一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，涉及食源性活性肽开发相关技术领域，包括十个步骤，用两步酶解法，能够简便、快速的获得较高活性的降血压肽。乳酪蛋白降血压肽，与合成降血压产品相比，食用安全性高、无副作用，特别是其对高血压患者具有降压作用，但对血压正常人无降压作用。可广泛应用于治疗心血管疾病方面的药品、保健食品和食品添加剂中。本发明专利技术在采用牛乳或者酪蛋白为原料开发生物活性肽，原料非常丰富，价格低廉，可满足大规模工业化生产，对于牛乳产品多样化，酪蛋白生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法
本专利技术涉及食源性活性肽开发相关
，特别涉及一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法。
技术介绍
大量的研究发现，蛋白质在人体内并不完全是以氨基酸的形式被人体所吸收，而更多的是以小分子肽的形式被人体吸收利用。这些由数个氨基酸组成小分子肽不仅具有营养功能和生理活性，还具有一定的功能特性，如抗氧化性、抗菌性、提高免疫性等诸多新功能。降血压肽就是这样一种具有降低血压功能的小分子肽，分子量主要集中在1500u左右，它是血管紧张素转换酶(Angiotension-convertingEnzyme，ACE)的抑制剂，因而也称为ACE抑制肽(Angiotension-convertingEnzymeInhibitorypeptides，ACEIP)。人体中存在肾素—血管紧张素系统(Renin-AngiotensinSystem，RAS)和激肽释放酶—激肽系统(Kallikrein-KininSystem，KKS)对血压的调节起着重要作用。ACE催化RAS系统中的血管素Ⅰ转化成具有强烈血管收缩作用的血管紧张素Ⅱ，将KKS系统中具有血管扩张作用的缓激肽降解成无活性的缓释肽，通过这两种方式引起血压上升。ACE抑制肽与ACE结合后阻止了其对血管紧张素Ⅰ及缓激肽的催化分解，从而起到了降低血压的作用。鉴于高血压的普遍性及安全降压的重要性，乳酪蛋白肽作为天然食品来源的降血压药物成，分更容易被高血压人群接受，但是已有的降血压活性肽的分离方法较为繁琐、耗时。因此，专利技术一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法来解决上述问题很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，包括以下步骤：步骤一：首先取一定量的牛乳或酪蛋白加水溶解，然后调整浓度为7～10％，完后搅拌5～8min，直至牛乳或酪蛋白完全变性溶解，得到酪蛋白溶液；步骤二：将酪蛋白溶液冷却至室温，首先将酪蛋白溶液的PH调节至5.5～8.5，然后向酪蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行水解反应，维持反应温度20～50℃，水解1～4h，灭酶后得到酶解溶液；步骤三：然后向酶解溶液中加胰蛋白酶，维持反应温度30～60℃，水解3～4.5h；步骤四：然后升温至95～110℃，维持10～25min，灭活胰蛋白酶，得到二次酶解溶液；步骤五：将二次酶解溶液离心10～15min，静置后提取上清液，然后采用截留分子量6～10KDa的膜进行过滤，得到过滤后的酶解溶液；步骤六：将过滤后的酶解溶液在60～75℃，25～40MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；步骤七：将均质后的酶解溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到白色或淡黄色的酪蛋白降血压肽粗品；步骤八：将酪蛋白降血压肽粗品用DA201-C大孔吸附树脂吸附，大孔吸附树脂用量为20～35g/ml，吸附时间为2～5h，然后进行乙醇梯度洗脱，乙醇的体积分数为25～100％，步骤九：首先用超滤膜超滤洗脱液，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；然后用纳滤膜纳滤透过液，得到回流液；步骤十：将所得的回流液进行干燥杀菌，最终得到到酪蛋白降血压肽。可选的，所述步骤一中水的温度为75～90℃。可选的，所述步骤五中的离心力为4～10kg。可选的，所述步骤九中超滤膜的截留量为2000～3500Da，纳滤膜的截留量为400～550Da。可选的，所述步骤十中的干燥杀菌是将回流液真空浓缩，然后再冷冻干燥。本专利技术的技术效果和优点：本专利技术采用牛乳或者酪蛋白为原料开发生物活性肽，原料非常丰富，价格低廉，可满足大规模工业化生产，对于牛乳产品多样化，酪蛋白生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。本专利技术采用两步酶解法，能够简便、快速的获得较高活性的降血压肽。本专利技术制备的降血压肽分子量分布在1000u以下、主要集中在600u左右，易于体内吸收，且具高ACE抑制活性。本专利技术工艺简单，设备要求低，可操作性强，具有良好的社会推广应用。