一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法技术

本发明专利技术公开一种硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8‑12%、媒染剂（铝盐）3‑7%、氢氟酸0.1‑0.5%，其余为去离子水。同时提供检测脏器组织的硅藻检验方法。本发明专利技术硅藻荧光染色液有助于硅藻形态的展现，硅藻中硅质被氢氟酸溶解，使胶质层暴露出来，媒染剂（铝盐）促使荧光素标记到胶质层上，在对应波长的荧光显微镜下观察，在紫外光的激发下，硅藻的轮廓清晰的表现出来。

【技术实现步骤摘要】
一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法
本专利技术属于硅藻检验
，具体涉及一种硅藻荧光染色液及检测脏器组织的硅藻检验方法。
技术介绍
溺死是法医学实践中的常见案件类型，亦是法医学检验的难点问题之一。在检案实践中，判断水中尸体是生前入水溺死还是死后抛尸入水，以及落水地点等情况时，硅藻的实验室检查尤为重要。溺死尸体硅藻检验的相关研究主要集中于溺水尸体器官组织中是否存在硅藻、检出硅藻的种类等法医学关注的议题，但长期以来硅藻检验方法的研究进展较为缓慢，近年，随着生物科学领域技术方法的突飞猛进，硅藻检验方法又开始成为研究的热点之一。目前常用硅藻检验基本上可分为：基于形态学观察方法、基于DNA序列的分子种属鉴定方法、基于硅藻化学元素组成差异的鉴定方法等类型。硅藻种类繁多，共同特征是细胞壁中含有不易被破坏的含水硅酸盐成分，在浓酸中煮沸或高温烧灼均不会发生明显破坏，基于这一特征，通过对提取的器官组织进行破坏后可留下硅藻，经显微镜形态学观察确定是否存在硅藻即是基于形态学观察方法。该类方法操作简单、仪器要求低，因而在检案中得到了广泛的研究与应用，在法医学硅藻检验中发挥着较大的作用。这类检验方法主要包括化学消化法和物理破坏法。化学消化法通过强酸消化、离心富集硅藻以及光学显微镜观察等步骤获取硅藻，该方法由于具有消化完全、操作简单、成本较低等优点，是目前最常用的硅藻检测方法。但由于硅藻的细胞壁由硅质（SiO2·nH2O）和果胶质（pectin）组成，而硅质在外层包裹住了胶质层，由于硅质的影响，因此，该方法中硅藻一般不易被染色，从而导致硅藻的形态展现不完全，影响对尸体的判断。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种硅藻荧光染色液，同时提供采用该染色液检测脏器组织的硅藻检验方法是本专利技术的另一专利技术目的。基于上述目的，本专利技术采取以下技术方案：一种硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8-12%、媒染剂3-7%、氢氟酸0.1-0.5%，其余为去离子水。硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水；媒染剂为铝盐。采用硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，包括以下步骤：1）将脏器组织硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，向待检组织涂片上滴加硅藻荧光染色液，于35-40°C下，保温15-30min，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min；2)向步骤1）干燥后的待检组织涂片滴加脱色液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，所述待检组织涂片上的消化液、硅藻荧光染色液与脱色液的体积用量比为（90-110）μl︰（90-110）μl︰（90-110）μl。步骤1）脏器组织为肺组织，向步骤2）干燥后的待检组织涂片滴加复染液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，得待检样品；复染液由以下重量百分比的组分组成：高锰酸钾1.5-2.5%、双氧水0.4-0.7%，其余为去离子水，所述待检组织涂片的消化液与复染液的体积用量比为（90-110）μl︰（90-110）μl。所述脱色液由以下重量百分比的组分组成：盐酸5-7%、乙醇75-85%，其余为去离子水。步骤1）待检组织涂片由以下方法制得：1）剪取脏器组织，然后依次加入无水乙醇和硝酸，溶解后，于60-70°C下，静置消化10-15h后，冷却至室温，分离出油脂，所述脏器组织、无水乙醇和硝酸的用量比为20g︰3ml︰50ml；2）步骤1）分离出油脂后，加入蒸馏水，于3800-4200r/min下，离心12-18min，弃上清液，混匀后重复加入蒸馏水、离心、弃上清液，直至上清液pH值为6.5-7.5，得消化液；3）取100μl步骤2）消化液涂于载玻片上，于40-70°C下，干燥4-6min，得待检组织涂片。所述脏器组织取自溺水尸体的肝、肾或肺组织。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1）本专利技术硅藻荧光染色液有助于硅藻形态的展现，硅藻中硅质被氢氟酸溶解，使胶质层暴露出来，媒染剂促使荧光素标记到胶质层上，在对应波长的荧光显微镜下观察，在紫外光的激发下，硅藻的轮廓清晰的表现出来；2）本专利技术先滴加荧光染色液，促使荧光素标记到胶质层上，然后再用脱色液（盐酸、乙醇、水）脱掉部分杂质上的荧光素成分，若是肺涂片，脱色后还用复染液对背景亮度进行压制复染，提高检出率、避免漏检，使用硅藻荧光染色液使硅藻完全显色，能进行结果明确判读，解决了硅藻在碳末及泥沙背景中，时常因为背景过重，光镜下无法明确判读的问题；提高了工作效率，缩短判读硅藻检测时间。附图说明图1中1-1、1-2分别为实施例1的光镜图像、免疫荧光镜图像；图2中2-1、2-2分别为实施例2的光镜图像、免疫荧光镜图像；图3中3-1、3-2分别为实施例3的光镜图像、免疫荧光镜图像；图4中4-1、4-2分别为实施例4的光镜图像、免疫荧光镜图像；图5中5-1、5-2分别为实施例5的光镜图像、免疫荧光镜图像；图6中6-1、6-2分别为部分案例1现场水样的光镜、免疫荧光镜图像；图7中7-1、7-2分别为部分案例2现场水样的光镜、免疫荧光镜图像；图8中8-1、8-2分别为部分案例3现场水样的光镜、免疫荧光镜图像。具体实施方式实施例1所述的硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水。采用硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，包括以下步骤：1）将脏器组织（取自溺水尸体的肾组织）硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，向待检组织涂片上滴加硅藻荧光染色液，放入湿盒置于水浴箱中，于37°C下，保温20min，用蒸馏水冲洗干净后，置于烘片机，于60°C下，干燥4min；2)向步骤1）干燥后的待检组织涂片滴加脱色液，静置4s，用蒸馏水冲洗干净，置于烘片机，于60°C下，干燥，用中性树脂胶封片，干燥时间为4min，所述待检组织涂片上的消化液、硅藻荧光染色液与脱色液的用量分别为100μl、100μl、100μl，脱色液由以下重量百分比的组分组成：盐酸6%、乙醇80%，其余为去离子水。步骤1）待检组织涂片由以下方法制得：1）剪取20g脏器组织（在肾脏的一边用剪刀挑破包膜，沿纵向剪开包膜，剥离；取干净的剪刀剪取约20g肾皮质），放入500ml锥形瓶中稍剪碎，然后依次加入3ml无水乙醇和50ml硝酸（分析纯），溶解后（可轻微振荡，使无大量气体及泡沫产生），盖上瓶塞，于70°C下，水浴静置消化12h后，取出、打开瓶塞，通风使气体挥发，并使之冷却至室温，油脂析出，分离出油脂；2）步骤1）分离出油脂后中加入与相同重量的蒸馏水，于4000r/min下，离心15min，弃上清液，混匀后重复加入蒸馏水、离心、弃上清液，直至上清液pH值为6.5-7.5，得消化液；3）取100μl步骤2）消化液涂于载玻片上，于60°C下，干燥4min，得待检组织涂片。实施例2所述的硅藻荧光染色液，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂（铝盐）5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水。采用硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，包括以下步骤：1）将脏器组织（取自肺组织）硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种硅藻荧光染色液，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8‑12%、媒染剂3‑7%、氢氟酸0.1‑0.5%，其余为去离子水。

