一种疏水性多肽的纯化方法技术

本发明专利技术属于生物分子分离纯化技术领域，特别涉及一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N‑二甲基甲酰胺，配置成4‑40mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：C18；流动相：溶液A：三氟醋酸‑乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1‑2:100；溶液B：三氟醋酸‑水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1‑2:100；流速：1‑2ml/min；本发明专利技术可以对疏水性多肽进行纯化，纯化方法简单，高效，经本方法得到的疏水性多肽纯度高，且在纯化过程中原料损失少，节约成本，绿色环保。

Purification of hydrophobic polypeptide

The invention belongs to the technical field of separation and purification of biological molecules, and particularly relates to a purification method of hydrophobic polypeptide, including the following steps: step 1, dissolving the crude hydrophobic polypeptide in N, N dimethylformamide and configuring it into a 4 40mg/L polypeptide solution; step 2, performing high performance liquid chromatography with the polypeptide solution prepared from step 1. The separation and purification conditions of the high performance liquid chromatography are as follows: chromatographic column: C18; mobile phase: solution A: trifluoroacetic acid acetonitrile solution, the mass ratio of trifluoroacetic acid to acetonitrile is 1 2: 100; solution B: trifluoroacetic acid aqueous solution, the mass ratio of trifluoroacetic acid to water is 1 2: 100; flow rate: 1 2ml/min; and the invention. The hydrophobic polypeptide can be purified. The purification method is simple and efficient. The purity of the hydrophobic polypeptide obtained by this method is high, and the loss of raw materials is small, the cost is saved, and the environment is green.

【技术实现步骤摘要】
一种疏水性多肽的纯化方法
本专利技术属于生物分子分离纯化
，特别涉及一种疏水性多肽的纯化方法。
技术介绍
多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由三个或三个以上氨基酸分子脱水缩合而成的化合物都可以成为叫多肽。疏水性多肽指的是富含疏水性氨基酸的多肽。疏水性氨基酸为侧链具有高疏水性的氨基酸之总称氨基酸侧链的疏水性，是从各氨基酸的疏水性减去甘氨酸疏水性之值来表示。疏水性氨基酸有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸和蛋氨酸(甲硫氨酸)。疏水性氨基酸在蛋白质内部，由于其疏水的相互作用，而在保持蛋白质的三级结构上起作用。另外在酶和基质、抗体和抗原间的相互作用等各种非共价键的分子结合方面，具有重要作用，例如在抗体的与抗原结合的部位上有很多疏水性氨基酸，它参与与半抗原的结合。在维持生物膜的结构方面，疏水性氨基酸也具有作用，例如在红血球膜上存在的血型糖蛋白其膜内部分有许多疏水性氨基酸，形成一个疏水的区域。在多肽的合成和切割中会产生不完全肽、反应副产物、残留试剂等，有必要对多肽进行纯化。
技术实现思路
本专利技术解决现有技术中存在的上述技术问题，提供一种疏水性多肽的纯化方法。为解决上述问题，本专利技术的技术方案如下：一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成4-40mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：C18；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1-2:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1-2:100；流速：1-2ml/min；检测波长：220nm。优选地，所述色谱柱的型号为：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um。优选地，所述流动相中溶液A的配比为：三氟醋酸与乙腈的质量比为1:100。优选地，所述流动相中溶液B的配比为：三氟醋酸与水的质量比为1:100。优选地，所述流速为2ml/min。优选地，所述疏水性多肽是包含甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸中任意一种或几种以上的氨基酸的多肽。优选地，所述粗品疏水性多肽的纯度为87-89％。相对于现有技术，本专利技术的优点如下，本专利技术可以对疏水性多肽进行纯化，纯化方法简单，高效，经本方法得到的疏水性多肽纯度高，且在纯化过程中原料损失少，节约成本，绿色环保。附图说明图1为实施例1的高效液相色谱图；图2为实施例2的高效液相色谱图；图3为实施例3的高效液相色谱图；图4为实施例4的高效液相色谱图。具体实施方式下列实施例中所采用的疏水性多肽粗品的纯度为87-89％。实施例1：一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成20mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1:100；流速：1ml/min；检测波长：220nm。所述疏水性多肽是Fmoc-Leu-Pro-Gly-OH；高效液相色谱图如图1所示。分离出的产物中，疏水性多肽纯度高达99.3％。实施例2：一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成4mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1:100；流速：2ml/min；检测波长：220nm。所述疏水性多肽是ILE-LEU-LYS-GLU-PRO-VAL-HIS-GLY-VAL；高效液相色谱图如图2所示。分离出的产物中，疏水性多肽纯度高达99.1％。实施例3：一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成40mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为2:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为2:100；流速：2ml/min；检测波长：220nm。所述疏水性多肽是KAFSPEVIPMF；高效液相色谱图如图3所示。分离出的产物中，疏水性多肽纯度高达99.0％。实施例4：一种疏水性多肽的纯化方法，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽溶粗品解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成10mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1:100；流速：1ml/min；检测波长：220nm。所述疏水性多肽是TPQDLNTML；高效液相色谱图如图4所示。分离出的产物中，疏水性多肽纯度高达99.2％。需要说明的是上述实施例仅仅是本专利技术的较佳实施例，并没有用来限定本专利技术的保护范围，在上述基础上做出的等同替换或者替代均属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种疏水性多肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N‑二甲基甲酰胺，配置成4‑40mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：C18；流动相：溶液A：三氟醋酸‑乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1‑2:100；溶液B：三氟醋酸‑水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1‑2:100；流速：1‑2ml/min；检测波长：220nm。

【技术特征摘要】
1.一种疏水性多肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成4-40mg/L的多肽溶液；步骤2，将步骤1制成的多肽溶液进行高效液相色谱分离纯化；所述高效液相色谱的分离纯化条件为：色谱柱：C18；流动相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸与乙腈的质量比为1-2:100；溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸与水的质量比为1-2:100；流速：1-2ml/min；检测波长：220nm。2.如权利要求1所述的疏水性多肽的纯化方法，其特征在于，所述色谱柱的型号为：DiamonsilC18，4.6*250mm，5um。3.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，贺秀慧，杨明，
申请(专利权)人：南京肽业生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32