一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体制备方法及应用技术

技术编号:19445039 阅读:200 留言:0更新日期:2018-11-14 16:12
本发明专利技术公开了幽门螺杆菌HopQ在制备抗幽门螺杆菌卵黄抗体中的应用。所述幽门螺杆菌HopQ的序列SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术使用幽门螺杆菌HopQ作为抗原,制备出特异性抗幽门螺杆菌的卵黄抗体,可以特异性的对抗HopQ‑CEACAM1相互作用与结合,阻止幽门螺杆菌吸附到胃粘膜的上皮细胞上,减少其入侵机体天然的免疫系统和诱发相应的感染,从而可有效地预防幽门螺杆菌感染引发的相关疾病。同时,所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体还可以添加到各种药品、保健品和食品中,用于预防幽门螺杆菌的感染;还可以制备成为幽门螺杆菌的检测试剂盒,用于快速、准确检测幽门螺杆菌。

【技术实现步骤摘要】
一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体制备方法及应用
本专利技术属于生物
,具体涉及幽门螺杆菌感染的预防和治疗,更具体地涉及一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法及其应用。
技术介绍
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)是科学家BarryMarshall和RobinWarren发现的,该菌能够感染胃部组织并且引发溃疡,而这两位研究者也因发现了幽门螺杆菌而获得了2005年的诺贝尔生理学及医学奖。幽门螺杆菌,是胃溃疡和胃癌的致病因子。据估计,一半的世界人口感染上幽门螺杆菌。很多感染者产生胃炎症状,而且每5名感染者当中,就有1人极大可能患上胃溃疡。在很多情形下,这是一种病情进展快速的致命性疾病。胃炎和胃溃疡虽然可利用抗生素加以治疗,但是通常需要使用两到三种不同类型的抗生素,且并不是对所有的患者都有效。若未得到有效治疗,长期的幽门螺杆菌炎症最终会引发胃癌的产生。而胃癌是一种高度致死性、难以治愈的癌症。在全世界,胃癌每年影响着100万人,每年有超过70万人死于胃癌。目前,胃癌产生的主要原因被认为是幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染,但缺乏有效治疗胃癌的方法货药物;另一方面,由于抗生素耐药性的不断扩散和增强,幽门螺杆菌的防治变得更加复杂。对胃黏膜的附着是建立细菌定植的第一步,而幽门螺杆菌表面的粘附在与人胃黏膜的结合中起着关键作用。日前,一项刊登于国际杂志NatureMicrobiology上的研究报告中,来自慕尼黑工业大学等机构的研究人员通过研究发现了一种新方法来抑制或治疗幽门螺杆菌引发的感染或并发症。为了在人类胃部持久地生存,幽门螺杆菌必须吸附到胃粘膜的上皮细胞上,文章中研究人员检测到了幽门螺杆菌在上皮细胞中吸附力的特异性明显改变,即幽门螺杆菌表面的黏附因子HopQ能够结合到胃部组织的癌胚抗原相关的细胞粘附分子(CEACAMs)上;研究者BernhardB.Singer认为,相对比以前所报道的细菌所产生黏附因子而言,这里所研究发现的结合作用并不依赖于糖类的结构,这似乎就表明,幽门螺杆菌在胃部的酸性环境中会保持特异性地稳定作用,CEACAMs并不会在健康的胃部组织中出现,但当幽门螺杆菌引发胃部炎症时CEACAMs就会出现。HopQ-CEACAM1相互作用使细胞毒素相关基因A(CagA)的易位成为宿主细胞,增强了促炎性介质的释放,如白介素-8。在研究中发现,如果幽门螺杆菌缺失黏附因子HopQ,则不能使幽门螺杆菌定植于胃上皮细胞,从而进一步诱导炎症反应。这也就说明粘附因子HopQ对幽门螺杆菌定植胃上皮细胞是相当重要的。若缺失HopQ或HopQ无法发挥正常作用,则能抑制HopQ介导的Cag毒力通路的激活,如遗传或抗体介导的HopQ功能显示,也就能抑制接下来幽门螺杆菌侵染后的一系列的炎症感染。可见,HopQ-CEACAM1相互作用是一种潜在的有前途的新治疗靶点,用于治疗幽门疾病相关疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供幽门螺杆菌HopQ在制备抗幽门螺杆菌卵黄抗体中的应用。所述幽门螺杆菌HopQ基因在幽门螺杆菌附着胃黏膜细胞的过程中发挥着重要的作用,本专利技术以幽门螺杆菌HopQ为抗原制备的抗幽门螺杆菌卵黄抗,可以很好的阻止幽门螺杆菌附着在胃黏膜细胞上,即可减少幽门螺杆菌的感染,降低幽门螺杆菌引发疾病的几率。本专利技术的另一目的在于提供一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体。本专利技术的再一目的在于提供所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种包含有所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的检测试剂盒。