一种鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途制造技术

本发明专利技术公开了一种鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。本发明专利技术发现，鹅掌楸内酯为骨形成蛋白9的有效抑制剂。根据文献记载，骨形成蛋白9参与包括膀胱癌在内的多种肿瘤的发生、发展和转移，抑制骨形成蛋白9可以抑制这些肿瘤的增殖和迁移。本发明专利技术发现，用新发现的骨形成蛋白9的抑制剂鹅掌楸内酯作用于人膀胱癌细胞后，其增殖和迁移能力确实显著降低，鹅掌楸内酯可以用于制备抑制膀胱癌转移的药物，可以用于制备治疗膀胱癌的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途
本专利技术属于生物医药领域，涉及鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。
技术介绍
骨形成蛋白9(BMP9)又称生长分化因子2(GDF2)，是BMP家族的一员。研究表明，BMP9参与骨形成、胚胎发育、肿瘤发生等多种生物学功能。苟理尧等发现，BMP9在人膀胱癌细胞中高表达，BMP9可以促进人膀胱癌细胞的增殖和迁移，BMP9被抑制后人膀胱癌细胞的增殖和迁移均显著降低(骨形成蛋白9对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响，中国生物工程杂志，2018年3月)。因此，BMP9的抑制剂有望用于膀胱癌等肿瘤的治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。本专利技术技术方案如下：鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。鹅掌楸内酯用于制备抑制膀胱癌转移的药物的生物医药用途。鹅掌楸内酯用于制备治疗膀胱癌的药物的生物医药用途。一种抑制膀胱癌转移的药物制剂，以鹅掌楸内酯为活性成分，还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。一种治疗膀胱癌的药物制剂，以鹅掌楸内酯为活性成分，还含有药学上可以接受的辅料，制成药学上可以接受的剂型。本专利技术对现有技术的贡献：本专利技术发现，鹅掌楸内酯为骨形成蛋白9的有效抑制剂。根据文献记载，骨形成蛋白9参与包括膀胱癌在内的多种肿瘤的发生、发展和转移，抑制骨形成蛋白9可以抑制这些肿瘤的增殖和迁移。本专利技术发现，用新发现的骨形成蛋白9的抑制剂鹅掌楸内酯作用于人膀胱癌细胞后，其增殖和迁移能力确实显著降低，鹅掌楸内酯可以用于制备抑制膀胱癌转移的药物，可以用于制备治疗膀胱癌的药物。附图说明图1为鹅掌楸内酯和对比化合物北美鹅掌楸内酯的化学结构式；图2为鹅掌楸内酯对BMP9mRNA含量的影响；图3为鹅掌楸内酯对BMP9蛋白含量的影响；图4为鹅掌楸内酯对人膀胱癌细胞增殖能力的影响；图5为鹅掌楸内酯对人膀胱癌细胞迁移能力的影响。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：鹅掌楸内酯对BMP9的抑制作用一、实验材料鹅掌楸内酯和对比化合物北美鹅掌楸内酯的纯度在98％以上，化学结构式如图1。膀胱癌T-24购于上海细胞生物研究所。RPMI-1640培养基、胎牛血清购于HyClone公司。TRIzol购于Invitrogen公司，逆转录及PCR相关试剂购于TaKaRa公司，Westernblot及蛋白质提取相关试剂均购自上海碧云天生物技术公司，鼠抗人β-actin单抗购自SantaCruz公司，兔抗人BMP9多克隆抗体购自Abcam公司，兔抗人β-catenin单抗购自CST公司，HRP标记山羊抗兔(鼠)IgG购自中杉金桥公司。二、实验方法1、细胞培养使用含10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的1640培养基，将膀胱癌T-24细胞在含5％CO2的37℃培养箱中常规培养传代。2、分组和给药实验分为鹅掌楸内酯低浓度组(10μM)、鹅掌楸内酯高浓度组(20μM)、北美鹅掌楸内酯低浓度组(10μM)、北美鹅掌楸内酯高浓度组(20μM)和对照组(不含药)。3、实时定量PCR检测各组细胞中BMP9mRNA含量取对数生长期膀胱癌T-24细胞，按上述分组培养48h。培养48h后，Trizol法分别提取各组细胞RNA，取0.15μg逆转录成cDNA，进行Q-PCR分析。