在免疫疗法中抑制TGFβ制造技术

本发明专利技术涉及通过提供包括含有结构域抗体的TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂和细胞免疫疗法的组合疗法来治疗诸如癌症的疾病的改进的组合物和方法，特别是其中细胞免疫疗法是表达嵌合抗原受体(CAR)或修饰的T细胞受体(TCR)的免疫调节细胞。本发明专利技术进一步涉及多核苷酸、表达载体和构成组合疗法的免疫调节细胞，以及产生所述免疫调节细胞的方法。

Inhibiting TGFbeta in Immunotherapy

The present invention relates to improved compositions and methods for the treatment of diseases such as cancer by providing combinatorial therapies comprising TGF beta receptor (TGF beta R) antagonists containing domain antibodies and cellular immunotherapy, in particular, in which cellular immunotherapy is an immunomodulatory fine expression of chimeric antigen receptor (CAR) or modified T cell receptor (TCR). Cell. The present invention further relates to polynucleotides, expression vectors, immunoregulatory cells constituting combination therapy, and methods for producing the immunoregulatory cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在免疫疗法中抑制TGFβ相关申请的交叉引用本申请要求于2016年4月5日提交的第62/318,441号美国临时申请的优先权，其公开通过引用整体并入本专利技术。
本专利技术涉及包括细胞免疫疗法，诸如嵌合抗原受体(CAR)或遗传修饰的T细胞受体(TCR)，与TGFβ受体拮抗剂组合以延长诱导的免疫应答的组合疗法。
技术介绍
免疫系统的T细胞通过T细胞受体(TCR)识别特异性抗原并与之相互作用，T细胞受体在识别或与这些抗原结合后，引起细胞活化。TCR在T细胞表面表达并包含高度可变的蛋白质链(诸如阿尔法(α)和贝塔(β)链或伽马(γ)和德尔塔(δ)链)，其表达为与CD3链分子的复合物的一部分。CD3链分子具有固定结构，特别是CD3ζ链负责TCR:抗原结合后的细胞内信号传导。TCR识别由主要组织相容性复合体(MHC)的蛋白质呈递给它的抗原肽，所述蛋白质在所有有核细胞(例如抗原呈递细胞和其它T细胞靶标)的表面上表达。免疫系统的自然杀伤(NK)细胞在进化中比T细胞发育得更早并将先天和适应性免疫相联系。与T细胞一样，NK细胞识别并与自身细胞上的特异性配体相互作用，但不是使用TCR，它们依赖于过多的活化和抑制信号，这些信号被整合以导致效应子功能的诱导或抑制。NK细胞是先天效应细胞，其作为针对某些病毒感染和肿瘤的第一道防线(Biron等,(1999)Annu.Rev.Immunol.17:189-220；Trinchieri(1989)Adv.Immunol.47:187-376)。先天效应细胞以快速动力学识别并消除其靶标，而无需事先致敏，因此，NK细胞需要感知细胞是否被转化、感染或应激以区分异常和健康组织。根据“丢失自我”现象(Karre等,(1986)Nature319:675-678)，NK细胞通过寻找和消除具有异常主要组织相容性复合体(MHC)I类表达的细胞来实现这一点。细胞免疫疗法是基因治疗的快速发展领域，其主要集中于使用由T细胞和/或NK细胞携带的遗传修饰的T细胞受体(TCR)和嵌合抗原受体(CAR)。嵌合抗原受体(CAR)已经被开发为人工免疫受体以在T细胞中产生新的特异性。这些合成受体含有靶结合结构域，其经由单个融合分子中的柔性接头与一个或多个信号传导结构域相关联。靶结合结构域用于将T细胞靶向病理性细胞表面上的特定靶标，并且信号传导结构域含有用于T细胞活化和增殖的分子机制。穿过T细胞膜的柔性接头(即，形成跨膜结构域)允许细胞膜展示CAR的靶结合结构域。CAR已经成功地允许T细胞重定向针对来自各种恶性肿瘤(包括淋巴瘤和实体瘤)的肿瘤细胞的表面上表达的抗原(Grosset等,(1989)TransplantProc.,21(1Pt1):127-30；Jena等,(2010)Blood,116(7):1035-44)。到目前为止，CAR的发展已经包括三代。第一代CAR包含附着于源自CD3ζ或Fc受体γ链的细胞质区域的信号传导结构域的靶结合结构域。第一代CAR被示出成功地将T细胞重定向至所选靶标，但它们未能在体内提供延长的扩增和抗肿瘤活性。第二代和第三代CAR通过包括诸如CD28、OX-40(CD134)和4-1BB(CD137)的共刺激分子而集中于增强修饰的T细胞存活和提高增殖。细胞免疫治疗策略还集中于遗传修饰TCRα和β-链以重定向抗原特异性和/或优化抗原亲和力。具有CAR或遗传修饰的TCR的T细胞可用于消除疾病环境中的病理性细胞。一个临床目的是在失血和T细胞或NK细胞分离后经由载体(例如，慢病毒载体)用含有CAR或TCR的表达构建体的重组DNA转化患者细胞。在扩增T细胞或NK细胞后，将它们重新引入患者体内，目的是靶向并杀死病理靶细胞。然而，本领域仍然需要提高细胞免疫疗法的功效。特别是，许多疾病细胞如恶性癌细胞产生免疫抑制微环境，其通常下调免疫应答，特别是向肿瘤浸润的淋巴细胞提供抑制信号。因此，需要改善细胞免疫疗法，以便它们能够抵抗由敌对疾病微环境介导的负免疫调节。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面，提供了一种药物组合物，包括：(a)TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂，其包含结构域抗体；和(b)细胞免疫疗法。根据本专利技术的另一方面，提供了包含编码包含结构域抗体的TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂的序列，和编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的序列的多核苷酸。