一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法技术

本发明专利技术属于检测分析技术领域，具体涉及一种鉴别蜂王浆制剂中是否掺入人工合成的10‑HDA的分析鉴别方法，该方法采用硅胶柱层析纯化方法前处理待检样品，得白色固体，然后利用反相‑高效液相色谱法检测，固定相为ODS‑C18反相柱，体积比为55：10：35的甲醇：0.03mol/L HCl：水为流动相，采用等度洗脱。该鉴别方法，灵敏度高，分离度和重现性好，鉴别特征明显，能够准确鉴别蜂王浆制剂中掺0.5%以上的人工合成的10‑HDA。

A Method for Identifying 10-HDA in Royal Jelly Preparations

The invention belongs to the field of detection and analysis technology, and specifically relates to an analysis and identification method for identifying whether or not synthetic 10 HDA is incorporated into royal jelly preparations. The method uses silica gel column chromatography purification method to pretreat the sample to be examined, and obtains white solids, and then detects by reversed-phase high performance liquid chromatography with ODS C18 as the stationary phase. Reversed-phase column, methanol: 0.03mol/L HCl with volume ratio of 55:10:35, water as mobile phase, was eluted equivalently. The method has high sensitivity, good separation and reproducibility, and obvious identification characteristics. It can accurately identify synthetic 10 HDA mixed with more than 0.5% Royal jelly.

