辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的标志物。本发明专利技术保护用于检测miR‑144‑3p表达水平的产品在制备用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的试剂盒中的应用。本发明专利技术通过低压氧舱模拟高原低压低氧环境，建立低压低氧心肌损伤大鼠动物模型。应用高通量测序技术和生物信息学方法，筛选与高原低压低氧心肌损伤相关的关键miRNA，并进一步通过荧光定量PCR方法对心肌组织和血浆中关键miRNA进行实验验证。通过本发明专利技术筛选的miRNA可以辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤。本发明专利技术对于急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的诊断和评估有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的标志物
本专利技术涉及一种辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的标志物。
技术介绍
microRNA(miRNA)是一类高度保守的非编码RNA，通过与靶基因mRNA中特异的互补序列结合，诱导mRNA降解或抑制其翻译为蛋白质，在转录后水平对基因表达起着负调控作用。miRNA在许多重要的生命过程(如细胞生长、组织分化、细胞增殖、胚胎发育、细胞凋亡等)均起着关键作用。目前已知的人类miRNA约2000余个。研究人员已经在各种类型体液如血液、尿液、腹水、胸水中分离纯化出miRNA。这些miRNA可在不同的病理生理状态下发生不同的快速、高灵敏度的变化，提示通过miRNA转运可以实现细胞间信息交流。miRNA自身也可以作为良好的疾病诊断和判断预后的生物标志物。高原低压低氧暴露导致的心肌损伤是急性高原病(Acutemountainsickness,AMS)很重要的一部分。30％的AMS可能发生心源性猝死。由于高原低压低氧导致的心脏疾病的发生发展比较复杂，目前还没有明确的诊断标准和干预策略，对于高原低压低氧导致的心肌损伤还没有简便易行的诊断和评估方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的标志物。本专利技术首先提供了用于检测miR-144-3p表达水平的产品在制备用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的试剂盒中的应用。本专利技术还保护一种试剂盒，包括用于检测miR-144-3p表达水平的产品；所述试剂盒的用途为辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤。本专利技术还保护用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的系统，包括用于检测miR-144-3p表达水平的物质和数据处理装置；所述数据处理装置内设模块1和模块2，所述模块1具有如下(a1)所示功能，所述模块2具有如下(a2)所示功能：(a1)分别比较取自待测者和健康对照者的离体样本中miR-144-3p的表达水平；(a2)根据(a1)的比较结果按照如下确定所述待测者是否患有低压低氧导致的心肌损伤：若与所述健康对照者相比，所述待测者的离体样本中miR-144-3p的表达水平上调，则所述待测者患有低压低氧导致的心肌损伤；反之，则所述待测者不患有低压低氧导致的心肌损伤。以上任一所述检测miR-144-3p表达水平的产品为特异引物组合；所述特异引物组合由茎环引物、上游引物和下游引物组成；所述茎环引物为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述上游引物为如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b4)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述下游引物为如下(b5)或(b6)：(b5)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b6)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子。本专利技术还保护所述特异引物组合在制备用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的试剂盒中的应用。本专利技术还保护含有所述特异引物组合的试剂盒，所述试剂盒的用途为辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤。本专利技术还保护所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。本专利技术还保护miR-144-3p作为标志物在辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤中的应用。本专利技术还保护一种辅助诊断待测者是否患有低压低氧导致的心肌损伤的方法，包括如下步骤：(c1)分别比较取自待测者和健康对照者的离体样本中miR-144-3p的表达水平；(c2)根据(c1)的比较结果按照如下确定所述待测者是否患有低压低氧导致的心肌损伤：若与所述健康对照者相比，所述待测者的离体样本中miR-144-3p的表达水平上调，则所述待测者患有低压低氧导致的心肌损伤；反之，则所述待测者不患有低压低氧导致的心肌损伤。以上任一所述离体样本具体可为离体血浆样本。