一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法技术

本发明专利技术属于化学分析的技术领域，公开了一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法。前处理方法为：首先将包含紫草素的紫草护肤膏与有机溶剂混合，然后采用碱水溶液进行提取，静置，取下层，获得碱水溶液层；加入盐酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂进行萃取，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。本发明专利技术将固体紫草素配成溶液，通过高效液相色谱法进行检测，从而获得紫草护肤膏中紫草素含量。本发明专利技术的前处理方法简单、快捷，紫草素的纯度高，提升了液相色谱检测准确性及检测灵敏度；同时本发明专利技术的方法更接近真实值，检测效果更准确；并且回收率高、重复性好。

A Pretreatment and High Performance Liquid Chromatography Method for the Determination of Shikonin in Shicao Ointment

The invention belongs to the technical field of chemical analysis, and discloses a pretreatment method and a high performance liquid chromatography method for determining shikonin content in shikonin paste. The pretreatment method is as follows: firstly, the shikonin-containing shikonin skin care cream is mixed with organic solvents, then the alkali-water solution is used to extract, and the lower layer is taken out to obtain the alkali-water solution layer; then, hydrochloric acid is added to adjust the solution pH to 4-6, and organic solvent is added to extract, and the lower layer is taken out to remove the organic layer. Solvent to obtain solid shikonin. The solid shikonin is prepared into a solution and detected by high performance liquid chromatography to obtain shikonin content in shikonin skin care cream. The pretreatment method of the present invention is simple, fast and has high purity of shikonin, which improves the detection accuracy and sensitivity of liquid chromatography. At the same time, the method of the present invention is closer to the true value and has more accurate detection effect, and has high recovery rate and good repeatability.

【技术实现步骤摘要】
一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法
本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种紫草膏中紫草素的分离方法及利用高效液相色谱法检测从紫草护肤膏中分离出的紫草素含量的方法。
技术介绍
紫草为紫草科紫草属多年生草本植物，具有凉血活血、消炎止痛、解毒透疹之功，多用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤等症的治疗。紫草的主要药用成分为紫草素，具有愈伤、抗炎、抗菌、促进细胞再生、解毒透疹以及抑制肿瘤细胞生长等功效。紫草素为脂溶性成分，它不溶于水，易溶于乙醇、有机溶剂以及植物油脂。《中国药典》2010版(一部)采用紫外分光光度法测定左旋紫草素的含量，该方法操作繁琐，精密度不高。申请号为201710374145.1的中国专利文献公开了一种紫草素手性异构体的分离检测方法，采用高效液相色谱法及手性色谱柱，对左旋紫草素和右旋紫草素进行含量检测，但该方法仅适用紫草素标样的分析检测。实际紫草护肤膏中往往成分复杂，需要对样品进行前处理，通过萃取等方法将紫草素从紫草膏中分离，再采用高效液相色谱方法进行含量分析。申请号为201510266590.7的中国专利文献公开了一种紫草护肤中药组合物和紫草护肤膏及其制备方法，所述紫草护肤中药组合物的成分为：紫草30～70份、齿叶乳香15～45份、甘草5～15份、迷迭香叶1～10份，另外还添加玉米胚芽油、蜂蜡、可可籽酯、牛油果树果脂油、薰衣草精油、芒果籽酯、羊毛酯等成分，配方组分复杂。申请号为201510826929.4的中国专利文献公开了一种含野茶油的万用紫草膏，其主要原料按重量份数计为：野茶油15～40份、紫草20～45份、天然蜂蜡10～25份、甜杏仁油5～10份、小麦胚芽油1～3份、薰衣草精油0.5～2.0份、迷迭香精油0.5～2.0份、VE醋酸酯0.3～1.0份。申请号为201410412519.0、201610110642.6、201410191453.7、201510607282.6、201410216490.9、201610377530.7等中国专利文献均公开了紫草膏及其制备方法，这些紫草护肤膏以紫草素为主要原料，配以多种天然植物油、蜂蜡、凡士林、精油、植物提取物组合成。总体来说，市面上的紫草护肤膏品种繁多，但是大多并没有对功效成分紫草素进行含量测定，导致在产品质量及功效参差不齐。因此，在紫草素的实际应用研究中，如何从复杂多组分样品中简单、便捷地提取紫草素，并对其进行分离检测，这一环节对日化企业的产品质量控制尤为重要。本专利技术针对不同配方体系的紫草护肤膏，提供一种简单、便捷的紫草护肤膏中紫草素检测的样品前处理方法，并采用高效液相色谱仪检测紫草素的含量。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是填补紫草护肤膏中紫草素检测技术的空白，提供一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法及高效液相色谱方法。本专利技术的前处理方法，简单、快速，解决了紫草膏中其它复杂成分对紫草素的干扰，提升了检测准确性及检测灵敏度。通过本专利技术的前处理方法以及高效液相色谱实现了紫草膏中紫草素的含量检测；本专利技术的方法具有重复性好、回收率高的特点。本专利技术解决的技术问题是采用以下技术方案予以实现：一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，包括以下步骤：(1)将包含紫草素的紫草护肤膏与有机溶剂混合，获得混合溶液；(2)采用碱水溶液对混合溶液进行提取，静置，取下层碱水溶液层，获得碱水溶液层；所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；(3)向碱水溶液层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂进行萃取，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。步骤(1)中所述有机溶剂为石油醚、戊烷、正己烷、环己烷、异辛烷、乙酸乙酯中的一种以上。步骤(2)中所述碱水溶液的浓度为1wt％～10wt％；步骤(2)中所述提取的次数为3～5次，每次提取时，碱水溶液的加入量为混合溶液中有机溶剂体积的1～2倍，静置的时间为10～30min；提取完后，将碱水溶液层合并，获得碱水溶液层的提取液。步骤(3)中所述酸为盐酸，盐酸的浓度为5wt～10wt％。利用盐酸调节碱液pH为4～6，优选pH5。步骤(3)中所述有机溶剂为四氯化碳、二氯甲烷、氯仿、甲苯中的一种以上。步骤(3)中萃取的次数为3～5次，每次萃取时，有机溶剂的量为加入酸后溶液体积的0.3～2倍，静置的时间为10～30min；萃取完后，合并有机层，去除有机层的有机溶剂，获得紫草素。步骤(3)中所述去除有机溶剂是指将有机层进行减压旋转蒸发去除有机溶剂，减压旋转蒸发的条件为30～45℃，负压。基于所述样品前处理方法，本专利技术还提供一种液相色谱检测紫草护肤膏中紫草素的测定方法，以甲醇和磷酸水溶液为流动相，采用柱色谱分离技术，精确吸取待测样品液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，采用紫外吸收检测器，于515nm波长处检测紫草素的吸收值，采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量。所述测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，包括以下步骤：(a)将m0质量的包含紫草素的紫草护肤膏按照前处理方法进行处理，获得固体紫草素(粗品)；采用甲醇将固体紫草素配成溶液，获得待测样品，待测样品的体积为V；(b)利用紫草素标准样品(纯度≥98％)，配置一系列不同浓度的标准溶液，，通过高效液相色谱法测定，建立标准曲线，并制作线性回归方程；(c)采用高效液相色谱仪对待测样品中紫草素进行检测，获得色谱图；(d)利用紫草素标准曲线及线性回归方程，采用外标法，根据待测样品紫草素峰面积计算待测样品中紫草素含量即紫草素在待测样品中的浓度C；(e)包含紫草素的紫草护肤膏中紫草素含量计算：C：待测样品中紫草素的浓度，mg/mL；V：待测样品的体积，mL；m0：包含紫草素的紫草护肤膏的取样量，mg。步骤(a)中待测样品具体是指：采用甲醇溶解固体紫草素并定容，滤膜过滤，获得前处理液；再利用甲醇进行稀释，稀释至前处理液1～100倍，获得待测样品；步骤(b)中所述标准曲线建立：(b1)称取紫草素标准品，甲醇(色谱纯)溶解并定容，获得1mg/mL的紫草素标准溶液；(b2)采用系列稀释法，将1mg/mL的紫草素标准溶液稀释成0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg/mL的紫草素标准溶液，利用高效液相色谱进样检测，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，制作峰面积和紫草素浓度的线性回归方程。步骤(c)中所述检测的条件为：色谱柱：SHIMADZUInertSustainC18柱，5μm，250×4.6mm；流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(体积比为75:25)；流速：0.6～1.0mL/min；柱温：25～35℃；检测波长：515nm；进样量：1～10μL。本专利技术的样品前处理方法，可以针对现有的不同配方体系的紫草护肤膏，以石油醚、乙酸乙酯等有机溶剂对膏体状样品进行溶解；以NaOH水溶液对样品进行紫草素提取后(取下层碱水层，紫草素与有机脂溶性成分分离)；利用盐酸水溶液调节溶液pH至弱酸性(紫草素析出，与水溶液成分分开)；利用二氯甲烷等有机溶剂提取水溶液中紫草素，通过减压蒸馏去除有机溶剂，得到纯度很高的紫草素。甲醇溶解，微滤膜过滤，利用高效液相色谱法检测紫草素的含量。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点：(1)本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将包含紫草素的紫草护肤膏与有机溶剂混合，获得混合溶液；(2)采用碱水溶液对混合溶液进行提取，静置，取下层碱水溶液层，获得碱水溶液层；所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；(3)向碱水溶液层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂进行萃取，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。