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法
本专利技术属于检测分析
，具体涉及一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法。
技术介绍
蜂王浆是工蜂头部的分泌物，色白或淡黄，是理想的天然保健品，其味酸辛、微甘，性平；既补先天之根本，又益后天之不足；具有宣肺益气、善疏肝理气、滋补强壮、提高免疫能力的功能。蜂王浆的成分极其复杂，其主要成分包括蛋白质、多种氨基酸、维生素、脂肪酸、生物活性酶等。对人体有明显的保健作用，特别是对心血管病、血脂代谢紊乱、高血压、内分泌失调等症有良好的调治作用。蜂王浆含有26种以上的脂肪酸，目前已确认有12种，其中10-羟基-2-癸烯酸(简称10-HDA)，占总脂肪酸的50％以上，是蜂王浆的重要成分。10-HDA是由德国科学家D.J.朗格(1921)首次在工蜂上额腺中发现的，日本学者佐藤道夫也以大量数据证实。10-HDA主要分泌于工蜂的上颚腺，1957年Batendt首先报导从王浆中分离出10-HDA，至今还未在自然界其它物质中发现此化合物。由于在自然界中只有蜂王浆中才有，所以10-HDA通常又被称为王浆酸。10-HDA有多种生理活性,它具有抗菌、灭菌、强壮机体和抑制淋巴癌、乳腺癌等多种癌细胞的作用，还有增强机体免疫功能，防治脱发，并用作化妆品的增效剂，还用作治疗急性辐射损伤和化学物质所致损伤。10-HDA常温时为白色晶体，性质稳定，在室温或高温下长时间存放时，结构不会被破坏或完全消失。该化合物的结构如下：目前10-HDA主要由蜂王浆浆渣中提取，对于人工合成的10-HDA的研究仍处于起步阶段。10-HDA的含量是评判蜂王浆品质的重要指标，如果10-HDA的含量≥1.4％为合格品，含量≥1.8％为优等品。虽然所有的蜂王浆制剂中都含有10-HDA，但是由于10-HDA的来源不同，导致其含有的杂质种类不同。由于蜂王浆制剂的利润高，且目前对于10-HDA的检测标准较低，造成不法商人通过添加人工合成的10-HDA，制备出检测合格的蜂王浆制剂假货。由于10-HDA在人工合成过程中会引入一些未知的杂质，且对于这些杂质还没有相关的研究。这样可能会因为这些杂质而损害消费者的健康。这极大地危害到人民群众的食品安全，危险性极大。目前对10-HDA的相关研究较多，但都集中于蜂王浆制剂中10-HDA含量的检测，而对人工合成的10-HDA中杂质的研究没有相关报道。因此，一种简单、反应灵敏、快速的对蜂王浆制剂中10-HDA的掺假的检测方法对保证人民食品和保健品安全意义重大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法，该方法能去除绝大多数杂质的干扰，快速将蜂王浆制剂中10-HDA分离出来，并根据不同来源10-HDA的谱图，来鉴别蜂王浆制剂是否掺假。人工合成的10-HDA与由蜂王浆浆渣提取的10-HDA所含的杂质不一样，人工合成的10-HDA中的杂质，在从蜂王浆浆渣中提取的10-HDA中没有出现过。本专利技术利用该区别来鉴别蜂王浆制剂中是否掺假。为实现上述目的，本专利技术提供了一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法，主要包括以下步骤：步骤1：蜂王浆制剂的前处理：由于蜂王浆制剂中的其它成分会影响10-HDA的测定，因此需要对蜂王浆制剂进行前处理；蜂王浆制剂的前处理主要包括以下步骤：步骤1.1：将蜂王浆制剂溶解于乙醇，并上样于30～60目柱层析硅胶；步骤1.2：石油醚洗脱并去除石油醚洗脱部位；步骤1.3：体积百分数50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部位，回收过滤并干燥，得白色固体。步骤2：将步骤1得到的白色固体用体积百分数95％的乙醇溶解，然后用反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)分析检测。步骤3：色谱图分析：蜂王浆制剂中掺有人工合成的10-HDA的样品，反相-高效液相色谱图在17～22min有一个杂质峰；蜂王浆浆渣中提取的10-HDA的色谱图在17～22min无杂质峰。进一步地，步骤1.1中所述乙醇为体积百分数95％的乙醇。进一步地，步骤1.1中所述蜂王浆制剂：95％乙醇＝(2～3)g：1mL。进一步地，步骤1.2中所述石油醚的使用体积为3～5倍柱体积。进一步地，步骤1.3中所述50％乙醇的使用体积为3～4倍柱体积。进一步地，步骤2中所述反相-高效液相色谱的色谱条件如下：(1)固定相为ODS-C18反相柱，规格为：4.6×150mm，5μm；(2)体积比为45～60：10：30～45的甲醇：0.03mol/LHCl：水为流动相；(3)流速为1.0mL/min；(4)检测波长为210nm；(5)进样量为10μL；洗脱方式采用等度洗脱。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术方法反应非常灵敏，能检测出蜂王浆制剂中掺0.5％以上的人工合成的10-HDA。2、本专利技术中对样本的前处理方法包括石油醚洗脱等，可以去除绝大多数杂质的干扰。3、采用本专利技术的方法对由蜂王浆浆渣提取的10-HDA和人工合成的10-HDA的谱图存在明显的区别。而其它鉴别方法则因存在大量的杂质，对10-HDA的检测有影响。本专利技术方法特异性高，制剂中的其它成分不影响本专利技术方法的测定。4、本专利技术适用于各种剂型的蜂王浆制剂中10-HDA的分析和鉴别，前处理方法简单、操作步骤少；分析方法快速、准确；鉴别真伪方法容易、判断指标清晰明确。对蜂王浆制剂标准的提高及产业化的进一步发展意义重大。附图说明图1为实施例1中蜂王浆浆渣提取的10-HDA的RP-HPLC色谱图，10-HDA的相对保留时间为8.540min。图2为实施例1中人工合成的10-HDA的RP-HPLC色谱图，10-HDA的相对保留时间为8.322min。图3为实施例2中掺0.5％人工合成10-HDA的蜂王浆制剂中10-HDA的RP-HPLC色谱图，10-HDA的相对保留时间为8.230min。图4为实施例3中掺1.0％人工合成10-HDA的蜂王浆制剂中10-HDA的RP-HPLC色谱图，10-HDA的相对保留时间为8.387min。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限定本专利技术的保护范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。以下实施例中，从蜂王浆浆渣提取10-HDA包括以下步骤：将蜂王浆采用乙醚提取，使用10％的氢氧化钠水溶液洗涤乙醚层，在0℃滴加盐酸调整水层至pH＝2后，抽滤，得到的固体使用乙醚：石油醚＝3：1重结晶，得到含量为97％的10-HDA。所述蜂王浆购自浙江蜂之语股份有限公司。人工合成的10-HDA购自武汉远城共创科技有限公司或嘉兴市远墨化工有限公司。蜂王浆制剂包括两种，一种是新鲜蜂王浆灭菌后得到的制剂，一种是蜂王浆冻干粉，本专利技术中所述蜂王浆制剂为新鲜蜂王浆灭菌后得到的制剂。实施例1蜂王浆浆渣提取的10-HDA与人工合成的10-HDA的对比取蜂王浆浆渣提取的10-HDA(含量为97％)和人工合成的10-HDA(含量98％)各200mg，分别用体积百分数95％的乙醇溶解，定容至100mL，使用0.45μm微孔滤膜过滤后，进行RP-HPLC检测。人工合成的10-HDA购自武汉远城共创科技有限公司。设备：岛津LC-10AT型高效液相色谱仪；DiamonsilC18色谱柱5μm，4.6×150mm。色谱条件：(1)固定相为ODS-C18反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鉴别蜂王浆制剂中10‑HDA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：蜂王浆制剂的前处理：蜂王浆制剂的前处理包括以下步骤：步骤1.1：将蜂王浆制剂溶解于乙醇，并上样于30～60目柱层析硅胶；步骤1.2：石油醚洗脱并去除石油醚洗脱部位；步骤1.3：体积百分数50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部位，回收过滤并干燥，得白色固体；步骤2：将步骤1得到的白色固体用体积百分数95%的乙醇溶解，然后用反相‑高效液相色谱法分析检测；步骤3：色谱图分析：蜂王浆制剂中掺有人工合成的10‑HDA的样品，反相‑高效液相色谱图在17～22min有一个杂质峰；蜂王浆浆渣中提取的10‑HDA的色谱图在17～22min无杂质峰。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别蜂王浆制剂中10-HDA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：蜂王浆制剂的前处理：蜂王浆制剂的前处理包括以下步骤：步骤1.1：将蜂王浆制剂溶解于乙醇，并上样于30～60目柱层析硅胶；步骤1.2：石油醚洗脱并去除石油醚洗脱部位；步骤1.3：体积百分数50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱部位，回收过滤并干燥，得白色固体；步骤2：将步骤1得到的白色固体用体积百分数95%的乙醇溶解，然后用反相-高效液相色谱法分析检测；步骤3：色谱图分析：蜂王浆制剂中掺有人工合成的10-HDA的样品，反相-高效液相色谱图在17～22min有一个杂质峰；蜂王浆浆渣中提取的10-HDA的色谱图在17～22min无杂质峰。2.根据权利要求1所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨俊杰，陈重，郭磊磊，潘岩，郭心灵，
申请(专利权)人：信阳农林学院，
类型：发明
国别省市：河南,41