一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种微生物菌剂，包括有芽孢杆菌、植物乳杆菌、丁酸梭菌、酿酒酵母。同时公开了及该微生物菌剂的制备、使用工艺，包括：将芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌、酿酒酵母在活化培养基中活化培养；将活化后的各菌液分别在扩增培养基中进行一级培养和二级培养；然后将各菌液按比例混合制得初始微生物菌剂，将初始微生物菌剂接入无机盐培养基中，厌氧发酵，得到本发明专利技术的微生物菌剂。本发明专利技术的微生物菌剂，可有效厌氧液化蔬菜废弃物，液化率可达到95%左右，从而加快蔬菜废弃物的处理。不含致病菌，不含重金属和有毒害化学物质，无毒无刺激性，实际应用不会对环境造成二次污染。制备工艺简单易操作，产品储运和投放简便高效。

【技术实现步骤摘要】
一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺
本专利技术属于环保工程中蔬菜废弃物生物处理
，具体涉及一种微生物菌剂及该微生物菌剂的制备、使用工艺。
技术介绍
随着经济的日益发展，人们生活水平的逐步提高，蔬菜的消费量越来越大，随之而来的蔬菜废弃物也越来越多。蔬菜废弃物大部分是绿色菜叶，含水量大，营养丰富，如不及时处理，很容易腐败变质。传统的蔬菜废弃物的处理，只能依靠自然界中的微生物进行自然分解，由于菌数偏少，且蔬菜废弃物量大、过于集中，自然分解过程十分缓慢，会产生恶臭，引起蚊蝇寄生，进而变成重大污染源。因此，如何快速、可控、彻底的处理蔬菜废弃物，一直是环保科技人员亟待解决的问题。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种微生物菌剂，以单个纯菌株培养到对数末期的活菌数量比计，包括，芽孢杆菌25∽35%、植物乳杆菌27∽32%、丁酸梭菌30∽32%、酿酒酵母6∽12%。以单个纯菌活化到对数末期的菌液体积比计，包括32%的芽孢杆菌、32%的植物乳杆菌、28%的丁酸梭菌、8%的酿酒酵母。一种微生物菌剂的制备工艺，包括以下步骤：步骤一、分别将芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在35∽38℃兼氧条件下在活化培养基中活化培养10∽14小时，将酿酒酵母在28∽32℃兼氧条件下在活化培养基中活化培养22∽24小时；步骤二、将活化后的芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在35∽38℃、50rpm条件下分别在扩增培养基中进行一级培养10∽14小时；将酿酒酵母在28∽32℃、50rpm条件下在扩增培养基中一级培养16∽20小时；步骤三、将一级培养所得的芽胞杆菌属菌液、植物乳杆菌菌液、丁酸梭菌菌液在35∽38℃，50rpm条件下分别在扩增培养基中二级培养9∽11小时，将一级培养所得的酿酒酵母菌液在28∽32℃、50rpm条件下在扩增培养基中二级培养14∽16小时；步骤四、将二级培养后的芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌、酿酒酵母按比例混合制得初始微生物菌剂，将初始微生物菌剂接入含5%糖蜜的无机盐培养基中，厌氧发酵7天，得到本专利技术的微生物菌剂。所述芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌的使用的活化培养基成分，以质量百分比计，均包括有0.8∽1.2%的蛋白胨，0.8∽1.2%的氯化钠，0.4∽0.6%的酵母膏，0.5∽1.5%的NaOH，活化培养基的pH为6.5∽7.5，活化培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再进行活化培养；酿酒酵母的活化使用的活化培养基成分，以质量百分比计，包括0.8∽1.2%的酵母膏，1.5∽2.5%的蛋白胨，1∽3%的蔗糖，活化培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再进行活化培养。所述芽孢杆菌、植物乳杆菌、丁酸梭菌一级培养和二级培养使用的扩增培养基成分，以质量百分比计，均包括，0.8∽1.2%糖蜜，0.4∽0.6%酵母膏，0.8∽1.2%氯化钠，扩增培养基的pH值为6.5∽7.5，将扩增培养基在115℃条件下灭菌20分钟再进行一级培养或二级培养；酿酒酵母一级培养和二级培养使用的扩增培养基成分，以质量百分比计，包括，1.8∽2.2%的糖蜜，0.8∽1.2%的酵母膏，将扩增培养基在115℃条件下灭菌20分钟再进行一级培养或二级培养。一种微生物菌剂的使用工艺，包括以下步骤：步骤一、将微生物菌剂进行兼性厌氧混合发酵，在缺氧条件下，形成含水解酶的菌剂混合液，其中水解酶包括有淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶、果胶酶；步骤二、将蔬菜废弃物进行压榨，压榨后的蔬菜废弃物中添加重量为蔬菜废弃物重量1‰的菌剂混合液，厌氧反应24h，过滤去除反应产生的液体。本专利技术的有益效果是：本专利技术的微生物菌剂，可有效厌氧液化蔬菜废弃物，液化率可达到95%左右，从而加快蔬菜废弃物的处理。不含致病菌，不含重金属和有毒害化学物质，无毒无刺激性，实际应用不会对环境造成二次污染。该微生物菌剂的制备工艺简单易操作，产品储运和投放简便高效。