一种VEGF-D单克隆抗体及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种VEGF‑D单克隆抗体，其重链的氨基酸序列如VH：BAA24264所示，其轻链的氨基酸序列如VL：XP_009304362所示。所述VEGF‑D单克隆抗体具有较高的亲和力，特异性强，在体外具有良好的生物学活性。将本发明专利技术VEGF‑D单抗与VEGF‑D多抗建立的VEGF‑D蛋白检测试剂盒可作为评价肿瘤淋巴管生成和淋巴转移指标。

【技术实现步骤摘要】
一种VEGF-D单克隆抗体及试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种VEGF-D单克隆抗体及VEGF-D蛋白检测试剂盒。
技术介绍
在肿瘤转移机制的研究中，淋巴系统作为肿瘤尤其是实体瘤转移通道的重要意义不断被认识。临床病理学研究显示实体瘤播散的最早途径是经淋巴道的区域性淋巴结播散。目前大多数研究都认为，VEGF-D/VEGFR-3信号系统是肿瘤淋巴管生成最重要的调控机制，并在肿瘤淋巴转移过程中发挥了重要作用。VEGF-D是1998年Achen等[1]用计算机进行同源搜索时发现的，与VEGF-C结构相似，定位于染色体Xp22.31。VEGF-D在人体结合内皮细胞受体，蛋白水解程序可以调控VEGF-D的生物活性。VEGFR-3最早从人胎盘和红白血病细胞基因库中克隆出来，定位于染色体5q33-5q35，与VEGFR-1、VEGFR-2同属于受体型酪氨酸蛋白激酶家族。VEGFR1和VEGFR2主要表达于血管内皮细胞，VEGFR-3主要表达于淋巴管内皮细胞。所有VEGFR都具有相同的7个细胞外免疫球蛋白同源区域，其中第2和第3个区域是配体结合的关键部位，并且前3个区域是建立完整结合的必须条件。肿瘤组织中淋巴管生成增加，表现为淋巴管内皮细胞增殖，肿瘤组织淋巴管密度明显增高，并与淋巴结转移相关。VEGF-D可以诱导肿瘤组织内部和肿瘤组织周围淋巴管生成，并与显著增加的淋巴脉管浸润和淋巴结转移率相关。对人类许多肿瘤的临床研究也证实，高表达的VEGF-C或D与肿瘤患者淋巴结转移、淋巴管浸润以及不良预后相关。临床研究的结果证实VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信号系统在肿瘤淋巴转移过程中发挥了重要作用。目前研究认为其机制可能是：肿瘤细胞分泌淋巴管内皮生长因子VEGF-C、D以旁分泌的形式作用于淋巴管内皮细胞上的酪氨酸激酶受体VEGFR-3，经过信号传导，最终引起淋巴管内皮细胞的增殖、分化、迁移和管腔形成，肿瘤组织淋巴管密度增加。这些肿瘤组织内增多的淋巴管与生理状态下的淋巴管结构相似，但数量增多，管壁薄，多位于肿瘤实质周围，因此这就为肿瘤细胞浸润转移提供了更多的通道，有利于肿瘤细胞转移扩散和淋巴结转移。除此以外，VEGF-C、D与VEGFR-3结合后能够促进淋巴管内皮细胞释放蛋白水解酶类，促进肿瘤细胞的基质浸润，同时还可改变淋巴管内皮细胞的黏附特性、表面趋化因子及其受体的表达，影响肿瘤细胞进入淋巴管的过程，从而主动促进肿瘤淋巴管转移。关于淋巴管生成因子及其受体对肿瘤淋巴转移和预后的关系和意义，近年来颇受重视。淋巴管生成不仅发生在主要的位点,而且发生在滤过的淋巴结,在肿瘤细胞之前到达淋巴结。肿瘤内VEGF-D的高表达,已被证实能引起肿瘤内部淋巴管的形成,并且能够促进淋巴结的转移。研究发现VEGF-D表达增高可促进肿瘤淋巴管生成及增加淋巴管密度，从而促进淋巴转移，这与诸多瘤体的预后密切相关。在NSCLC组织中VEGF-D的表达量明显高于肺良性病变组织，其表达与NSCLC的发生发展有关。表明，在正常组织中淋巴管生成因子及其受体处于失活或封闭状态，在肿瘤病理状态下NSCLC细胞可通过自分泌VEGF-D诱导淋巴管新生，促进肿瘤发展。VEGF-D的表达与淋巴管密度和淋巴结转移密切相关,表明VEGF-D在促进肿瘤的淋巴管生成和淋巴结转移中起重要的作用,阻断VEGF-D的作用后,有可能抑制肿瘤淋巴管生成和降低淋巴结转移的能力。研究发现血清VEGF-D的水平在淋巴管平滑肌增生症中明显升高,但在管瘤病、肺朗格汉斯组织细胞增多症及肺气肿的患者中是正常的,而淋巴管平滑肌增生症有和肿瘤相似的特点。VEGF-C、D/VEGFR-3一方面通过旁分泌作用机制促进肿瘤淋巴管生成而为肿瘤细胞转移提供通道，另一方面通过自分泌作用机制促进肿瘤细胞生长、增殖、迁移，从而在肿瘤淋巴管生成和淋巴结过程中起到了重要的调控作用。这也就为抗肿瘤淋巴管生成和淋巴转移的基因治疗提供了可能的靶点，监测VEGF-C、D的含量对评价肿瘤淋巴管生成和淋巴转移为肿瘤淋巴转移的治疗开辟一条新的途径。近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。用于检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、酶联免疫吸附法、和化学发光免疫分析。这些方法既可以作为初筛试验也可以作为确认试验，其中化学发光法具有检测线性范围宽、检测仪器简单、操作方便等优点。现有技术中针对肿瘤淋巴转移的生物标记物产品目前国内尚属空白，同类产品其特异性和亲和力等方面还存在进一步的提升可能，基于此，我们开发了VEGF-C测定试剂盒(化学发光法)及其制备方法。