根据本专利技术的另一方面，提供了包含如本专利技术所定义的多核苷酸的表达载体。根据本专利技术的另一方面，提供了包含如本专利技术所定义的多核苷酸或如本专利技术所定义的表达载体的免疫调节细胞。根据本专利技术的另一方面，提供了用于治疗的如本专利技术所定义的免疫调节细胞。根据本专利技术的另一方面，提供了一种药物组合物，包括：(1)如本专利技术所定义的多种免疫调节细胞；和(2)药学上可接受的载体。根据本专利技术的另一方面，提供了产生抗原特异性免疫调节细胞的方法，该方法包括向免疫调节细胞中引入如本专利技术所定义的多核苷酸或表达载体。根据本专利技术的另一方面，提供了一种治疗方法，包括向受试者施用如本专利技术所定义的表达载体或免疫调节细胞。根据本专利技术的另一方面，提供了一种治疗方法，包括向受试者施用：(a)细胞免疫疗法，和(b)TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂，其包含结构域抗体。根据本专利技术的另一方面，提供了用于治疗选自癌症、自身免疫疾病或感染的疾病的试剂盒，其包含本专利技术所定义的药物组合物、多核苷酸、表达载体或免疫调节细胞。附图说明图1描绘了基于MesoScaleDiscovery(MSD)的配体结合测定的结果，以定量在各种条件下干扰素γ(IFN-γ)在人CD4+和CD8+T-淋巴细胞中的表达。将用抗CD3和抗CD28抗体活化的T淋巴细胞与不同浓度的包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的TGFβR拮抗剂dAb和/或人TGFβ一起温育24、48和72小时的时间点。图2描绘了基于MSD的配体结合测定的结果，以定量在各种条件下IL-2在人CD4+和CD8+T-淋巴细胞中的表达。将用抗CD3和抗CD28抗体活化的T淋巴细胞与不同浓度的包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的TGFβR拮抗剂dAb和/或人TGFβ一起温育24、48和72小时的时间点。图3描绘了基于MSD的配体结合测定的结果，以定量在各种条件下IL-6在人CD4+和CD8+T-淋巴细胞中的表达。将用抗CD3和抗CD28抗体活化的T淋巴细胞与不同浓度的包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的TGFβR拮抗剂dAb和/或人TGFβ一起温育24、48和72小时的时间点。图4描绘了基于MSD的配体结合测定的结果，以定量在各种条件下IL-10在人CD4+和CD8+T-淋巴细胞中的表达。将用抗CD3和抗CD28抗体活化的T淋巴细胞与不同浓度的包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的TGFβR拮抗剂dAb和/或人TGFβ一起温育24、48和72小时的时间点。图5描绘了基于MSD的配体结合测定的结果，以定量在各种条件下IL-17在人CD4+和CD8+T-淋巴细胞中的表达。将用抗CD3和抗CD28抗体活化的T淋巴细胞与不同浓度的包含SEQIDNO:72的氨基酸序列的TGFβR拮抗剂dAb和/或人TGFβ一起温育24、48和72小时的时间点。图6描绘了流式细胞术测定的结果，以定量在各种条件下C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物组合物，包括：(a)TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂，其包含结构域抗体；和(b)细胞免疫疗法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.05 US 62/318,4411.一种药物组合物，包括：(a)TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂，其包含结构域抗体；和(b)细胞免疫疗法。2.如权利要求1所述的药物组合物，其中TGFβR拮抗剂结合TGFβR或TGFβ。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中TGFβR拮抗剂结合TGFβII型受体(TGFβRII)。4.如权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中TGFβR拮抗剂选自结构域抗体、双结构域抗体或连接到抗体的单链Fc区的结构域抗体。5.如权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其中细胞免疫疗法是表达嵌合抗原受体(CAR)或修饰的T细胞受体(TCR)的免疫调节细胞。6.如权利要求5所述的药物组合物，其中CAR或TCR结合肿瘤相关抗原或病原体抗原。7.权利要求6-8中任一项所述的药物组合物，其中免疫调节细胞衍生自炎性T淋巴细胞、毒性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞、自然杀伤细胞或自其分化淋巴细胞的多能干细胞。8.如权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其用于治疗。9.如权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其用于治疗选自癌症、自身免疫疾病或感染的疾病。10.一种多核苷酸，包括编码包含结构域抗体的TGFβ受体(TGFβR)拮抗剂的序列，和编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的序列。11.如权利要求10所述的多核苷酸，其中编码TGFβR拮抗剂的序列和编码CAR或TCR的序列各自被可操作地连接到启动子元件。12.如权利要求10或11所述的多核苷酸，其中CAR或TCR结合肿瘤相关抗原或病原体抗原。13.如权利要求10-12中任一项所述的多核苷酸，其中TGFβR拮抗剂结合TGFβR或TGFβ。14.如权利要求10-13中任一项所述的多核苷酸，其中TGFβR拮抗剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：SJ布雷特，
申请(专利权)人：葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB