一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法及高效液相色谱方法技术

本发明专利技术属于分析化学的技术领域，公开了一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法及高效液相色谱方法。前处理方法：首先将O/W型紫草护肤乳与油脂混合，破乳萃取，取油脂层；将油脂层与碱水溶液混合，静置，取碱水层；加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。本发明专利技术将固体紫草素配成溶液，通过高效液相色谱法进行检测，获得紫草护肤乳中紫草素的含量。本发明专利技术的前处理方法简单、快速，乳液破乳完全，紫草素的纯度高，提升了液相色谱检测准确性及检测灵敏度。同时本发明专利技术的方法更接近真实值，检测效果更准确；回收率高、重复性好。

A Pretreatment and High Performance Liquid Chromatography Method for the Determination of Shikonin in O/W Shikonin Skin Care Cream

The invention belongs to the technical field of analytical chemistry, and discloses a pretreatment method and a high performance liquid chromatography method for determining shikonin in O/W shikonin skin care emulsion. The pretreatment method: first, O/W type shikonin skin care emulsion was mixed with oil, demulsified and extracted, and the oil layer was taken out; then, the oil layer was mixed with alkali water solution, and the alkali water layer was taken out; the acid was added to adjust the solution pH to 4-6, the organic solvent was added, and the organic solvent in the lower layer was taken out to remove the organic solvent in the organic layer, and the solid shikonin was obtained. \u3002 The solid shikonin is prepared into a solution and detected by high performance liquid chromatography to obtain shikonin content in shikonin skin care emulsion. The pretreatment method of the invention is simple and fast, the emulsion is completely demulsifying, the purity of shikonin is high, and the detection accuracy and sensitivity of the liquid chromatography are improved. At the same time, the method of the invention is closer to the true value, the detection effect is more accurate, the recovery rate is high and the repeatability is good.

【技术实现步骤摘要】
一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法及高效液相色谱方法
本专利技术属于分析化学的
，涉及日化产品中活性成分的检测，特别涉及O/W型的紫草护肤乳液中紫草素检测的前处理方法和利用高效液相色谱法测定紫草护肤乳中紫草素含量的方法。
技术介绍
紫草为紫草科紫草属多年生草本植物，具有凉血活血、消炎止痛、解毒透疹之功，多用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤等症的治疗。紫草的主要药用成分为萘醌类色素，主要有紫草素及乙酰紫草素等10多种紫草素的衍生物，具有愈伤、抗炎、抗菌、促进细胞再生、解毒透疹以及抑制肿瘤细胞生长等功效。其中，紫草素为脂溶性成分，它不溶于水，溶于乙醇、有机溶剂以及植物油脂，易溶于碱水，但遇酸则沉淀析出。现紫草素的提取方法多为植物油脂浸提法以及亚临界流体萃取法。目前，市场上具有很多不同品种的紫草类化妆品，其配方多以紫草提取物和其他活性成分、功能性油脂与乳化剂复配，均质机均质形成乳液或微乳液。实际紫草护肤乳中往往成分复杂，需要对样品进行前处理，通过萃取等方法将紫草素从紫草护肤乳中分离，再采用高效液相色谱或质谱等方法进行含量分析。但是如何对乳液进行前处理，提取乳液中活性成分是护肤乳中紫草素测定的技术难点。申请号为201410216490.9的中国专利文献公开了一种多效茶油紫草膏的制备方法，从配方结构看，该多效茶油紫草膏为油水两相体系，大量使用蜂蜡作为乳化剂，使紫草素在体系中均匀稳定地分散在膏体内。申请号201611185354.3的中国专利申请文献公开了一种紫草根化妆品组合物及其制备方法，其原料配方包括：紫草根提取物20～30份、细胞生长因子35～50份、SOD1～5份、活性肽1～5份、角鲨烯8～12份、神经酰胺6～10份、羧甲基纤维素12～20份、溶酶液20～35份以及去离子水适量。因其配方采用水溶性成分(多肽、酶、多糖等成分)以及脂溶性成分(紫草根提取物、角鲨烯、神经酰胺)，该专利技术采用微胶囊技术，将紫草根提取物与其他组物成分包裹起来，行为微乳化产品。申请号201310150896.7的中国专利文献公开了一种紫草面膜贴膜用乳液、面贴膜及其制备方法，将紫草根提取液与其他组物成分利用微乳化技术，开发出一款紫草面膜贴用乳液。总体来说，市面上的紫草化妆品品种繁多，但是大多并没有对功效成分紫草素进行含量测定，导致在产品质量及功效参差不齐。因此，在紫草素的实际应用研究中，如何从复杂多组分样品中简单、便捷地提取紫草素，并对其进行分离检测，这一环节对日化企业的产品质量控制尤为重要。《中国药典》2010版(一部)采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量，该方法操作繁琐，精密度不高。申请号为201710374145.1的中国专利申请文献公开了一种紫草素手性异构体的分离检测方法，采用高效液相色谱法及手性色谱柱，对左旋紫草素和右旋紫草素进行含量检测，但该方法仅适用纯紫草素的分析检测。申请号201510600824.7的中国专利申请文献公布了一种紫草素的快速检测方法，利用一种快速热解-气相色谱/质谱联用技术(PY-GC/MS)，通过低温热解实现低沸点的复杂混合物的初步分离，实现对紫草素的微量检测。但是这种设备并不具备普遍性，往往需要送至第三方检测，检测周期长，无法满足日化企业的日常快速检测需求。目前未见基于高效液相色谱法检测紫草化妆品中紫草素的样品前处理研究报告。本专利技术针对O/W水包油体系的紫草护肤乳，提供一种简单、便捷的测定O/W型紫草护肤乳中紫草素含量的前处理方法及利用高效液相色谱法测定紫草素含量的方法。本专利技术采用简单、便捷的前处理方法从复杂组分中提取出紫草素，提取的紫草素回收率高，对检测结果的干扰性小；然后采用高效液相色谱仪检测紫草素的含量。本专利技术的方法简单，检测的准确度和灵敏度高。
技术实现思路
为了填补紫草护肤乳中紫草素检测技术的空白，同时为了快速、便捷、准确的测定紫草护肤乳中紫草素的含量，本专利技术的目的在于提供一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法。本专利技术通过对护肤乳进行前处理，有效去除可能干扰检出结果的因素，提升了检测准确性及检测灵敏度，提高了紫草素的提取率和回收率。本专利技术将通过前处理提取得到紫草素样品进行高效液相色谱测定，该方法高效、快速、便捷。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，包括以下步骤：(1)将O/W型紫草护肤乳与油脂混合，破乳萃取，取油脂层；(2)将油脂层与碱水溶液混合，静置萃取，取下层碱水层；(3)向碱水层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂，静置萃取，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。步骤(1)中所述油脂为天然植物油、合成油脂或矿物油脂中一种以上；所述天然植物油为霍霍巴油、蓖麻油、橄榄油、杏仁油、山茶籽油、椰子油、沙棘果油、葵花籽油等近乎无色透明的天然植物油中一种以上；所述合成油脂为辛酸/癸酸甘油三酯、异壬酸异壬酯、异硬脂酸异丙酯、油醇芥酸酯、辛酸丙基庚酯、季戊四醇四辛酸酯、油酸癸酯、角鲨烷等合成油脂中的一种以上；所述矿物油脂为白矿油、异十六烷等无色透明的矿物油脂中的一种以上。步骤(1)中所述油脂与护肤乳的质量比为2:1～5:1。步骤(1)中所述破乳萃取在高速均质(高速剪切均质机\高压均质机)或超声的条件下进行；所述高速均质优选为高速剪切均质机，转速为5000～15000rpm，高速均质的时间为3～10min；所述超声的条件为：超声功率为450～1500W，超声频率为15～35KHz，超声时间120～300s；所述超声优选为超声波细胞粉碎机，变幅杆可选配末端直径为Φ6、Φ2、Φ3、Φ8、Φ10等。步骤(1)中，破乳萃取后，将产物进行离心，分离出油脂层；利用离心使使含紫草素油脂层与护肤乳的料体分离；料体位于底部。离心的转速为1000～6000r/min，离心时间为10～30min。步骤(1)中所述破乳萃取的次数为2～5次。步骤(2)中所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钠溶液；碱水溶液的浓度为1％～10％；步骤(2)中所述萃取的次数为3～5次，每次萃取时碱水溶液的用量为油脂质量的1～5倍，静置的时间为10～30min。在碱水中，紫草素与与其它脂溶性成分分离(例如蜂蜡、油脂、角鲨烷、VE等)。步骤(3)中所述酸为盐酸，酸的浓度为5wt～10wt％。步骤(3)中利用酸调节碱液pH为4～6，优选pH为5.0。步骤(3)中所述有机溶剂为四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种以上。步骤(3)中所述萃取的次数为3～5次，每次萃取时有机溶剂的用量为加入酸后溶液质量的0.1～3倍，静置的时间为10～30min。步骤(3)中所述去除有机溶剂是指将有机层进行减压旋转蒸发去除有机溶剂，减压旋转蒸发的条件为20～45℃，负压。为了测定护肤乳中紫草素含量，将上述前处理方法获得固体紫草素采用高效液相色谱法进行检测。先将固体紫草素配成溶液，然后采用高效液相色谱法进行检测。基于所述样品前处理方法，本专利技术还提供一种液相色谱检测紫草护肤乳中紫草素的测定方法，以甲醇和磷酸水溶液为流动相，采用柱色谱分离技术，精确吸取待测样品液注入高效液相色谱仪进行色谱分离。采用紫外吸收检测器，于515本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将O/W型紫草护肤乳与油脂混合，破乳萃取，取油脂层；(2)将油脂层与碱水溶液混合，静置萃取，取下层碱水层；(3)向碱水层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂，静置萃取，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。