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1：一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，包括以下步骤：步骤一：首先取一定量的牛乳或酪蛋白加水溶解，然后调整浓度为7％，完后搅拌5min，直至牛乳或酪蛋白完全变性溶解，得到酪蛋白溶液；步骤二：将酪蛋白溶液冷却至室温，首先将酪蛋白溶液的PH调节至5.5，然后向酪蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行水解反应，维持反应温度20℃，水解1h，灭酶后得到酶解溶液；步骤三：然后向酶解溶液中加胰蛋白酶，维持反应温度30℃，水解3h；步骤四：然后升温至95℃，维持10min，灭活胰蛋白酶，得到二次酶解溶液；步骤五：将二次酶解溶液离心10min，静置后提取上清液，然后采用截留分子量6KDa的膜进行过滤，得到过滤后的酶解溶液；步骤六：将过滤后的酶解溶液在60℃，25MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；步骤七：将均质后的酶解溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到白色或淡黄色的酪蛋白降血压肽粗品；步骤八：将酪蛋白降血压肽粗品用DA201-C大孔吸附树脂吸附，大孔吸附树脂用量为20g/ml，吸附时间为2h，然后进行乙醇梯度洗脱，乙醇的体积分数为25％，步骤九：首先用超滤膜超滤洗脱液，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；然后用纳滤膜纳滤透过液，得到回流液；步骤十：将所得的回流液进行干燥杀菌，最终得到到酪蛋白降血压肽。其中，步骤一中水的温度为75℃；步骤五中的离心力为4kg；步骤九中超滤膜的截留量为2000Da，纳滤膜的截留量为400Da；步骤十中的干燥杀菌是将回流液真空浓缩，然后再冷冻干燥。实施例2：一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，包括以下步骤：步骤一：首先取一定量的牛乳或酪蛋白加水溶解，然后调整浓度为8％，完后搅拌6min，直至牛乳或酪蛋白完全变性溶解，得到酪蛋白溶液；步骤二：将酪蛋白溶液冷却至室温，首先将酪蛋白溶液的PH调节至6.5，然后向酪蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行水解反应，维持反应温度30℃，水解2h，灭酶后得到酶解溶液；步骤三：然后向酶解溶液中加胰蛋白酶，维持反应温度30～60℃，水解3.5h；步骤四：然后升温至100℃，维持15min，灭活胰蛋白酶，得到二次酶解溶液；步骤五：将二次酶解溶液离心10～15min，静置后提取上清液，然后采用截留分子量7KDa的膜进行过滤，得到过滤后的酶解溶液；步骤六：将过滤后的酶解溶液在65℃，30MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；步骤七：将均质后的酶解溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到白色或淡黄色的酪蛋白降血压肽粗品；步骤八：将酪蛋白降血压肽粗品用DA201-C大孔吸附树脂吸附，大孔吸附树脂用量为25g/ml，吸附时间为3h，然后进行乙醇梯度洗脱，乙醇的体积分数为50％，步骤九：首先用超滤膜超滤洗脱液，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；然后用纳滤膜纳滤透过液，得到回流液；步骤十：将所得的回流液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：首先取一定量的牛乳或酪蛋白加水溶解，然后调整浓度为7～10%，完后搅拌5～8min，直至牛乳或酪蛋白完全变性溶解，得到酪蛋白溶液；步骤二：将酪蛋白溶液冷却至室温，首先将酪蛋白溶液的PH调节至5.5～ 8.5，然后向酪蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行水解反应，维持反应温度20～50℃，水解1～4h，灭酶后得到酶解溶液；步骤三：然后向酶解溶液中加胰蛋白酶，维持反应温度30～60℃，水解3～4.5h；步骤四：然后升温至95～110℃，维持10～25min，灭活胰蛋白酶，得到二次酶解溶液；步骤五：将二次酶解溶液离心10～15min，静置后提取上清液，然后采用截留分子量6～10KDa的膜进行过滤，得到过滤后的酶解溶液；步骤六：将过滤后的酶解溶液在60～75℃，25～40MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；步骤七：将均质后的酶解溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到白色或淡黄色的酪蛋白降血压肽粗品；步骤八：将酪蛋白降血压肽粗品用DA201‑C大孔吸附树脂吸附，大孔吸附树脂用量为20～35g/ml，吸附时间为2～5h，然后进行乙醇梯度洗脱，乙醇的体积分数为25～100%，步骤九：首先用超滤膜超滤洗脱液，除去大分子蛋白及多肽，收集透过液；然后用纳滤膜纳滤透过液，得到回流液；步骤十：将所得的回流液进行干燥杀菌，最终得到到酪蛋白降血压肽。...

【技术特征摘要】
1.一种从酪蛋白中提取降血压活性肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：首先取一定量的牛乳或酪蛋白加水溶解，然后调整浓度为7～10%，完后搅拌5～8min，直至牛乳或酪蛋白完全变性溶解，得到酪蛋白溶液；步骤二：将酪蛋白溶液冷却至室温，首先将酪蛋白溶液的PH调节至5.5～8.5，然后向酪蛋白溶液中加入胃蛋白酶，进行水解反应，维持反应温度20～50℃，水解1～4h，灭酶后得到酶解溶液；步骤三：然后向酶解溶液中加胰蛋白酶，维持反应温度30～60℃，水解3～4.5h；步骤四：然后升温至95～110℃，维持10～25min，灭活胰蛋白酶，得到二次酶解溶液；步骤五：将二次酶解溶液离心10～15min，静置后提取上清液，然后采用截留分子量6～10KDa的膜进行过滤，得到过滤后的酶解溶液；步骤六：将过滤后的酶解溶液在60～75℃，25～40MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；步骤七：将均质后的酶解溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到白色或淡黄色的酪蛋白降血...

【专利技术属性】
技术研发人员：马学，
申请(专利权)人：马学，
类型：发明
国别省市：山东,37