β-actin正向引物为5'-GATGACCCAGATCATGTTTGAG-3'，β-actin反向引物为5'-AGGGCATACCCCTCGTAGAT-3'；BMP9的正向引物为5'-CTGCCCTTCTTTGTTGTCTT-3'，BMP9反向引物为5'-CCTTACACTCGTAGGCTTCATA-3'。以β-actin作为内参，以BMP9mRNA/β-actinmRNA作为各组BMP9mRNA相对含量，并且设定对照组BMP9mRNA相对含量为1。4、Westernblot检测各组细胞中BMP9蛋白含量取对数生长期膀胱癌T-24细胞，按上述分组培养48h。培养48h后，收集各组细胞后，使用蛋白裂解液4℃裂解30min，4℃高速离心15min，提取细胞总蛋白并定量。取50μg已加入上样缓冲液及煮沸变性的蛋白，在120V电泳分离，210mA转移蛋白至PVDF膜；转膜后用50g/L的脱脂奶粉37℃封闭60min；加兔抗人BMP9mAb(1:5000)，小鼠抗人β-actinmAb(1:1000)，4℃过夜；洗膜10min×3次，分别加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG或辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG(1:5000)，37℃孵育1h；使用1×TBST洗膜10min×3次，ECL显影，最后用QuantityOne4.6.2软件，以β-actin为内参对照对各组条带进行分析，以BMP9蛋白条带灰度/β-actin蛋白条带灰度作为各组BMP9蛋白相对含量，并且设定对照组BMP9蛋白相对含量为1。5、统计学方法应用SPSS19.0统计软件进行数据分析，计量数据以均数±标准差表示，多组间计量数据比较采用One-wayANOVA分析，组间比较采用LSD，以P<0.05表示差异具有统计学意义。三、实验结果结果如表1和图2-3所示。与对照组相比，鹅掌楸内酯低浓度组、高浓度组细胞中BMP9mRNA含量、BMP9蛋白含量均显著降低(P＜0.05)，且呈现浓度依赖。北美鹅掌楸内酯低浓度组、高浓度组细胞中BMP9mRNA含量、BMP9蛋白含量与对照组无明显差异。表1各组细胞中BMP9mRNA、BMP9蛋白含量BMP9mRNA相对含量BMP9蛋白相对含量对照组11鹅掌楸内酯低浓度组0.720.68鹅掌楸内酯高浓度组0.550.51北美鹅掌楸内酯低浓度组0.970.96北美鹅掌楸内酯高浓度组0.950.95实施例2：鹅掌楸内酯对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用一、实验材料鹅掌楸内酯和对比化合物北美鹅掌楸内酯同实施例1。膀胱癌T-24购于上海细胞生物研究所。RPMI-1640培养基、胎牛血清购于HyClone公司。噻唑蓝(MTT)购于美国Sigma公司。二、实验方法1、细胞培养同实施例1。2、分组和给药同实施例1。3、细胞增殖活力测定采用MTT法，收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，按5×103个/孔密度接种于96孔板中，每孔加入100μL细胞悬液；待细胞贴壁后按上述方法进行分组给药培养，每组设3个复孔，培养48h后弃上清，每孔加入20μLMTT溶液(5mg/mL)，37℃孵育4h，弃培养液，每孔加入150μL二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，用酶标仪测定490nm处吸光度(A)值，实验独立重复3次。按如下公式计算各给药组细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率＝1-[(A用药组-A空白孔)/(A对照组-A空白孔)]×l00％4、细胞迁移能力测定取对数生长期膀胱癌T-24细胞，按上述分组培养48h。培养48h后，收集细胞，调整细胞悬液浓度至2.5×105个/mL，将200μL细胞悬液到加入包被Matigel基质胶的Transwell上室，下室加入600μL含10％血清的RPMI-1640培养基，将其放到培养箱中再培养24h本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。

【技术特征摘要】
1.鹅掌楸内酯用作骨形成蛋白9抑制剂的生物医药用途。2.鹅掌楸内酯用于制备抑制膀胱癌转移的药物的生物医药用途。3.鹅掌楸内酯用于制备治疗膀胱癌的药物的生物医药用途。4.一种抑制膀胱癌转移的药物制剂，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍会梅，王彬，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32