【技术特征摘要】
1.一种测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将包含紫草素的紫草护肤膏与有机溶剂混合，获得混合溶液；(2)采用碱水溶液对混合溶液进行提取，静置，取下层碱水溶液层，获得碱水溶液层；所述碱水溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液；(3)向碱水溶液层中加入酸，调节溶液pH至4～6，加入有机溶剂进行萃取，静置，取下层有机层，去除有机层的有机溶剂，获得固体紫草素。2.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(1)中所述有机溶剂为石油醚、戊烷、正己烷、环己烷、异辛烷、乙酸乙酯中的一种以上；步骤(3)中所述有机溶剂为四氯化碳、二氯甲烷、氯仿、甲苯中的一种以上。3.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中所述酸为盐酸，盐酸的浓度为5wt～10wt％；步骤(2)中所述碱水溶液的浓度为1wt％～10wt％。4.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中所述pH为5。5.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(2)中所述提取的次数为3～5次，每次提取时，碱水溶液的加入量为混合溶液中有机溶剂体积的1～2倍，静置的时间为10～30min；提取完后，将碱水溶液层合并，获得碱水溶液层的提取液。6.根据权利要求1所述测定紫草膏中紫草素含量的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中萃取的次数为3～5次，每次萃取时，有机溶剂的量为加入酸后溶液体积的0.3～2倍，静置的时间为10～30min；萃取完后，合并有机层，去除有机层的有机溶剂，获得紫草素。7.一种测定紫草膏中紫草素含量的高效液相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：(a)将m0质量的包含紫草素的紫草护肤膏按照前处理方法进行处理，获得固体紫草素；采用甲醇将固体紫草素配成溶液，获得待测样品，待测样品的体积为V；所述前处理方法为权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：周心慧，程建华，周健，付尉芳，张定宇，张继勇，
申请(专利权)人：华南协同创新研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44