【技术实现步骤摘要】
用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的试剂盒及其应用
本专利技术涉及生物检测
,具体而言,涉及一种用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的试剂盒及其应用。
技术介绍
地中海贫血(在本文中有时简称“地贫”)是一种常见的溶血性单基因遗传病,多发于中东、中亚、非洲、东南亚和中国南方等地区。导致地贫的分子机理是:珠蛋白基因发生缺陷使其编码的肽链一种或几种合成减少或缺失,致使血红蛋白的组成成分比例失衡,进而导致血红蛋白不稳定。根据缺陷的珠蛋白基因种类不同,地贫主要分为α地贫和β地贫。α地贫是由于α珠蛋白基因的缺失或者突变导致α珠蛋白肽链合成受到抑制而引起的溶血性贫血疾病。α珠蛋白基因簇位于16p13.3,每条染色体各有2个α珠蛋白基因,一对染色体共有4个α珠蛋白基因。α珠蛋白基因的缺失或突变是产生α地贫的最常见原因,α地贫主要包括缺失型和非缺失型。β地贫是由于β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺陷或合成不足而引起的遗传性溶血性贫血疾病。β珠蛋白基因位于β珠蛋白基因簇,该基因簇定位于染色体11p15,β地贫的分子病理具有高度异质性,主要为β珠蛋白基因点突变、小的缺失或插入。地贫患者长期贫血会导致脏器功能减退、导致心功能衰竭、肝脾肿大等,影响患者的生长发育,目前国内外尚无有效的治疗方法,只能通过定期输血等方法维持生命,给患者自身及家庭和社会带来沉重的负担。因而,控制地贫,预防是关键,通过对地贫高发人群的地贫筛查和婚育指导可有效降低重型地贫的发生率。目前地贫有多种筛查方法,但基因检测是诊断地贫的金标准,基因检测能够大大提高地贫检测的准确性,减少地贫的漏检率,这对 ...
【技术保护点】
1.一种用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含多个用于扩增地中海贫血基因的扩增引物组,其中所述多个包括1个的情形,所述扩增引物组包括针对α珠蛋白基因和β珠蛋白基因设计的引物,其中,所述扩增引物组包括针对HBA1基因、HBA2基因、HBB基因的突变型检测引物,以及针对α地贫缺失型–α3.7、–α4.2、‑‑SEA、‑‑THAI,以及β缺失型SEA‑HPFH、中国型、中国台湾型的缺失型检测引物。
【技术特征摘要】
1.一种用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含多个用于扩增地中海贫血基因的扩增引物组,其中所述多个包括1个的情形,所述扩增引物组包括针对α珠蛋白基因和β珠蛋白基因设计的引物,其中,所述扩增引物组包括针对HBA1基因、HBA2基因、HBB基因的突变型检测引物,以及针对α地贫缺失型–α3.7、–α4.2、--SEA、--THAI,以及β缺失型SEA-HPFH、中国型、中国台湾型的缺失型检测引物。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述扩增引物组的引物序列如SEQIDNO:1-27所示。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,在所述试剂盒中,SEQIDNO:1-27所示的引物被分为如下所示的5个引物组:,其中,5个引物组分开放置,而针对每个引物组,其引物混合放置。4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂盒,其特征在于,在所述试剂盒中,所述扩增引物组的每条引物的5’端均添加有引物标签序列,且在每个扩增引物组内,引物组1、引物组3、引物组4和引物组5的引物标签序列相同,并与引物组2的引物标签序列不同,而所述多个扩增引物组之间的所有引物标签序列相互不同,任选地,所述引物标签序列的长度为5-10bp,优选7bp,任选地,针对每个扩增引物组,引物组1、引物组3、引物组4和引物组5携带相同的引物标签序列,且所述引物标签序列为选自下列的任意之一:任选地,针对每个扩增引物组,引物组2的引物标签序列为选自下列的任意之一:5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,每个扩增引物组中各引物的重量份数如下表所示:6.一种用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的测序文库的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒中的多个扩增引物组,分别对多个待测样本进行PCR扩增,以便获得多个待测样本的PCR产物,其中,各扩增引物组的每条引物的5’端均添加有引物标签序列,且在每个扩增引物组内,引物组1、引物组3、引物组4和引物组5的引物标签序列相同,并与引物组2的引物标签序列不同,而各扩增引物组之间的所有引物标签序列相互不同,以便使所述多个待测样本的PCR产物的引物标签序列相互不同;以及将所述多个待测样本的PCR产物混合,以便获得所述用于同时检测地中海贫血基因突变型与缺失型的测序文库,任选地,将所述多个待测样本的PCR产物混合后进一步包括:混合PCR产物打断、末端修复、加“A”、接头连接、片段筛选的步骤,任选地,在所述多个待测样本的PCR产物混合之后,以及混合PCR产物打断、末端修复、加“A”、接头连接和片段筛选的至少一个步骤之后进一步包括对产物进行纯化的步骤,任选地,所述接头为标签...
【专利技术属性】
技术研发人员:张彩芬,杨晓琴,方俊彬,周梅珍,陈仕平,陈文景,柴相花,刘碧湘,张礼茗,黄晓燕,褚仲杰,李映霞,梁碧珊,严红,梁英敏,程征宇,林佳,张红云,李云,宋海峰,
申请(专利权)人:华大生物科技武汉有限公司,深圳华大临床检验中心,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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