The invention belongs to the technical field of analytical chemistry, and specifically discloses a high performance liquid chromatographic analysis and detection method for adenine-related substances. The steps are as follows: 1. Preparing the solution of adenine to be tested; Mobile phase: Preparing the solution of ammonium acetate, adjusting the pH to 3.6-4.6 with glacial acetic acid, and finally adjusting the concentration of ammonium acetate to 30-70 mmol/L, so as to obtain the solution. Mixing with acetonitrile in the proportion of 97:3-93:7 as mobile phase; 2. Turning on the ultraviolet detector, the detection wavelength is 238-242 nm, then injecting the solution of adenine to be measured, filling the chromatographic column with mixed silica gel, separating with reversed-phase and weak-cation exchange mode, and then rinsing with mobile phase at the flow rate of 0.8-1.2 ml/min; 3. According to the flow rate of 0.8-1.2 ml/min. The peak area normalization method was used to calculate the content of the related substances of adenine. Compared with the method of American Pharmacopoeia, the method overcomes the problem that the most difficult impurity 6 -chloropurine and adenine can not be separated effectively. The method is simple and easy to operate. The methodological validation is carried out. It is scientific and precise, and the quality of adenine can be effectively controlled.
【技术实现步骤摘要】
一种腺嘌呤有关物质的高效液相色谱分析检测方法及应用
本专利技术属于分析化学领域,具体涉及腺嘌呤工艺生产中可能存在的有关物质次黄嘌呤、7-甲基腺嘌呤和6-氯嘌呤的高效液相色谱分析检测方法。
技术介绍
腺嘌呤:化学名称为6-氨基-9H-嘌呤,分子量为135.1,其化学结构式为:杂质次黄嘌呤:化学名称为1,7-二氢-6H嘌呤-6酮,分子量为136.1,其化学结构式为:杂质7-甲基腺嘌呤:分子量为149.2,其化学结构式为:杂质6-氯嘌呤:化学名称为6-氯-1H-嘌呤,分子量为154.6,其化学结构式为:腺嘌呤,是核酸的组成成分,参与遗传物质的合成。能促进白细胞增生,使白细胞数目增加,用于防治各种原因引起的白细胞减少症,特别是用于肿瘤化学治疗时引起的白细胞减少症,也用于急性粒细胞减少症。腺嘌呤还是嘌呤类细胞激动素如6-苄氨基嘌呤、异戊烯基腺嘌呤、苄吡喃腺嘌呤等的重要中间体,是腺苷、ATP、ADP和抗病毒药物的重要合成原料。目前腺嘌呤的工业生产,主要采用次黄嘌呤为原料,经过三氯氧磷氯化得到6-氯嘌呤中间体,然后依次进行氨化反应和催化氢化反应后,制备得到腺嘌呤。根据反应路线可知,次黄嘌呤是关键起始物料,6-氯嘌呤是关键中间体,7-甲基腺嘌呤是合成反应中的副产物,所以在腺嘌呤有关物质检测中,需要重点检测这三个杂质的量。目前各国药典中,只有美国药典采用高效液相色谱法对腺嘌呤有关物质进行检测,但是美国药典的腺嘌呤有关物质方法中并没有订入已知杂质,并且通过运行该方法,发现无法将杂质6-氯嘌呤和腺嘌呤有效分离开,同时通过查阅大量中外文献及专利,还没有发现有通过一种液相色谱的方法 ...
【技术保护点】
1.一种腺嘌呤有关物质的高效液相色谱分析检测方法,其特征在于包括如下步骤:1.1、取腺嘌呤待测品,用纯水配制成腺嘌呤待测品溶液,并配置相应的流动相进行洗脱;所述的流动相的配制方法为:配制乙酸铵溶液然后用冰乙酸调节其pH值至3.6~4.6,得缓冲液,将缓冲液与乙腈进行混合作为流动相;所述缓冲液中乙酸铵浓度为30 mmol/L ~70 mmol/L;所述流动相中缓冲液与乙腈的体积比例为97:3~93:7;1.2、先开启紫外光吸收检测器,使用波长为238~242nm的紫外光进行检测,然后将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中,所述的色谱柱以混合模式的硅胶作为填充剂,再用流动相以0.8~1.2 ml/min流速冲洗;1.3、根据色谱图,采用峰面积归一化法计算腺嘌呤中各有关物质的含量。
【技术特征摘要】
1.一种腺嘌呤有关物质的高效液相色谱分析检测方法,其特征在于包括如下步骤:1.1、取腺嘌呤待测品,用纯水配制成腺嘌呤待测品溶液,并配置相应的流动相进行洗脱;所述的流动相的配制方法为:配制乙酸铵溶液然后用冰乙酸调节其pH值至3.6~4.6,得缓冲液,将缓冲液与乙腈进行混合作为流动相;所述缓冲液中乙酸铵浓度为30mmol/L~70mmol/L;所述流动相中缓冲液与乙腈的体积比例为97:3~93:7;1.2、先开启紫外光吸收检测器,使用波长为238~242nm的紫外光进行检测,然后将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中,所述的色谱柱以混合模式的硅胶作为填充剂,再用流动相以0.8~1.2ml/min流速冲洗;1.3、根据色谱图,采用峰面积归一化法计算腺嘌呤中各有关物质的含量。2.根据权利要求1所述的腺嘌呤有关物质的高效液相...
【专利技术属性】
技术研发人员:汤进,史自东,张茂,王改改,黄开果,
申请(专利权)人:湖北丽益医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:湖北,42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。