一种检测食品中鸭源成分的试剂盒以及检测方法技术

本发明专利技术提供一种用于检测鸭源性成分的基因序列，该序列如SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。利用这些引物对可以很好的区分肉制品里的具体鸭肉成分。

【技术实现步骤摘要】
一种检测食品中鸭源成分的试剂盒以及检测方法
本专利技术属于食品检测领域和分子生物学
，具体来说，属于如何采用实时荧光RAA技术并结合特异的引物检测食品中是否含有鸭源成分的方法。
技术介绍
近年来，食品安全问题，群众反映强烈，社会关注度也越来越高。2017年1月22日，北京市食品药品监督管理局对于19483户企业餐饮门店展开检查，有1246户餐饮单位存在食品安全问题或风险隐患，其中在对11家汉丽轩餐饮店的检查中，鹅肉样本检测为鸭肉，“鸭肉、猪肉占产品净质量分数分别≥75％”的韩式烤肉卷，只检测到鸭肉，其牛排样品疑为牛、鸭肉混合。严重损害了消费者的利益和生命安全。重组酶介导扩增(Recombinase-aidAmplification，RAA)技术也是一种在恒温下可以使核酸快速扩增的方法。与RPA不同的是，RAA扩增法使用的是从细菌或真菌中获得的重组酶，在37℃恒温下，该重组酶可与引物DNA紧密结合，形成酶和引物的聚合体，当引物在模板DNA上搜索到与之完全互补的序列时，在单链DNA结合蛋白(single-strandedDNAbinding，SSB)的帮助下，使模板DNA解链，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互补链，反应产物也是以指数级增长，通常在1h内即能得到可以用琼脂糖凝胶电泳检测到的扩增片段。在RAA反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个RAA扩增过程，20分钟内，可实现对起始模板的定量及定性分析。整个反应简单快速，因为不需要高温循环，所以特别适合在有大量样品的非实验室检测场所使用，适用于食品快速检测领域。
技术实现思路
本专利技术目的在于，提供一组优选后的检测食品中鸭源性成分的RAA引物对和一条相匹配的荧光探针。在一些优选的方式中，本专利技术提供用于检测鸭源性成分的基因序列，该序列如SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。优选的，这些引物利用RAA技术对鸭源性成分进行检测。本专利技术的第二个目的是提供一种含有上述引物组和荧光探针，用于检测食品中鸭源成分的试剂盒。在一些具体的方式中，该试剂盒包括RAA必须的试剂以及选自如下一对或者多对的引物序列：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。本专利技术的第四个目的是为进行实时荧光定量RAA，检测食品中掺杂鸭源成分的含量提供引物对，这些引物对选自如下一些引物对：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。本专利技术的技术方案概述如下：一种检测食品中鸭源成分的RAA引物组，其中，该引物对选自下列引物对中的一对或者几对：1号引物对、2号引物对、3号引物对、4号引物对或5号引物对组成，所述1号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和2所示；所述2号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.3和4所示；所述3号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和6所示；所述4号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.7和8所示；所述5号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.9和10所示。在一些优选的实施方式中，所处的引物对为，如SEQIDNO.1和2所示的序列。一种检测食品中鸭源成分的试剂盒，包括引物对、RAA干粉试剂、ABuffer、BBuffer、无菌水，所述引物对选自下列引物对中的一对或者几对：1号引物对、2号引物对、3号引物对、4号引物对或5号引物对，其中，1号引物对核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和2所示，所述2号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.3和4所示，所述3号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和6所示，所述4号引物对的核酸序列分别如SEQIDNO.7和8所示，所述5号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.9和10所示。在一些优选的实施方式中，所处的引物对为，如SEQIDNO.1和2所示的序列。所述的ABuffer为20％PEG；BBuffer为280mMMgAc。所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120ng/μLrecA重组酶蛋白(SC-recA/BS-recA)或30ng/μLRad51、30ng/μLBsuDNA聚合酶、100mmol/LTricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶。或者，RAA干粉试剂的组分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120ng/μLrecA重组酶蛋白(SC-recA/BS-recA)或30ng/μLRad51、30ng/μLBsuDNA聚合酶、30ng/μLExo核酸外切酶，100mmol/LTricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶。在一些优选方式中，本专利技术的引物组扩增的目的片段大小如下，1号引物对：253bp；2号引物对：242bp；3号引物对：256bp；4号引物对：206bp；5号引物对：210bp。有益效果本专利技术的试剂盒可以快速、准确、灵敏的检测肉制品中的鸭源成分。特别是针对线粒体DNA降解严重的深加工肉制品，因提供引物的目的片段均为小片段，可以很好的进行检测，进而克服了目的片段过大，在实际检测中无法针对熟肉制品进行检测的情况。附图说明图1为本专利技术中涉及的5对引物，即1号引物对分别对5个物种的肉制品基因组DNA进行RAA扩增的结果，M为DL2000DNAMarker(从下往上，100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp)；1-5分别为鸡、猪、鸭、牛、羊的基因组DNA。图2为鸭肉基因组不同浓度的检测结果图。图3A-3E为本专利技术中涉及的1号引物对经深加工的市售鸭肉制品基因组DNA的实时荧光RAA扩增结果；图3A为鸭肉制品基因组DNA与阴性对照，图3B为鸭肉与鸡肉制品基因组DNA平行检测；图3C为鸭肉与猪肉制品基因组DNA平行检测；图3D为鸭肉与牛肉制品基因组DNA平行检测；图3E为鸭肉与羊肉制品基因组DNA平行检测。图4为RAA测试方法下的不同DNA浓度的检测结果图。图5为熟肉鸭肉制品的检测结果图。图6在熟肉制品中添加熟肉鸭肉制品的特异区分结果图。具体实施方法以下通过具体实施例对本专利技术进一步说明。实施例1：引物设计首先从NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation，美国国家生物技术信息中心)的Genbank数据库中找到鸡与鸭的线粒体DNA全序列、猪的线粒体DNA全序列、牛的线粒体DNA全序列、羊的线粒体DNA全序列、(鸡Gallusgallus登录号：KM096864；鸭Anasplatyrhynchos登录号：KJ833587.1；猪Susscrofadomesticus登陆号：NC_012095.1；牛Bostaurus登陆号：AY676864.1；羊Ovisaries登录号：KR868678.1；)，进行序列比对。根据比本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测鸭源性成分的基因序列，该序列如SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测鸭源性成分的基因序列，该序列如SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。2.一种检测食品中鸭源成分的试剂盒；该试剂盒包括RAA必须的试剂以及选自如下一对或者多对的引物序列：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。3.一种进行实时荧光定量RAA，检测食品中掺杂鸭源成分的含量提供引物对，这些引物对选自如下一些引物对：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。4.根据权利要求1-3之一所述的基因序列，试剂盒或者引物对，其中，所处的引物对为，如SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：程奇，黄震巨，刘国宪，鲍传正，苗丽，姜娟娟，韩涌，曹伟，张秀平，
申请(专利权)人：杭州众测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33