技术实现思路
为了克服现有中的上述问题，本专利技术提供了一种VEGF-D单克隆抗体，具有较高的亲和力，在体外具有良好的生物学活性；开发前景广阔。一种VEGF-D单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：MetTyrArgGluTrpValValValAsnValPheMetMetLeuTyrValGlnLeuValGlnGlySerSerAsnGluHisGlyProValLysArgSerSerGlnSerThrLeuGluArgSerGluGlnGlnIleArgAlaAlaSerSerLeuGluGluLeuLeuArgIleThrHisSerGluAspTrpLysLeuTrpArgCysArgLeuArgLeuLysSerPheThrSerMetAspSerArgSerAlaSerHisArgSerThrArgPheAlaAlaThrPheTyrAspIleGluThrLeuLysValIleAspGluGluTrpGlnArgThrGlnCysSerProArgGluThrCysValGluValAlaSerGluLeuGlyLysSerThrAsnThrPhePheLysProProCysValAsnValPheArgCysGlyGlyCysCysAsnGluGluSerLeuIleCysMetAsnThrSerThrSerTyrIleSerLysGlnLeuPheGluIleSerValProLeuThrSerValProGluLeuValProValLysValAlaAsnHisThrGlyCysLysCysLeuProThrAlaProArgHisProTyrSerIleIleArgArgSerIleGlnIleProGluGluAspArgCysSerHisSerLysLysLeuCysProIleAspMetLeuTrpAspSerAsnLysCysLysCysValLeuGlnGluGluAsnProLeuAlaGlyThrGluAspHisSerHisLeuGlnGluProAlaLeuCysGlyProHisMetMetPheAspGluAspArgCysGluCysValCysLysThrProCysProLysAspLeuIleGlnHisProLysAsnCysSerCysPheGluCysLysGluSerLeuGluThrCysCysGlnLysHisLysLeuPheHisProAspThrCysSerCysGluAspArgCysProPheHi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种VEGF‑D单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：Met Tyr Arg Glu Trp Val Val Val Asn Val Phe Met Met Leu Tyr Val Gln Leu Val Gln Gly Ser Ser Asn Glu His Gly Pro Val Lys Arg Ser Ser Gln Ser Thr Leu Glu Arg Ser Glu Gln Gln Ile Arg Ala Ala Ser Ser Leu Glu Glu Leu Leu Arg Ile Thr His Ser Glu Asp Trp Lys Leu Trp Arg Cys Arg Leu Arg Leu Lys Ser Phe Thr Ser Met Asp Ser Arg Ser Ala Ser His Arg Ser Thr Arg Phe Ala Ala Thr Phe Tyr Asp Ile Glu Thr Leu Lys Val Ile Asp Glu Glu Trp Gln Arg Thr Gln Cys Ser Pro Arg Glu Thr Cys Val Glu Val Ala Ser Glu Leu Gly Lys Ser Thr Asn Thr Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val Asn Val Phe Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Glu Glu Ser Leu Ile Cys Met Asn Thr Ser Thr Ser Tyr Ile Ser Lys Gln Leu Phe Glu Ile Ser Val Pro Leu Thr Ser Val Pro Glu Leu Val Pro Val Lys Val Ala Asn His Thr Gly Cys Lys Cys Leu Pro Thr Ala Pro Arg His Pro Tyr Ser Ile Ile Arg Arg Ser Ile Gln Ile Pro Glu Glu Asp Arg Cys Ser His Ser Lys Lys Leu