基于荧光标记氨基酸的染料编码方法技术

本发明专利技术提供了一种基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，包括标签序列；以氨基酸序列为标签序列，沿着所述氨基酸序列延伸方向，被分为至少两个荧光区域，每个荧光区域中的氨基酸至少连接一种荧光染料或量子点，相邻两个荧光区域间隔至少3个氨基酸；极大的扩展了标签序列的编号范围；通过使用不同颜色的荧光染料或量子点，可以有效的避免光谱之间的重叠。本发明专利技术还提供一种液相芯片，能够定性和定量的检测核酸或蛋白，同时能够实现高通量的检测。

【技术实现步骤摘要】
基于荧光标记氨基酸的染料编码方法
本专利技术属于基因检测领域，具体涉及基于荧光标记氨基酸的染料编码方法及其用途。
技术介绍
液体芯片，又称悬浮阵列，该技术的核心是将聚苯乙烯微球用荧光染色的方法进行编码，然后将每种颜色的微球(或称为荧光编码微球)共价交联上针对特定核酸的探针。应用时，将检测样本与多种连有特定核酸探针的微球同时进行杂交反应，反应完成后，仪器通过两束激光分别识别编码微球和检测微球上报告分子的荧光强度，从而对靶核酸进行定量检测。由于整个反应在液相中完成，反应速度快，杂交效率高，并可以在一个微量反应体系中同时检测多达上百条靶序列。然而，近年研究结果显示，液体芯片技术尚存在灵敏度较低、重复性较差等不足，其原因主要是不同荧光标记物的发射光谱在液相中广泛重叠，导致大量假阳性结果产生，限制了液体芯片技术的进一步推广应用。因此，寻找一种能以不同颜色分别标记探针，且发光强度高，不易淬灭，光谱之间重叠少的荧光标记物是提高液体芯片检测灵敏度和重复性的关键。
技术实现思路
为此，本专利技术要解决的技术问题是提供一种以不同颜色分别标记探针且发光强度高，不易淬灭，光谱之间重叠少的荧光标记氨基酸的染料编码方法以及液相芯片。为此，本专利技术提供了一种基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，以氨基酸序列为标签序列，沿着所述氨基酸序列延伸方向，将所述标签序列分为至少两个荧光区域，每个荧光区域中的氨基酸至少连接一种荧光染料或量子点，相邻两个荧光区域间隔至少3个氨基酸。优选的，所述标签序列分为至少四个荧光区域，所述荧光区域中氨基酸序列的长度为10-15个氨基酸。优选的，任意两个所述荧光区域内的荧光染料或量子点不相同。优选的，每个所述荧光区域内只有一种氨基酸连接荧光染料或量子点，且同一个荧光区域内的荧光染料或量子点相同。优选的，所述荧光染料包括BODIPY、FITC、罗丹明、香豆素、呫吨、花青素、芘或酞菁；所述量子点选自MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、ZnO、ZnS、ZnSe、ZnTe、SrS、SrSe、SeTe、CdS、CdSe、CdTe、BaS、BaSe、BaTe、HgS、HgSe、HgTe、PbSe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、CdS/PbS、CdS/Cd(OH)2、CdSe/CuSe、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CdS、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdSe/HgTe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/ZnSe、InAs/CdSe、InAs/InP、ZnS:Mn、ZnS:Cu、CdS:Mn和CdS:Cu中的任一种，以及以上述任一种为核、二氧化硅为壳的核壳型量子点；本专利技术提供了一种由所述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法编码得到的标签序列。本专利技术提供了一种液相芯片，包括：所述的标签序列；与所述标签序列连接的探针分子P1；磁性微球；与磁性微球连接的探针分子P2，所述探针分子P1与所述探针分子P2之间不互相结合。优选的，所述探针分子P1包括核苷酸序列、抗原或抗体，所述探针分子P2包括核苷酸序列、抗原或抗体。优选的，所述探针分子P2上连接有生物素或荧光染料，且探针分子P2上连接的荧光染料与所述标签序列中的荧光染料不相同。本专利技术提供了一种制备所述的液相芯片的方法，包括以下步骤：S1.将所述的标签序列连接探针分子P1；S2.将生物素或荧光染料连接探针分子P2S3.将磁性微球连接上探针分子P2。本专利技术提供了一种利用所述的液相芯片在核酸或蛋白检测领域的用途。本专利技术相对现有技术具有如下优点：1.本专利技术提供的基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，以氨基酸序列为标签序列，沿着所述氨基酸序列延伸方向，将所述标签序列分为至少两个荧光区域，每个荧光区域中的氨基酸至少连接一种荧光染料或量子点，相邻两个荧光区域间隔至少3个氨基酸，使得两个区域之间的发出的荧光不互相干扰。2.本专利技术提供的基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，每个荧光区域连接一种荧光染料或量子点，通过对每个荧光区域连接的荧光染料或量子点进行排列组合可以达到对标签序列进行编号的目的。将标签序列分为四个荧光区域，通过对4种不同的荧光染料或量子点进行组合，可以得到24种不同的组合方式，如果不同的荧光区域可以使用相同的荧光染料或量子点，4个荧光区域可以得到256种不同的组合方式。依次类推，将标签序列分得荧光区域越多，可以获得更多的组合方式，实现更多编号的标签序列，极大的扩展了标签序列的编号范围。另外，通过使用不同颜色的荧光染料或量子点，可以有效的避免光谱之间的重叠。3.本专利技术提供的基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，标签序列每个荧光区域内连接的荧光染料或量子点的个数不同，使得每个荧光区域的发光强度不同，通过对每个荧光区域的发光强度进行排列组合可以达到对标签序列进行编号的目的；例如将标签序列分为4个荧光区域，每个荧光区域可以连接10个量子点，每两个量子点设置一个荧光强度等级，分为5个荧光强度等级，4个荧光区域就可以得到54中不同的排列方式，依次类推，标签序列设置N个荧光区域，每个荧光区域内设置M个荧光强度等级，可以得到MN种不同的排列方式，极大的扩展了标签序列的编号范围。4.本专利技术提供的液相芯片，包括标签序列，与标签序列连接的探针分子P1，磁性微球标记的探针分子P2，检测标签序列每个荧光区域的荧光染料发出的荧光，得到标签序列的编号，得知待测序列中是否存在靶核酸序列，可以对靶核酸序列进行定性检测。5.本专利技术提供的液相芯片，利用探针分子P2上的荧光染料或生物素的荧光强度与靶核酸序列浓度成正比，能够对靶核酸序列进行定量检测。6.本专利技术提供的液相芯片，可以一次检测多种不同的靶序列，实现高通量的检测。7.本专利技术提供的液相芯片，探针分子P1包括核苷酸序列、蛋白或糖类，探针分子P2包括核苷酸序列、蛋白或糖类，实现对核苷酸序列、蛋白或糖类进行检测。附图说明图1为本专利技术实施例中荧光标记氨基酸的染料编码方法的编码示意图；图2为本专利技术实施例中液相芯片的检测示意图；图3为本专利技术实验例中液相芯片检测ALK、APC、BRAF和EGFR基因的检测结果。具体实施方式以下通过具体实施例来说明本专利技术的实施方式，除非另外说明，本专利技术中所公开的实验方法均采用本
常规技术。实施例1本实施例提供一种基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，以氨基酸序列为标签序列，长度为70个氨基酸，如图1所示，将标签序列分成四个荧光区域，分别为荧光区域I，荧光区域II，荧光区域III和荧光区域IV，长度均为15个氨基酸，相邻两个荧光区域之间间隔至少3个氨基酸，在本实施例中为相邻两个荧光区域之间间隔3个氨基酸；其中荧光区域I中的亮氨酸连接罗丹明，荧光区域II中的半胱氨酸连接花青素，荧光区域III中的赖氨酸连接香豆素，荧光区域IV中的缬氨酸连接酞菁。按照上述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，对每个荧光区域连接的荧光染料进行排列组合，每个荧光区域使用不同的荧光染料，得到24种不同的排列方式，并对每种排列方式进行编号作为标签序列的编号，实现对标签序列编号。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，以氨基酸序列为标签序列，沿着所述氨基酸序列延伸方向，将所述标签序列分为至少两个荧光区域，每个荧光区域中的氨基酸至少连接一种荧光染料或量子点，相邻两个荧光区域间隔至少3个氨基酸。

