一种Fmoc氨基酸精制方法技术

本发明专利技术属于生物小分子制备技术领域，特别涉及一种Fmoc氨基酸精制方法，步骤1，将H‑Asn(Trt)‑OH溶于碳酸钠的水溶液中；步骤2，将Fmoc‑Osu溶解于丙酮中；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至‑4‑0℃，搅拌条件下，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1‑4℃，搅拌1小时，升温至20‑28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂，加热至65‑75℃，加入石油醚，将析出固体分离；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂，加热至75‑85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc‑Asn(Trt)‑OH晶体；本发明专利技术制成的Fmoc‑Asn(Trt)‑OH纯度高达99％，产品质量高，可用于多肽合成。

【技术实现步骤摘要】
一种Fmoc氨基酸精制方法
本专利技术属于生物小分子制备
，特别涉及一种Fmoc氨基酸精制方法。
技术介绍
多肽合成过程中氨基酸易发生错接和许多副反应，需要对氨基酸进行保护，合成多肽后再脱去保护基团，即芴甲氧羰酰基(Fmoc)是常见的保护基团。现有技术中，一般通过用Fmoc-Cl或Fmoc-Osu引入Fmoc，合成的Fmoc氨基酸往往纯度不高，影响后续合成多肽的产品质量。Fmoc-Asn(Trt)-OH，别名:Nα-(9-芴甲氧羰基)-Nγ-三苯甲基-L-天冬酰胺，是合成多肽的重要原料。
技术实现思路
本专利技术解决现有技术中存在的上述技术问题，提供一种Fmoc氨基酸精制方法。本专利技术中一些常用的缩写具有以下含义：Fmoc：芴甲氧羰酰基Asn：天冬酰胺Trt：三苯甲基Fmoc-Osu：芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺为解决上述问题，本专利技术的技术方案如下：一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc-Asn(Trt)-OH，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为3.2-4.8:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为8-10％；步骤2，将Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.2-1.8:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至-4-0℃，搅拌条件下，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1-4℃，搅拌1小时，升温至20-28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂，加热至65-75℃，加入石油醚，将析出固体分离；所述乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂中，乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.5-3:4.5:4.5；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂，加热至75-85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc-Asn(Trt)-OH晶体；所述乙醇、水的混合溶剂中，乙醇、水的体积比为6-9:3。优选地，所述步骤1中H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为4:14。优选地，所述步骤2中Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.5:2。优选地，所述步骤3中，搅拌条件为：搅拌速度80-100rpm。优选地，所述步骤4中，乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.7:4.5:4.5。优选地，所述步骤5中，乙醇、水的体积比为7.5:3。相对于现有技术，本专利技术的优点如下，本专利技术Fmoc氨基酸精制方法步骤简单，采用的原料廉价无毒，溶剂可回收，节约成本，绿色环保；本专利技术制成的Fmoc-Asn(Trt)-OH纯度高达99％，产品质量高，可用于多肽合成。具体实施方式实施例1：一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc-Asn(Trt)-OH，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为3.2:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为8％；步骤2，将Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.2:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至-4-0℃，搅拌条件下(搅拌速度80rpm)，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1-4℃，搅拌1小时，升温至20-28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂(乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.5:4.5:4.5)，加热至65-75℃，加入石油醚，将析出固体分离；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂(乙醇、水的体积比为6:3)，加热至75-85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc-Asn(Trt)-OH晶体，纯度为98.2％。实施例2：一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc-Asn(Trt)-OH，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为4:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为9％；步骤2，将Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.5:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至-4-0℃，搅拌条件下(搅拌速度90rpm)，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1-4℃，搅拌1小时，升温至20-28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂(乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.7:4.5:4.5)，加热至65-75℃，加入石油醚，将析出固体分离；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂(乙醇、水的体积比为7.5:3)，加热至75-85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc-Asn(Trt)-OH晶体，纯度为99.5％。实施例3：一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc-Asn(Trt)-OH，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为4.8:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为10％；步骤2，将Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.8:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至-4-0℃，搅拌条件下(搅拌速度100rpm)，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1-4℃，搅拌1小时，升温至20-28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂(乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为3:4.5:4.5)，加热至65-75℃，加入石油醚，将析出固体分离；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂(乙醇、水的体积比为9:3)，加热至75-85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc-Asn(Trt)-OH晶体，纯度为98.9％。需要说明的是上述实施例仅仅是本专利技术的较佳实施例，并没有用来限定本专利技术的保护范围，在上述基础上做出的等同替换或者替代均属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc‑Asn(Trt)‑OH，其特征在于，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H‑Asn(Trt)‑OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H‑Asn(Trt)‑OH与碳酸钠的质量比为3.2‑4.8:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为8‑10％；步骤2，将Fmoc‑Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc‑Osu与丙酮的质量比为1.2‑1.8:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至‑4‑0℃，搅拌条件下，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1‑4℃，搅拌1小时，升温至20‑28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂，加热至65‑75℃，加入石油醚，将析出固体分离；所述乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂中，乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.5‑3:4.5:4.5；步骤5，向步骤4制得的析出固体中加入乙醇、水的混合溶剂，加热至75‑85℃，迅速降温，结晶制成Fmoc‑Asn(Trt)‑OH晶体；所述乙醇、水的混合溶剂中，乙醇、水的体积比为6‑9:3。

【技术特征摘要】
1.一种Fmoc氨基酸精制方法，所述Fmoc氨基酸为Fmoc-Asn(Trt)-OH，其特征在于，所述精制方法包括以下步骤：步骤1，将H-Asn(Trt)-OH溶于碳酸钠的水溶液中，所述H-Asn(Trt)-OH与碳酸钠的质量比为3.2-4.8:14，所述碳酸钠的水溶液中碳酸钠的质量分数为8-10％；步骤2，将Fmoc-Osu溶解于丙酮中，所述Fmoc-Osu与丙酮的质量比为1.2-1.8:2；步骤3，将步骤1制成的混合溶液降温至-4-0℃，搅拌条件下，逐滴滴加步骤2制得的混合溶液，温度调整至1-4℃，搅拌1小时，升温至20-28℃，搅拌2小时，加入水和乙醚萃取；调节pH为2，将析出固体分离；步骤4，向步骤3制得的析出固体中加入乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂，加热至65-75℃，加入石油醚，将析出固体分离；所述乙醇、乙酸乙酯、水的混合溶剂中，乙醇、乙酸乙酯、水的体积比为1.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，贺秀慧，杨明，
申请(专利权)人：南京肽业生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32