Cys Pro Ile Asp Met Leu Trp Asp Ser Asn Lys Cys Lys Cys Val Leu Gln Glu Glu Asn Pro Leu Ala Gly Thr Glu Asp His Ser His Leu Gln Glu Pro Ala Leu Cys Gly Pro His Met Met Phe Asp Glu Asp Arg Cys Glu Cys Val Cys Lys Thr Pro Cys Pro Lys Asp Leu Ile Gln His Pro Lys Asn Cys Ser Cys Phe Glu Cys Lys Glu Ser Leu Glu Thr Cys Cys Gln Lys His Lys Leu Phe His Pro Asp Thr Cys Ser Cys Glu Asp Arg Cys Pro Phe His Thr Arg Pro Cys Ala Ser Gly Lys Thr Ala Cys Ala Lys His Cys Arg Phe Pro Lys Glu Lys Arg Ala Ala Gln Gly Pro His Ser Arg Lys Asn Pro；轻链可变区氨基酸序列为：Met Lys Lys Gln Lys Cys Ala Gly Leu His Met Leu Leu Leu Leu Tyr Val Arg Leu Met Leu Ala Val Asp Ala Tyr Arg Pro Gln Arg Asp Thr Asn Gln Glu Lys Trp Glu Gln Glu Leu Arg Glu Ala Gly Ser Leu Asp Glu Leu Leu Met Leu Thr Glu Tyr Pro Asp Trp Lys Leu Trp Arg Cys Arg Leu Lys Leu Lys His Phe Asp Asp Val Thr Pro Pro Glu Asn Arg Arg Ser Thr Arg Tyr Ala Ala Ala Ser Phe Ser Pro Glu Met Leu Lys Asp Ile Asp Asp Glu Trp Gln Lys Thr Gln Cys Met Pro Arg Glu Thr Cys Val Asp Val Ala Lys Glu Leu Gly Thr Asn Thr Ala Val Phe Phe Lys Pro Pro Cys Val S...

【技术特征摘要】
1.一种VEGF-D单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区氨基酸序列为：MetTyrArgGluTrpValValValAsnValPheMetMetLeuTyrValGlnLeuValGlnGlySerSerAsnGluHisGlyProValLysArgSerSerGlnSerThrLeuGluArgSerGluGlnGlnIleArgAlaAlaSerSerLeuGluGluLeuLeuArgIleThrHisSerGluAspTrpLysLeuTrpArgCysArgLeuArgLeuLysSerPheThrSerMetAspSerArgSerAlaSerHisArgSerThrArgPheAlaAlaThrPheTyrAspIleGluThrLeuLysValIleAspGluGluTrpGlnArgThrGlnCysSerProArgGluThrCysValGluValAlaSerGluLeuGlyLysSerThrAsnThrPhePheLysProProCysValAsnValPheArgCysGlyGlyCysCysAsnGluGluSerLeuIleCysMetAsnThrSerThrSerTyrIleSerLysGlnLeuPheGluIleSerValProLeuThrSerValProGluLeuValProValLysValAlaAsnHisThrGlyCysLysCysLeuProThrAlaProArgHisProTyrSerIleIleArgArgSerIleGlnIleProGluGluAspArgCysSerHisSerLysLysLeuCysProIleAspMetLeuTrpAspSerAsnLysCysLysCysValLeuGlnGluGluAsnProLeuAlaGlyThrGluAspHisSerHisLeuGlnGluProAlaLeuCysGlyProHisMetMetPheAspGluAspArgCysGluCysValCysLysThrProCysProLysAspLeuIleGlnHisProLysAsnCysSerCysPheGluCysLysGluSerLeuGluThrCysCysGlnLysHisLysLeuPheHi...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕鹏辉，
申请(专利权)人：浙江众意生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33