具体实施方式一种微生物菌剂的制备工艺：1、从-70℃的冰箱中取出甘油冻管保藏的植物乳杆菌（LactobacillusplantarumATCC8014）菌种、酿酒酵母（SaccharomycescerevisiaeATCC9080）菌种、丁酸梭菌（ClostridiumbutyricumCICC23847）菌种、芽胞杆菌属（Bacillussp.CICC23870），在经紫外灭菌的超净工作台中融解，移液枪无菌吸取1ml接入已灭菌的10ml液体种子活化培养基中，其中，用于活化所述芽胞杆菌属的活化培养基成分，以质量百分比计，包括1.0%的蛋白胨、1.0%的氯化钠、0.5%的酵母膏、1.0%的氢氧化钠，培养基的pH值调到7.0，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再用来活化芽胞杆菌属；用于活化所述植物乳杆菌的活化培养基成分以质量百分比计，包括1.0%的蛋白胨、1.0%的氯化钠、0.5%的酵母膏、1.0%的氢氧化钠，培养基的pH值调到7.0，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再用来活化植物乳杆菌；用于活化所述丁酸梭菌的活化培养基成分以质量百分比计，包括1.0%的蛋白胨、1.0%的氯化钠、0.5%的酵母膏、1.0%的氢氧化钠，培养基的pH值调到7.0，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟后再用来活化丁酸梭菌；活化所述酿酒酵母的培养基的成分，以质量百分比计，包括1.0%的酵母膏、2.0%的蛋白胨、2%的蔗糖，将培养基在115℃条件下灭菌20分钟再用来活化酿酒酵母。2、芽胞杆菌属接入活化培养基后，在37℃的温度条件下活化12小时；植物乳杆菌接入液体种子活化培养基后，在37℃的温度条件下活化12小时；丁酸梭菌接入液体种子活化培养基后，在32℃的温度条件下活化12小时；酿酒酵母接入液体种子活化培养基后，在30℃的温度条件下活化24小时。3、无菌条件下吸取活化好的各菌种1ml，接入50mL的扩增培养基中，进行一级培养。芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在37℃、50rpm条件下培养12小时左右；酿酒酵母在30℃、50rpm条件下培养18小时。其中，芽孢杆菌、植物乳杆菌、丁酸梭菌的一级培养用扩增培养基的组成为：1%糖蜜，0.5%酵母膏，1%氯化钠，PH值调至7.0；酿酒酵母的的一级培养用扩增培养基组成为：2%糖蜜，1%酵母膏。扩增培养基均在115℃条件下灭菌20分钟后再分别用来一级培养。4、将一级培养好的种子液以2%的接种量接入新鲜扩增培养基中进行二次培养，芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在37℃、200rpm条件下培养10小时左右；酿酒酵母在30℃、200rpm条件下培养15小时。其中，芽孢杆菌、植物乳杆菌、丁酸梭菌的二级培养用扩增培养基的组成为：1%糖蜜，0.5%酵母膏，1%氯化钠，PH值调至7.0；酿酒酵母的的二级培养用扩增培养基组成为：2%糖蜜，1%酵母膏。扩增培养基均在115℃条件下灭菌20分钟后再分别用来二级培养。5、将二级培养所制得二级种子液，以单个纯菌活化到对数末期的菌液体积比计，按照32%的芽孢杆菌、32%的植物乳杆菌、28%的丁酸梭菌、8%的酿酒酵母的比例混合，即做成初始微生物混合菌剂。6、将初始微生物混合菌剂接入含5%糖蜜的无机盐培养基中，厌氧发酵7天，得到本专利技术的微生物菌剂。经测试，本菌剂活菌浓度&a本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微生物菌剂，其特征在于，以单个纯菌株培养到对数末期的活菌数量比计，包括，芽孢杆菌25∽35%、植物乳杆菌27∽32%、丁酸梭菌30∽32%、酿酒酵母6∽12%。

【技术特征摘要】
1.一种微生物菌剂，其特征在于，以单个纯菌株培养到对数末期的活菌数量比计，包括，芽孢杆菌25∽35%、植物乳杆菌27∽32%、丁酸梭菌30∽32%、酿酒酵母6∽12%。2.如权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，以单个纯菌活化到对数末期的菌液体积比计，包括32%的芽孢杆菌、32%的植物乳杆菌、28%的丁酸梭菌、8%的酿酒酵母。3.一种如权利要求1或2所述微生物菌剂的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、分别将芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在35∽38℃兼氧条件下在活化培养基中活化培养10∽14小时，将酿酒酵母在28∽32℃兼氧条件下在活化培养基中活化培养22∽24小时；步骤二、将活化后的芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌在35∽38℃、50rpm条件下分别在扩增培养基中进行一级培养10∽14小时；将酿酒酵母在28∽32℃、50rpm条件下在扩增培养基中一级培养16∽20小时；步骤三、将一级培养所得的芽胞杆菌属菌液、植物乳杆菌菌液、丁酸梭菌菌液在35∽38℃，50rpm条件下分别在扩增培养基中二级培养9∽11小时，将一级培养所得的酿酒酵母菌液在28∽32℃、50rpm条件下在扩增培养基中二级培养14∽16小时；步骤四、将二级培养后的芽胞杆菌属、植物乳杆菌、丁酸梭菌、酿酒酵母按比例混合制得初始微生物菌剂，将初始微生物菌剂接入含5%糖蜜的无机盐培养基中，厌氧发酵7天，得到本发明的微生物菌剂。4.如权利要求3所述的微生物菌剂的制备工艺，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱胜杰，袁亚，黄秋燕，
申请(专利权)人：浙江华庆元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33