充分搅拌后获得所述抗试剂；所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，表面活性剂的添加量为0.01％-0.5％。进一步地，所述磁微粒试剂是按照以下步骤制备的：1)将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液放入反应瓶中，将该反应瓶在磁场内放置15-20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向反应瓶中加入相当于反应瓶中羧基磁珠体积2-5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20-30min；再将反应瓶置于磁场中15-20min后吸去上清；重复清洗羧基磁珠3遍；最后将羧基磁珠溶液定容到10-50mg/mL，混匀待用；所述磁微粒缓冲液的配置方法是将12.12-15.26mg的Tris，5.82-8.58mg的氯化钠，50-60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解即得；2)连接反应：按照质量比羧基磁珠溶液：抗异硫氰酸荧光素抗体＝100:1的比例在步骤1)所制得的羧基磁珠溶液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，在2-8℃内保持混匀状态反应18小时；3)反应瓶在磁场中放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗3遍，随后定容至10mg/mL，2-8℃保存，制得所需待用磁微粒试剂。进一步地，所述发光底物是用相当于ALPS体积4-10倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成的；所述发光底物缓冲液的配置方法是将12.12g-121.14g的Tris、5.82g的氯化钠、0.03g的光泽精加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用盐酸调节pH至9.5即得。一种所述的用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒的制备方法，首先分别配制肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；然后将肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到肌红蛋白的测定试剂盒。一种利用所述的用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒检测肌红蛋白的方法，包括以下步骤：1)取三支试管分别加100μL肌红蛋白的校准品、100μL肌红蛋白的质控品、100μL待测样本；2)每支试管中加入30μL抗试剂A和30μL抗试剂B，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置于37℃下水浴15min；3)每支试管中加入30μL磁微粒试剂，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，置37℃下水浴5min；4)将试管在磁分离器上沉淀3min，缓慢地倒转试管和磁分离器，倒出上清液；把倒转的试管连同磁分离器一起，放在滤纸上，拍击磁分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；5)每支试管中加入300μL清洗液，用塑料薄膜覆盖试管，轻轻振荡试管30s，混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器，倒出上清液，把倒转的试管连同磁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；将分别配制的肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到肌红蛋白的测定试剂盒。

【技术特征摘要】
1.一种用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,其特征在于，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成；将分别配制的肌红蛋白校准品、肌红蛋白质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到肌红蛋白的测定试剂盒。2.根据权利要求1所述的用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,其特征在于，还包括清洗液，所述清洗液是将160NaCl、4gKCl、24.2g三羟甲基氨基甲烷(Tris)、1mL吐温20溶于900mL双蒸水中，用HCl调整至PH7.4，用双蒸水定容至1000mL配制而成。3.根据权利要求1或2所述的用磁微粒化学发光法检测肌红蛋白含量的试剂盒,其特征在于，所述校准品、质控品、抗试剂按照如下方法配制而成：A、校准品、质控品的配制：用校准品缓冲溶液溶解肌红蛋白抗原，配制抗试剂的校准品和质控品；其中，所述校准品缓冲溶液是通过在1L的新生牛血清中加入0.01g-0.05g的四环素和0.1g-0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；B、抗试剂的配制：1)抗试剂缓冲液的制备：所述缓冲溶液为PBS体系，pH值为5-6；将10g-20g的Na2PO3H·12H2O、1-2g的NaPO3H2·12H2O、1g-5g的绵羊血清、3g-10g的新生牛血清、1g-5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用4MHCl调节pH，制得抗试剂缓冲液；2)异硫氰酸荧光素与肌红蛋白抗体偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体：首先用缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0-5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，然后按照质量比为肌红蛋白抗体：异硫氰酸荧光素溶液＝1:1.1-1:1.5的二者转移到棕色玻璃瓶里，充分混匀；充分反应后使用pH为8-9的碳酸盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体；3)碱性磷酸酶与肌红蛋白抗体偶联，获得碱性磷酸酶标记的肌红蛋白抗体：首先用缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0-5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液，抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团分别活化后按照摩尔比为碱性磷酸酶：肌红蛋白＝1:1-1:3的反应比在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应，充分反应后,使用pH为8-9的Tris缓冲液平衡，凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，得到碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体；筛选出效果最优的分子片段进行测试；将步骤2)中获得的异硫氰酸荧光素标记的肌红蛋白包被抗体和步骤3)中获得的碱性磷酸酶标记的肌红蛋白标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中，充分搅拌后获得所述抗试剂；所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，表面活性剂的添加量为0.01％-0.5％。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：金鑫，刘振国，俞佩佩，
申请(专利权)人：泰州泽成生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32