【技术特征摘要】
1.一种基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，以氨基酸序列为标签序列，沿着所述氨基酸序列延伸方向，将所述标签序列分为至少两个荧光区域，每个荧光区域中的氨基酸至少连接一种荧光染料或量子点，相邻两个荧光区域间隔至少3个氨基酸。2.根据权利要求1所述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，所述标签序列分为至少四个荧光区域，所述荧光区域中氨基酸序列的长度为10-15个氨基酸。3.根据权利要求1或2所述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，任意两个所述荧光区域内的荧光染料或量子点不相同。4.根据权利要求1-3任一项所述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，每个所述荧光区域内只有一种氨基酸连接荧光染料或量子点，且同一个荧光区域内的荧光染料或量子点相同。5.根据权利要求1-4任一所述基于荧光标记氨基酸的染料编码方法，其特征在于，所述荧光染料包括BODIPY、FITC、罗丹明、香豆素、呫吨、花青素、芘或酞菁；所述量子点选自MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、ZnO、ZnS、ZnSe、ZnTe、SrS、SrSe、SeTe、CdS、CdSe、CdTe、BaS、BaSe、BaTe、HgS、HgSe、HgTe、PbSe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、CdS/HgS、CdS/H...

【专利技术属性】
技术研发人员：车团结，
申请(专利权)人：苏州百源基因技术有限公司，兰州百源基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32