一种检测食品中鸡源成分的试剂盒以及检测方法技术

一种检测食品中鸡源成分的试剂盒以及检测方法。本发明专利技术提供一种供用于检测鸡源性成分的基因序列，该序列如SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。利用这些引物对可以很好的区分肉制品里的具体成分。

【技术实现步骤摘要】
一种检测食品中鸡源成分的试剂盒以及检测方法
本专利技术属于食品检测领域和分子生物学
，具体来说，属于如何采用实时荧光RAA技术并结合特异的引物检测食品中是否含有鸡源成分的方法。
技术介绍
近年来，食品安全问题，群众反映越来越强烈、社会关注度也是越来越高。2017年1月17日，晋中市食品药品监督管理局对餐饮环节火锅店中羊肉展开专项监督抽查，其中8批不合格的羊肉样品中，检测到了鸡肉的成分。2016年6月，青岛市食品药品监督管理局对其农贸市场内羊肉进行突击检查，发现部分羊肉卷内存在鸡肉成分。质量监督管理局执法人员均依据检验报告对涉事企业进行了相关处罚。一些食品生产企业为了一己私利，偷工减料，以次充好，严重损害了消费者的利益和人们的生命健康。通常对于生牛肉制品我们可以通过色泽、肌肉纹理和味道等进行鉴定，但是对于经加工的熟肉制品我们很难用这种传统方法进行鉴定。重组酶介导扩增(Recombinase-aidAmplification，RAA)技术也是一种在恒温下可以使核酸快速扩增的方法。与RPA不同的是，RAA扩增法使用的是从细菌或真菌中获得的重组酶，在37℃恒温下，该重组酶可与引物DNA紧密结合，形成酶和引物的聚合体，当引物在模板DNA上搜索到与之完全互补的序列时，在单链DNA结合蛋白(single-strandedDNAbinding，SSB)的帮助下，使模板DNA解链，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互补链，反应产物也是以指数级增长，通常在1h内即能得到可以用琼脂糖凝胶电泳检测到的扩增片段。在RAA反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个RAA扩增过程，20分钟内，可实现对起始模板的定量及定性分析。整个反应简单快速，因为不需要高温循环，所以特别适合在有大量样品的非实验室检测场所使用，适用于食品快速检测领域。
技术实现思路
本专利技术目的在于，提供一组优选后的检测食品中鸡源性成分的RAA引物对和一条相匹配的荧光探针。在一些优选的方式中，本专利技术提供用于检测鸡源性成分的基因序列，该序列如SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。优选的，这些引物利用RAA技术对鸡源性成分进行检测。本专利技术的第二个目的是提供一种含有上述引物组和荧光探针，用于检测食品中鸡源成分的试剂盒。在一些具体的方式中，该试剂盒包括RAA必须的试剂以及选自如下一对或者多对的引物序列：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。本专利技术的第四个目的是为进行实时荧光定量RAA，检测食品中掺杂鸡源成分的含量提供引物对，这些引物对选自如下一些引物对：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。或者，SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物在制备利用等温RAA检测鸡源性成分的基因序列的试剂盒中的用途。本专利技术的技术方案概述如下：一种检测食品中鸡源成分的RAA引物组，其中，该引物对选自下列引物对中的一对或者几对：1号引物对、2号引物对、3号引物对、4号引物对或5号引物对组成，所述1号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和2所示；所述2号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.3和4所示；所述3号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和6所示；所述4号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.7和8所示；所述5号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.9和10所示。在一些优选的实施方式中，所处的引物对为，如SEQIDNO.1和2所示的序列。一种检测食品中鸡源成分的试剂盒，包括引物对、RAA干粉试剂、ABuffer、BBuffer、无菌水，所述引物对选自下列引物对中的一对或者几对：1号引物对、2号引物对、3号引物对、4号引物对或5号引物对，其中，1号引物对核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和2所示，所述2号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.3和4所示，所述3号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.5和6所示，所述4号引物对的核酸序列分别如SEQIDNO.7和8所示，所述5号引物对的核苷酸序列分别如SEQIDNO.9和10所示。在一些优选的实施方式中，所处的引物对为，如SEQIDNO.1和2所示的序列。所述的ABuffer为20％PEG；BBuffer为280mMMgAc。所述的RAA干粉试剂的成分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120ng/μLrecA重组酶蛋白(SC-recA/BS-recA)或30ng/μLRad51、30ng/μLBsuDNA聚合酶、100mmol/LTricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶。或者，RAA干粉试剂的组分如下：1mmol/LdNTP、90ng/μLSSB蛋白、120ng/μLrecA重组酶蛋白(SC-recA/BS-recA)或30ng/μLRad51、30ng/μLBsuDNA聚合酶、30ng/μLExo核酸外切酶，100mmol/LTricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶。在一些优选方式中，本专利技术的引物组扩增的目的片段大小如下，1号引物对：257bp；2号引物对：225bp；3号引物对：247bp；4号引物对：245bp；5号引物对：241bp。有益效果本专利技术的试剂盒可以快速、准确、灵敏的检测肉制品中的鸡源成分。特别是针对线粒体DNA降解严重的深加工肉制品，因提供引物的目的片段均为小片段，可以很好的进行检测，进而克服了目的片段过大，在实际检测中无法针对熟肉制品进行检测的情况。附图说明图1为本专利技术中涉及的5对引物，即1号引物对分别对5个物种的肉制品基因组DNA进行RAA扩增的结果，M为DL2000DNAMarker(从下往上，100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp)；1-5分别为鸡、猪、鸭、牛、羊的基因组DNA。图2为鸡肉基因组不同浓度的检测结果图。1-5依次为：167.0ng/μL、16.7ng/μL、1.67ng/μL、167.0pg/μL、16.7pg/μL；6为阴性对照，7为阳性对照。图3A-3E为本专利技术中涉及的1号引物对经深加工的市售鸡肉制品基因组DNA的实时荧光RAA扩增结果；图3A为鸡肉制品基因组DNA与阴性对照，图3B为鸡肉与鸭肉制品基因组DNA平行检测；图3C为鸡肉与猪肉制品基因组DNA平行检测；图3D为鸡肉与牛肉制品基因组DNA平行检测；图3E为鸡肉与羊肉制品基因组DNA平行检测。图4不同浓度的新鲜的鸡肉DNA的RAA的检测结果图。图5为生熟鸡肉的RAA结果图，其中1，2为深加工的鸡肉(熟制品)制品的基因组DNA的扩增结果，4为阴性对照，3为阳性对照(新鲜鸡肉)。图6为牛肉中参假有鸡肉的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种供用于检测鸡源性成分的基因序列，该序列如SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。

【技术特征摘要】
1.一种供用于检测鸡源性成分的基因序列，该序列如SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。2.一种检测食品中鸡源成分的试剂盒；该试剂盒包括RAA必须的试剂以及选自如下一对或者多对的引物序列：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。3.一种进行实时荧光定量RAA，检测食品中掺杂鸡源成分的含量提供引物对，这些引物对选自如下一些引物对：SEQIDNO.1和2所示、如SEQIDNO.3和4所示、如SEQIDNO.5和6所示；如SEQIDNO.7和8所示或如SEQIDNO.9和10所示的引物。4.根据权利要求1-3之一所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：程奇，黄震巨，刘国宪，鲍传正，苗丽，姜娟娟，韩涌，曹伟，张秀平，
申请(专利权)人：杭州众测生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33