本发明专利技术为一种簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物及其应用，利用该分子标记引物能准确快速鉴定小麦背景中的簇毛麦1VS染色体，并且可以分离簇毛麦醇溶蛋白基因。本发明专利技术采用的技术方案为：所述特异性分子标记引物由1VS‑F2/1VS‑R3、1VS‑F8/1VS‑R3构成，1VS‑F2分子标记引物具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，1VS‑R3具有如序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，1VS‑F8具有如序列表中SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS‑F2/1VS‑R3、1VS‑F8/1VS‑R3在簇毛麦1VS染色体检测中的应用，及在簇毛麦1VS染色体上醇溶蛋白基因的克隆与分离中的应用。
【技术实现步骤摘要】
簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物及其应用一、
：本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及鉴定簇毛麦1V染色体的分子标记引物，1VS染色体检测及其PCR方法。二、
技术介绍
：随着社会经济发展和生活水平的提高，人们对各种面食品的品质要求越来越高，因此小麦的品质改良也日益受到重视。由于普通小麦种内遗传基础狭窄，在普通小麦中发现编码优质蛋白基因种类并不多，这限制了小麦种内品质的进一步改良。为了寻找新的优质基因资源，对小麦近缘种属优质蛋白基因的挖掘与利用已成为小麦品质改良研究的热点(Yan等，2004；李巧云等，2007；Yan等，2009；)。簇毛麦属小麦族，簇毛麦属(Dasypyrum，又名为Haynaldiavillosa.L)，为一年生或多年生异株授粉二倍体植物(2n＝2x＝14，VV)。起源于地中海的东北部，是一种杂草类植物，生长在恶劣、干旱的环境中。和普通栽培小麦相比，具有高抗白粉病、锈病、全蚀病等多种病害，抗旱、耐寒、分蘖力强、小穗数多和籽粒蛋白质含量高等多种优良性状。可作为改良小麦的优良基因源，应用于小麦品种改良。将簇毛麦携带的优异基因，导入栽培小麦，将推动小麦育种取得突破性进展。簇毛麦HMW-GS具有极其丰富变异类型，Zhong和Qualset(1993)在14个簇毛麦种群的982个植株中发现了Glu-V1的14个等位基因分别编码无、1或2个高分子量蛋白亚基，这是迄今所报道的HMW-GS等位基因多态性最高的二倍体植物。簇毛麦中编码醇溶蛋白基因的三个位点Gli-V1，Gli-V2，Gli-V3分别位于1V，6V和4V上，簇毛麦可为小麦品质改良与育种提供优质外源基因。簇毛麦属于远缘材料，在生产上不能直接作为亲本与小麦杂交而转育其优异基因到普通小麦。创建出小麦-簇毛麦新种质，将簇毛麦的优异基因转育到普通小麦中以提高小麦的适应性、抗性等，对于定向的改良小麦具有重要的意义。因此，各类异染色材料的创建成为利用簇毛麦优异基因的前提基础。小麦-簇毛麦易位染色体是利用簇毛麦优良基因改良小麦品种的重要环节，为簇毛麦优异基因转育到小麦中提供了基础材料。因此，准确快速鉴定小麦背景中的簇毛麦染色体是必须的，尤其是鉴定小麦-簇毛麦易位染色体，继续发掘簇毛麦染色体上的特异分子标记，对于在小麦育种研究过程中快速有效地跟踪、检测和鉴定导入到小麦中的簇毛麦染色体臂及其片段具有极为重要的意义。三、
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物及其应用，利用该分子标记引物可特异检测小麦背景中是否存在簇毛麦1VS染色体，能准确快速鉴定小麦背景中的簇毛麦1VS染色体。本专利技术另外一个目的是提供克隆簇毛麦醇溶蛋白的两对引物，利用该引物可以分离簇毛麦醇溶蛋白基因，为小麦利用簇毛麦1VS染色体上的醇溶蛋白基因进行品质改良提供外源基因。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物，其特征在于：所述特异性分子标记引物由1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3构成，1VS-F2分子标记引物具有如序列表中SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，1VS-R3具有如序列表中SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，1VS-F8具有如序列表中SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在簇毛麦1VS染色体检测中的应用。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在簇毛麦1VS染色体上醇溶蛋白基因的克隆与分离中的应用。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在特异检测小麦背景中是否存在簇毛麦1VS染色体的应用。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在一年生簇毛麦TA10245、普通小麦-簇毛麦T1DS·1VL易位系、普通小麦-簇毛麦T1DL·1VS易位系中簇毛麦1VS染色体的检测中的应用。簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在利用簇毛麦1VS染色体上的醇溶蛋白基因进行品质改良提供外源基因中的应用。