【技术特征摘要】
1.一种硅藻荧光染色液，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：荧光素8-12%、媒染剂3-7%、氢氟酸0.1-0.5%，其余为去离子水。2.如权利要求1所述的硅藻荧光染色液，其特征在于，由以下重量百分比的组分组成：荧光素10%、媒染剂5%、氢氟酸0.3%，其余为去离子水；媒染剂为铝盐。3.采用权利要求1所述的硅藻荧光染色液检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将脏器组织硝解后制得的消化液涂于载玻片上，干燥制得待检组织涂片，向待检组织涂片上滴加硅藻荧光染色液，于35-40°C下，保温15-30min，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min；2)向步骤1）干燥后的待检组织涂片滴加脱色液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，所述待检组织涂片上的消化液、硅藻荧光染色液与脱色液的体积用量比为（90-110）μl︰（90-110）μl︰（90-110）μl。4.如权利要求3所述的检测脏器组织的硅藻检验方法，其特征在于，步骤1）脏器组织为肺组织，向步骤2）干燥后的待检组织涂片滴加复染液，静置3-5s，冲洗，于60-80°C下，干燥4-6min，得待检样品；复...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙鑫，李畅，王基锋，张广清，蒋周莹，胡彬彬，韩芳芳，黄亮，
申请(专利权)人：孙鑫，李畅，王基锋，张广清，蒋周莹，胡彬彬，韩芳芳，黄亮，
类型：发明
国别省市：河南,41