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一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法技术

技术编号:19448162 阅读:137 留言:0更新日期:2018-11-14 17:11
本发明专利技术公开了一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法。本发明专利技术提供了一种基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还公开了包含前述基因片段的重组载体、重组菌在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。本发明专利技术通过在水稻中转入NtZFP8基因片段,显著提高了水稻外植体和愈伤组织的再生能力,降低再生苗获得周期,得到具有利用价值的再生水稻植株。该方法能够显著提高水稻外植体和愈伤组织的再生能力,具有潜在的应用价值和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法
本专利技术涉及基因工程领域,具体涉及一种转NtZFP8基因提高水稻组织培养分化效率的方法。
技术介绍
植物组织培养技术是细胞全能性的体现。随着体细胞胚胎发生机理研究的深入及相关领域的迅猛发展,植物组织培养技术不仅在林木、农作物和园艺作物的快速繁殖方面得到广泛应用,也在基因工程品种培育中发挥着重要的作用。植物组织培养主要通过两个途径:其一为外植体直接诱导发生;其二是间接诱导发生,即通过体细胞诱导成胚性愈伤组织,愈伤组织再分化出芽,获得再生植株。分化效率是衡量植物组织培养技术效率的重要指标。外植体和愈伤组织的分化是一个复杂的生物学过程,需要一些特定的物理和化学因子进行启动和维持,如受体植物的基因型,外植体类型和生理状态,培养基组成以及植物激素组成等。如在水稻中研究发现,不同基因型水稻,其愈伤组织分化能力不同,粳稻要明显优于籼稻(LinYJ,ZhangQ.Optimisingthetissuecultureconditionsforhighefficiencytransformationofindicarice[J].PlantCellReports,2005,23(8):540-547.),同时也对籼稻愈伤组织转基因效率产生影响(TieW,ZhouF,WangL,etal.ReasonsforlowertransformationefficiencyinindicariceusingAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformation:lessonsfromtransformationassaysandgenome-wideexpressionprofiling[J].PlantMolecularBiology,2012,78(1):1-18.)。外植体和愈伤组织分化效率问题增加了植物组织培养工厂化规模繁育的周期,提高了生产成本。前人通过调节激素配比,改变培养基成分以及改良培养环境等措施提高分化能力(朱克明,陶慧敏,徐硕,等.水稻愈伤分化和再生研究进展[J].种子,2016(11):55-59.)。随着分子生物学技术的发展,通过植物生物工程进行受体植物改造从而提高再生能力已成为一个新的研究方向。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种新的基因,并通过将其转基因的方式来提高水稻组织培养分化效率。本专利技术首先提供了一种基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途,其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种重组载体在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途,它包括SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。优选地,所述重组载体是重组pCAMBIA1301载体。本专利技术还提供了一种重组菌在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途,它包含前述重组载体,优选地,所述重组菌为重组农杆菌,进一步优选为重组农杆菌EHA105。本专利技术还提供了一种蛋白在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途,其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示.本专利技术还提供了一种提高水稻组织培养分化效率的方法,取前述的基因片段、重组载体、重组菌,转入水稻中,获得稳定表达前述蛋白的水稻植株或者水稻种子,即可。本专利技术提供的一种转NtZFP8提高水稻组织培养再生率的方法,本专利技术使用NtZFP8基因片段,得到稳定遗传的转基因材料,并且验证试验表明NtZFP8基因能够对水稻外植体和愈伤组织分化起着重要作用,分化得到的再生芽能够发育成植株,因此可将所述基因和重组质粒在品种选育和组织培养工厂化中应用,从植物基因工程这一条新途径服务于应用和生产。显然,根据本专利技术的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式,对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为NtZFP8基因的PCR扩增的电泳图,其中M泳道为分子量标记(AL2000DNAMarker,购自艾德莱公司),1-2泳道为NtZFP8扩增结果。图2为转NtZFP8基因农杆菌菌落PCR的电泳图,其中M泳道为分子量标记(AL2000DNAMarker,购自艾德莱公司),1-6泳道为农杆菌菌液PCR扩增结果。图3为将消毒过后的种子接种到相对应的培养基上。图4为抗性愈伤的诱导分化及生根情况。图5为抗性苗的NtZFP8基因表达情况图6为愈伤组织分化情况图。具体实施方式若未特别指明,实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,未作具体说明的分子生物学实验方法,均参照《分子生物学实验手册》(马文丽,2011)一书中所列的具体方法进行,或者按照试剂盒和产品说明书进行。实施例1本专利技术NtZFP8基因的分离以及转基因水稻的构建(1)NtZFP8基因片段和载体的构建称取0.5克烟草新鲜叶片,提取烟草RNA,设计引物(NtZFP8-F:5’-ATGGACAAAACAGACAGAGAAAC-3’NtZFP8-R:5’-TCACAAGTGTAGATCTAAACTCACAT-3’),进行PCR扩增,得到目的条带大小的片段(结果如图1所示)。PCR产物用胶回收试剂盒(Takara,805A)纯化,连接T载体(TransgeneBiotech,CT101-01),用热击法转化大肠杆菌DH5α感受态,转化物在含有卡那霉素的LB平板上筛选,挑取单克隆,送成都擎科梓熙生物技术有限公司进行测序。扩增得到的目的片段NtZFP8基因的核苷酸序列(SEQIDNO.1)为:ATGGACAAAACAGACAGAGAAACTCGTGATTTCATGAACGTGGAGTCCTTCTCTCAGCTACCCTTTATTCGACCAGCACCAGCTAATAAAGAAAAAGCCATTAGGCTTTTTGGCAAAGAATTTGGTACTGCTGGTGACTCCATGGCTGCAACAGAATCCACTGAAACAAACCCTAGCCAAGAAGAAATCAAAGACCATATTAGCAACAACAGTGAGAGCAGTCGAAAATTCGAGTGCCATTATTGTTGCAGGAATTTCCCGACTTCACAAGCACTAGGAGGACATCAAAATGCTCATAAGAGAGAACGCCAGAATGCTAAAAGAGCGCATCTTCAATCTGCAATGGTACACGGTGCTTTAACAGAGGCAAATATTTATGGAATAATGAATTACCATCGTCTTGGTAGTGCGCCAACAGCAGCTTATCATCATCACTACGCAACCAACAATATTAACAGTGCTACTAGGTTTTATGGAAGCCATCACCATGTTAATAGTACCCCTTATAATTCTCATCAAACTCCTATAAATGGAAGTCCTTTAGCTTTATGGAGGATTCCTGCAGCAACTAGTGTTCATCATACTTCTTCGTCTTCGTCTAATTTTGGCCGTGAACGATCCAT本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。

【技术特征摘要】
2017.06.08 CN 20171042762981.核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的基因片段在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。2.含有核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的基因片段的重组载体在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于:所述重组载体是重组pCAMBIA1301载体。4.含有SEQIDNO.1所示的基因片段的重组菌在提高水稻的外植体和/或愈伤组织的分化效率中的用途。...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐莺时小东顾雨熹陈放王灵慧吴艳
申请(专利权)人:四川大学
类型:发明
国别省市:四川,51

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