一种生物组织的染毒方法技术

本发明专利技术涉及一种生物组织的染毒方法，包括如下步骤：（1）在生物组织上打孔，控制孔的直径为0.4~0.6mm，相邻两个孔的间距为4~6mm；（2）将打好孔的生物组织浸没在病毒液中进行染毒。本发明专利技术的染毒方法能够使病毒进入生物组织内部从而达到充分浸润的目的，染毒效果好，染毒快速，可以真实的考察病毒灭活工艺对病毒完全浸润的骨组织或其他组织的具体灭活效果。

【技术实现步骤摘要】
一种生物组织的染毒方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种生物组织的染毒方法。
技术介绍
随着动物源性组织、细胞、体液及重组真核细胞表达制备的生物制品逐渐增多，使用的人群不断扩大，加之动物源性产品原材料质量控制未引起足够重视，生产工艺又基本没有经过严格的病毒去除/灭活效果验证。因此，目前动物源性病毒感染人类的风险性极高，潜在医源性感染问题变的日益突出。其中动物组织来源制品由于动物本身健康检疫状况差，不同动物携带的病毒外源因子复杂多变，可控性因素尚不确定，对人体的潜在危害性较之经过系统鉴定和严格控制的真核细胞表达制品的风险性更高。因此，我国要求对上述产品的生产过程中采用有效的病毒灭活工艺，并对病毒灭活工艺的有效性进行科学的验证。对于动物组织来源（例如真皮、肌腱、骨等）固体材料，均采用浸泡法染毒。即直接将样品按比例浸入病毒液中，放入4℃冰箱中使病毒侵入到生物固体材料中，具体需要根据产品和指示病毒的特点，选择合适的浸泡温度、时间及其他条件。一般耗时时间长、指示病毒滴度下降较快、指示病毒使用量高等缺点。浸泡染毒一般将样品制成均匀小块后，用大量病毒原液浸没组织块，放置于4℃冰箱，浸泡吸附16小时以上。浸泡过程中，病毒液的滴度呈指数级下降（特别是对于脂包膜病毒），浸泡时间越长，病毒液的滴度越低，并且病毒液很难在坚固的骨组织表面浸入，其他真皮组织表面有非极性的油脂层，病毒液属于水溶液很难进入到真皮层内，其他肌腱组织表面含有疏水层的筋膜存在，因此，病毒液也很难进入到肌腱组织内部。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种染毒速度快的生物组织的染毒方法。为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种生物组织的染毒方法，包括如下步骤：（1）在生物组织上打孔，控制孔的直径为0.4~0.6mm，相邻两个孔的间距为4~6mm；（2）将打好孔的生物组织浸没在病毒液中进行染毒。优选地，采用气动式冲击器进行打孔。优选地，步骤（1）中，先将所述的生物组织切块，然后再进行打孔。优选地，所述的生物组织为骨组织、真皮组织、肌腱组织中的一种或多种。进一步优选地，所述的生物组织为硬度为5.5的骨组织或者硬度5.5以下的其他组织。优选地，步骤（2）中，在2~8℃下进行所述的染毒。优选地，步骤（2）中，染毒的时间为2~6小时。由于以上技术方案的实施，本专利技术与现有技术相比具有如下优势：本专利技术的染毒方法能够使病毒进入生物组织内部从而达到充分浸润的目的，染毒效果好，染毒快速，可以真实的考察病毒灭活工艺对病毒完全浸润的骨组织或其他组织的具体灭活效果。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。应理解，这些实施例是用于说明本专利技术的基本原理、主要特征和优点，而本专利技术不受以下实施例的限制。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。实施例11.将骨组织制成大小均一的单独小块，用气动式冲击器（含金刚砂针头）（直径为0.5mm）在单独小块上均匀打孔，每个小孔间的距离为5mm。小孔不宜过大造成病毒液过量流失，不能充分模拟实际生产工艺过程。2.将打好孔的材料放置于预冷的、提前解冻的病毒溶液（伪狂犬病毒，初始滴度为8.0lgTCID50/0.1ml）中进行染毒，病毒液用量为稍稍浸没材料为宜。3.放置入4℃冰箱中进行染毒，静置4小时后取出材料，沥干病毒液，然后将完全染毒的样品进行病毒灭活处理工艺。对比例1将骨组织制成大小均一的单独小块，然后放置于预冷的、提前解冻的病毒溶液（伪狂犬病毒，初始滴度为8.0lgTCID50/0.1ml）中进行染毒，病毒液用量为稍稍浸没材料为宜，放置入4℃冰箱中进行染毒，静置4小时后取出材料，沥干病毒液，然后将完全染毒的样品进行病毒灭活处理工艺。试验例将实施例1和对比例1的染毒后的材料分别用高速破碎机破碎，并测定材料中的病毒滴度，其中，实施例1的病毒滴度为8.0lgTCID50/0.1ml，对比例1的病毒滴度为6.0lgTCID50/0.1ml。上述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并据以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围，凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物组织的染毒方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）在生物组织上打孔，控制孔的直径为0.4~0.6mm，相邻两个孔的间距为4~6mm；（2）将打好孔的生物组织浸没在病毒液中进行染毒。

【技术特征摘要】
1.一种生物组织的染毒方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）在生物组织上打孔，控制孔的直径为0.4~0.6mm，相邻两个孔的间距为4~6mm；（2）将打好孔的生物组织浸没在病毒液中进行染毒。2.根据权利要求1所述的生物组织的染毒方法，其特征在于：采用气动式冲击器进行打孔。3.根据权利要求1所述的生物组织的染毒方法，其特征在于：步骤（1）中，先...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪涛，
申请(专利权)人：苏州良辰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32