以上任一所述miR-144-3p如序列表的序列1所示。以上任一所述低压低氧导致的心肌损伤具体可为急进高原低压低氧环境相关心肌损伤。本专利技术通过低压氧舱模拟高原低压低氧环境，建立低压低氧心肌损伤大鼠动物模型。应用高通量测序技术和生物信息学方法，分析低压低氧诱导的大鼠损伤心肌中miRNA表达变化及其功能和调控机制，筛选与高原低压低氧心肌损伤相关的关键miRNA，并进一步通过荧光定量PCR方法对心肌组织和血浆中关键miRNA进行实验验证。通过本专利技术筛选的miRNA可以辅助检测急进高原低压低氧环境相关心肌损伤。本专利技术对于急进高原低压低氧环境相关心肌损伤的诊断和评估有重要意义。附图说明图1为不同时间点大鼠心肌组织病理切片。图2为心肌组织中差异表达miRNA的热图。图3为TAM分析表达上调miRNA的功能。图4为TAM分析表达下调miRNA的功能。图5为低压低氧7天大鼠心肌组织中miRNA表达。图6为低压低氧7天大鼠血浆中miRNA表达。图7为低压低氧不同时间点大鼠血浆中miR-144-3p表达。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。以下实施例中采用Spss20.0统计软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(_X±S)表示，两组间差异采用独立样本t检验，多组间差异采用方差检验，分析组间差异的显著性。以p＜0.05定义为差异具有统计学意义。实施例1、低压低氧心肌损伤大鼠动物模型构建及miRNA表达谱分析一、动物实验实验动物：六周龄SPF级SD大鼠96只，体重200±20g，雄性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。许可证号SCXK(京)2016-0006。采用随机数字表法将96只SD大鼠随机分为如下各组(每组12只)：D3实验组(低压低氧暴露3天)：SD大鼠置于低压低氧模拟实验舱中饲养3天。D7实验组(低压低氧暴露7天)：SD大鼠置于低压低氧模拟实验舱中饲养7天。D14实验组(低压低氧暴露14天)：SD大鼠置于低压低氧模拟实验舱中饲养14天。D28实验组(低压低氧暴露28天)：SD大鼠置于低压低氧模拟实验舱中饲养28天。常压常氧对照组：SD大鼠置于低压低氧模拟实验舱外常压常氧环境中饲养。应用实验舱(贵州风雷航空军械有限责任公司)模拟高原低压低氧条件。实验舱参数设定：模拟海拔高度7000米，升降速度10米/秒，舱内压力39.1kpa，舱内氧气压力9.022kpa。实验组大鼠置于实验舱内。实验舱运行时间为23h/日，昼夜比为12h/12h。二、超声心动图检查各组SD大鼠完成低压低氧实验当日出舱后立刻进行超声心动图检查。应用2％丙戊酸钠溶液将SD大鼠麻醉后，大鼠胸前褪毛，仰卧固定。将超声探头(频率17.5MHZ)置于大鼠胸骨前，显示左室短轴切面。于乳头肌水平，应用M超声记录左心室运动曲线。分别测量舒张末期左室前壁厚度(LVAWD)、左室后壁厚度(LVPWD)，左室舒张末期内径(LVIDD)和收缩末期内径(LVIDS)，评估左心室结构。分别测量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测miR‑144‑3p表达水平的产品在制备用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.用于检测miR-144-3p表达水平的产品在制备用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的试剂盒中的应用。2.一种试剂盒，包括用于检测miR-144-3p表达水平的产品；所述试剂盒的用途为辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤。3.用于辅助诊断低压低氧导致的心肌损伤的系统，包括用于检测miR-144-3p表达水平的物质和数据处理装置；所述数据处理装置内设模块1和模块2，所述模块1具有如下(a1)所示功能，所述模块2具有如下(a2)所示功能：(a1)分别比较取自待测者和健康对照者的离体样本中miR-144-3p的表达水平；(a2)根据(a1)的比较结果按照如下确定所述待测者是否患有低压低氧导致的心肌损伤：若与所述健康对照者相比，所述待测者的离体样本中miR-144-3p的表达水平上调，则所述待测者患有低压低氧导致的心肌损伤；反之，则所述待测者不患有低压低氧导致的心肌损伤。4.如权利要求1所述的应用，或，权利要求2所述的试剂盒，或，权利要求3所述的系统，其特征在于：所述检测miR-144-3p表达水平的产品为特异引物组合；所述特异引物特异引物组合由茎环引物、上游引物和下游引物组成；所述茎环引物为如下(b1)或(b2)：(b1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(b2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述上游引物为如下(b3)或(b4)：(b3)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b4)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述下游引物为如下(b5)或(b6)：(b5)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b6)将序...

【专利技术属性】
技术研发人员：施冰，薛大卫，
申请(专利权)人：北京艾瑟尔生物医学研究有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11