【技术特征摘要】
1.一种测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将O/W型紫草护肤乳与油脂混合，破乳萃取，取油脂层；(2)将油脂层与碱水溶液混合，静置萃取，取下层碱水层；(3)向碱水层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂，静置萃取，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。2.根据权利要求1所述测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：步骤(1)中所述破乳萃取在高速均质或超声的条件下进行；步骤(2)中所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钠溶液；碱水溶液的浓度为1wt％～10wt％；步骤(3)中所述酸为盐酸；酸的浓度为5wt～10wt％。3.根据权利要求2所述测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：所述高速均质的转速为5000～15000rpm，高速均质的时间为3～10min；所述超声的条件为：超声功率为450～1500W，超声频率为15～35KHz，超声时间120～300s。4.根据权利要求1所述测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中所述有机溶剂为四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种以上；步骤(1)中所述油脂为天然植物油、合成油脂或矿物油脂中一种以上；步骤(1)中，破乳萃取后，将产物进行离心，分离出油脂层。5.根据权利要求4所述测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：所述天然植物油为霍霍巴油、蓖麻油、橄榄油、杏仁油、山茶籽油、椰子油、沙棘果油、葵花籽油中一种以上；所述合成油脂为辛酸/癸酸甘油三酯、异壬酸异壬酯、异硬脂酸异丙酯、油醇芥酸酯、辛酸丙基庚酯、季戊四醇四辛酸酯、油酸癸酯、角鲨烷中的一种以上；所述矿物油脂为白矿油、异十六烷中的一种以上；所述离心的转速为1000～6000r/min，离心时间为10～30min。6.根据权利要求1所述测定O/W型紫草护肤乳中紫草素的前处理方法，其特征在于：步骤(1)中所述油脂与护肤乳的质量比为2:1～5:1；步骤(1)中所述破乳萃取的次数为2～5次；步骤(2)中所述萃取的次数为3～5次，每次萃取时碱水溶液的用量为油脂质量的1～5倍，静置的时间为10～30min；步骤(3)中pH为5.0；步骤(3)中所述萃取的次数为3～5次，每次萃取时有机溶剂的用量为...

【专利技术属性】
技术研发人员：周心慧，程建华，付尉芳，张定宇，邓燕柠，张继勇，周健，
申请(专利权)人：华南协同创新研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44