本发明专利技术公开了一种日本血吸虫SjELAV‑like 2基因的siRNA，所述siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。本发明专利技术还公开了日本血吸虫SjELAV‑like 2基因的siRNA的应用。本发明专利技术日本血吸虫SjELAV‑like 2基因的siRNA，可明显抑制SjELAV‑like 2基因的转录，并能显著降低血吸虫感染小鼠的肝脏虫卵孵化率，适用于制备治疗血吸虫病的药物。
【技术实现步骤摘要】
日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA及其应用
本专利技术涉及分子生物学和生物医药
，尤其涉及一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA及其应用。
技术介绍
血吸虫病（Schistosomiasis）是由血吸虫感染引起的，严重危害人畜健康和经济发展的重大寄生虫病，至今仍是一个需要重视的公共卫生问题。目前对于血吸虫病的治疗主要应用化学药物，如吡喹酮，虽然药物对感染血吸虫的个体有治疗效果，但是药物治疗不能解决重复感染问题，也不能起到预防的目的。因此有必要寻找新的治疗血吸虫病的药物。ELAV-like（embryoniclethalabnormalvisionlike）蛋白家族是一类mRNA结合蛋白，含有3个高度保守的RNA识别基序（RRM），存在于多种生物体中，对神经系统的发育和功能维持起重要作用，且多项研究表明，RRMRNA结合蛋白在细胞代谢过程中起着重要作用，在人和其他多种生物中其表达量变化或突变会引起发育异常或导致神经性自身免疫病的产生。ELAV在果蝇中首次克隆获得，因其表达改变致果蝇视神经发育异常并于胚胎期死亡而得名。ELAV-like蛋白家族有ELAV-like1、ELAV-like2、ELAV-like3和ELAV-like4四个成员，其中ELAV-like1在各组织广泛表达，ELAV-like3和ELAV-like4作为自身抗原在多系统神经障碍肿瘤性脑病中被发现，ELAV-like2蛋白不仅在多种物种的神经系统表达，在小鼠的生殖腺及非洲爪蟾的睾丸、卵巢和早期胚胎中也有特异性表达，且研究表明，小鼠的卵母细胞生长期间，ELAV-like2的过早降低导致成熟卵母细胞减数分裂效益低下。前期分析正常发育雌虫与发育阻遏雌虫转录组表达差异时发现一条在发育阻遏雌虫中高表达的基因，序列分析发现其编码的氨基酸序列与ELAV-like2同源。通过5'-RACE和3'-RACE获得了SjELAV-like2基因序列全长，将该基因序列提交到GeneBank，登录号为MG515726。血吸虫雌雄异体，只有与雄虫合抱方能引发雌虫的性成熟和产卵，成熟雌虫所产虫卵沉积于肝脏造成宿主的病理损害，排出体外造成疾病再传播。单性感染的雌虫生长缓慢，处于生殖系统发育阻遏状态，卵黄腺和卵巢不能发育成熟、不能正常产卵；而经两性感染达到性成熟的雌虫一旦与合抱雄虫分开，虫体也会逐渐变小，性器官退化，回到发育不完善的发育阻遏状态，因此从控制雌虫的生殖发育入手控制血吸虫病传播与发生有着重要的理论意义。RNA干扰（RNAi）技术目前已经在功能基因组学、基因治疗、微生物学研究和药物研发等领域里取得了令人瞩目的进展。RNA干扰是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是双链RNA（dsRNA）介导的、序列特异的靶基因转录后基因沉默的过程。将与靶基因转录的产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后，能特异性地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。所谓的小分子干扰RNA（smallinterferingRNAs，siRNAs），是为能够以同源互补序列mRNA为靶目标并将其降解而介导RNA干扰途径的短片段双链RNA分子，通常由20多个核苷酸组成，能进行特异性的转录后基因沉默。siRNA已经广泛应用于基因表达调控机制研究等领域。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，该siRNA可明显抑制SjELAV-like2基因的转录，可用于制备治疗血吸虫病的药物。此外，还需要提供一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一个方面，提供了一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，所述siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。优选的，所述siRNA为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种治疗血吸虫病的药物，所述药物的活性成分为：通过RNA干扰抑制日本血吸虫SjELAV-like2基因表达的siRNA。优选的，所述siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。更优选的，所述siRNA为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA在制备预防血吸虫病的疫苗中的应用。本专利技术日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，可用于干扰日本血吸虫SjELAV-like2基因转录、表达及血吸虫的生长发育，小鼠的体内RNA干扰实验表明，该siRNA能显著降低感染小鼠肝脏虫卵孵化率，适于制备治疗血吸虫病的药物。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1是本专利技术实施例1实时定量PCR分析各处理组SjELAV-like2基因的转录结果图；图2是本专利技术实施例2实时定量PCR分析各处理组SjELAV-like2基因的转录结果图。图3是利用扫描电镜观察干扰组虫体及NC组虫体的体被表膜变化情况，其中，（A,B,C）：日本血吸虫正常状态下体被表膜形态；箭头所示A：光面乳突B：泡状突出物C：有蒂乳突；（D,E,F）：SjELAV-like2siRNA干扰组虫体表膜形态；箭头所示E、F：泡状突出物。具体实施方式下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译.第3版，北京：科学出版社，2002）中所述的方法进行。实施例1体内RNA干扰筛选最佳dsRNA1.方法步骤1.1siRNA分子和SjELAV-like2基因实时定量PCR引物的准备根据血吸虫SjELAV-like2基因序列（MG515726）通过分析比较，设计并合成三对dsRNA，siRNA设计原则如下：1．从转录本（mRNA）的AUG起始密码开始，寻找“AA或者NA”二连序列，并记下其3'端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点。正义链和反义链都采用这19个碱基(不包括AA或者NA重复)来设计。2．避免在起始密码子或无义区域附近选择目的序列。3．siRNA序列的GC含量应为30%-60%左右。4．在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非编码区（untranslatedregions，UTRs），原因是这些地方有丰富的调控蛋白结合区域，而这些UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNP核酸内切酶复合物结合mRNA从而影响siRNA的效果。5．将挑选的序列在公共数据库中进行比较以确保目的序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种日本血吸虫SjELAV‑like 2基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA针对选自下述的靶点：靶点序列是448‑464bp，即GUUAUUCAAUGCCGCAU；靶点序列是858‑874bp，即UACAGUCCAACCACAAA；或靶点序列是961‑977bp，即UACUUGACUCCCUACUU。
【技术特征摘要】
1.一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA针对选自下述的靶点：靶点序列是448-464bp，即GUUAUUCAAUGCCGCAU；靶点序列是858-874bp，即UACAGUCCAACCACAAA；或靶点序列是961-977bp，即UACUUGACUCCCUACUU。2.一种日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA选自下述的一对或任意两对以上的组合：SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述日本血吸虫SjELAV-like2基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核...
【专利技术属性】
技术研发人员：金亚美，张媛媛，许蓉，何川川，李肖纯，程贵凤，刘金明，李浩，古少鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心，
类型：发明
国别省市：上海,31
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