一种检测簇毛麦1V染色体的PCR方法，其特征在于：其反应体系包括：待检样品DNA、引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3、EsTaqMastermix和双蒸水；引物1VS-F2/1VS-R3扩增程序包括：步骤(1)：95℃保持5分钟；步骤(2)：94℃保持45秒；步骤(3)：61℃保持30秒；步骤(4)：72℃保持90秒；步骤(5)：重复步骤(2)至步骤(4)34个循环；步骤(6)：72℃保持8分钟；引物1VS-F8/1VS-R3扩增程序包括：步骤(1)：95℃保持5分钟；步骤(2)：94℃保持45秒；步骤(3)：58.3℃保持30秒；步骤(4)：72℃保持90秒；步骤(5)：重复步骤(2)至步骤(4)34个循环；步骤(6)：72℃保持8分钟。所述反应体系为：待检样品DNA模板1微升、引物1VS-F21微升、1VS-R31微升；1VS-F81微升、1VS-R31微升；EsTaqMastermix12.5微升、双蒸水9.5微升。与现有技术相比，本专利技术具有的优点和效果如下：1、小麦是世界上最重要的粮食作物之一，小麦的加工品质主要由种子贮藏蛋白的质与量决定，贮藏蛋白由谷蛋白和醇溶蛋白组成，醇溶蛋白一般对面筋的延展性起着主要作用。簇毛麦携带的优质蛋白基因为小麦品质改良提供了基因源，分离鉴定簇毛麦醇溶蛋白基因有重要的意义。本专利技术提供两对分子标记可准确快速鉴定小麦背景中的簇毛麦1VS染色体及其醇溶蛋白基因。2、本专利技术的簇毛麦1VS染色体特异性标记，是基于琼脂糖电泳的标记，检测方法较为简单，可使用新型的核酸染料进行染色，更加安全！也为小麦-簇毛麦T1DL·1VS易位系在小麦品质改良与新品种培育中的应用提供一种新型实用高效的分子标记辅助选择技术，并为簇毛麦1VS染色体上的醇溶蛋白基因克隆提供引物与方法。对于充分挖掘簇毛麦优异外源基因资源，促进小麦品质育种具有重要意义。3、本专利技术提供的分子标记可用于在分子标记辅助选择育种过程中快速有效地追踪簇毛麦的1V染色体，有利于加快簇毛麦1V染色体，尤其是小麦-簇毛麦T1DL·1VS易位染色体的材料上所携带的优良性状向受体品种的转移与利用，可加速育种进程，提高小麦新品种选育的效率。四、附图说明：图1为本专利技术基于簇毛麦1VS染色体醇溶蛋白特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图。图中箭头所指部分为引物1VS-F2/1VS-R3扩增的簇毛麦1VS染色体醇溶蛋白特异的目标片段。图中，1.中国春；2.T1DS·1VL；3.TA10245、4.T1DL·1VS。图2.为本专利技术基于簇毛麦1VS染色体醇溶蛋白特异性分子标记引物1VS-F8/1VS-R3的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图。图中箭头所指部分为引物1VS-F8/1VS-R3扩增的簇毛麦1VS染色体醇溶蛋白特异的目标片段。图中，1.中国春；2.T1DS·1VL；3.TA10245；4.T1D本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物，其特征在于：所述特异性分子标记引物由1VS‑F2/1VS‑R3、1VS‑F8/1VS‑R3构成，1VS‑F2分子标记引物具有如序列表中SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，1VS‑R3具有如序列表中SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，1VS‑F8具有如序列表中SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物，其特征在于：所述特异性分子标记引物由1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3构成，1VS-F2分子标记引物具有如序列表中SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，1VS-R3具有如序列表中SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，1VS-F8具有如序列表中SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在簇毛麦1VS染色体检测中的应用。3.根据权利要求1所述的簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在簇毛麦1VS染色体上醇溶蛋白基因的克隆与分离中的应用。4.根据权利要求2所述的簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在特异检测小麦背景中是否存在簇毛麦1VS染色体的应用。5.根据权利要求2所述的簇毛麦1VS染色体特异性分子标记引物1VS-F2/1VS-R3、1VS-F8/1VS-R3在一年生簇毛麦TA10245、普通小麦-簇毛麦T1DS·1VL易位系、普通小麦-簇毛麦T1DL·1VS易位系中簇毛麦1VS染色体的检测中的应用。6.根据权利要求3所...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓燕，赵万春，郭江岸，高翔，董剑，杨璐，霍丽花，孟敏，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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