本专利技术的上述目的是通过以下方案予以实现的:幽门螺杆菌HopQ(37-453)在制备抗幽门螺杆菌卵黄抗体中的应用,所述幽门螺杆菌HopQ的序列如SEQIDNO:1所示。幽门螺杆菌HopQ对于幽门螺杆菌是否能够成功的粘附于胃粘膜细胞上具有重要的影响,当幽门螺杆菌无法依靠HopQ粘附于胃粘膜细胞上时,则幽门螺杆菌引发感染的几率明显下降,幽门螺杆菌感染引发相关疾病的几率也将明显降低。与CEACAMs结合的幽门螺杆菌HopQ结构是HopQ的胞外3+4螺旋绑定域中的β发夹结构,基因序列是180-218。本专利技术采用的是HopQ中37-463的序列。通过幽门螺杆菌HopQ作为抗原,制备得到可以特异性识别HopQ的抗体,则能竞争性地抑制HopQ介导的Cag毒力通路的激活,抑制接下来一系列的炎症感染。一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法,所述方法包括如下过程:S1.先克隆幽门螺杆菌HopQ基因片段,然后将其重组到表达载体上诱导蛋白表达,并将得到的蛋白进行分离和纯化,得到HopQ重组蛋白;所述HopQ重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示;S2.用HopQ重组蛋白对产蛋家禽进行免疫,然后收集免疫后的家禽所产的蛋;S3.从收集的蛋的卵黄中提取、纯化抗幽门螺杆菌的抗体,并冷冻、干燥,得到抗幽门螺杆菌的卵黄抗体干粉。利用幽门螺杆菌HopQ免疫产蛋家禽,使产蛋家禽体内产生抗体,并生产蛋黄内含有抗幽门螺杆菌的抗体的鸡蛋。产蛋家禽在反复摄取幽门螺杆菌HopQ抗原后,产蛋家禽体内产生抗体,其产下的蛋的蛋黄中就存在抗幽门螺杆菌HopQ的抗体。该抗体可以抑制HopQ-CEACAM1相互作用与结合,阻止幽门螺杆菌吸附到胃粘膜的上皮细胞上,减少其入侵机体天然的免疫系统和诱发相应的感染,对于胃溃疡和胃癌有预防和治疗作用。优选地,所述幽门螺杆菌HopQ的序列如SEQIDNO:1所示。优选地,步骤S2中对产蛋家禽进行免疫时,HopQ重组蛋白可配以佐剂进行注射免疫。优选地,对家禽进行注射免疫时,每次注射的剂量为300~500ug/只;注射次数为3~5次;每次注射间隔时间为2周。优选地,当收集的蛋中抗幽门螺杆菌抗体滴度低于104时,可对产蛋家禽进行强化免疫;所述产蛋家禽为产蛋鸡。本专利技术同时还保护上述制备方法得到的抗幽门螺杆菌的卵黄抗体,所述幽门螺杆菌HopQ的序列如SEQIDNO:1所示。所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体在制备预防幽门螺杆菌感染疫苗中的应用也在本专利技术的保护范围内。所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体作为预防幽门螺杆菌感染的添加剂的应用也在本专利技术的保护范围内。优选地,所述添加剂可添加在药物、保健性和/功能性食品药品或食品中。本专利技术还保护一种检测幽门螺杆菌的试剂盒,所述试剂盒包含有所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体。与现有技术相比,本专利技术具有以下有益效果:(1)本专利技术使用幽门螺杆菌HopQ作为抗原,制备出特异性抗幽门螺杆菌的卵黄抗体,可以特异性的对抗HopQ-CEACAM1相互作用与结合,阻止幽门螺杆菌吸附到胃粘膜的上皮细胞上,减少其入侵机体天然的免疫系统和诱发相应的感染。(2)为了解决卵黄抗体大规模生产所需的抗原来源的问题,利用基因工程和蛋白重组的技术来制备幽门螺杆菌抗原,操作简单,成本低。(3)本专利技术所述抗幽门螺杆菌卵黄抗体可添加到各种药品、保健品或食品中,用于预防预防幽门螺杆菌的感染;还可以制备成为幽门螺杆菌的检测试剂盒,用于快速、准确检测幽门螺杆菌。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做出进一步地详细阐述,所述实施例只用于解释本专利技术,并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊本文档来自技高网
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【技术保护点】
1. 幽门螺杆菌HopQ在制备抗幽门螺杆菌卵黄抗体中的应用,所述幽门螺杆菌HopQ的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.幽门螺杆菌HopQ在制备抗幽门螺杆菌卵黄抗体中的应用,所述幽门螺杆菌HopQ的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。2.一种抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下过程:S1.将幽门螺杆菌HopQ基因连接到重组表达载体上诱导蛋白表达,并将得到的蛋白进行分离和纯化,得到HopQ重组蛋白;所述HopQ重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示;S2.用HopQ重组蛋白对产蛋家禽进行免疫,然后收集免疫后的家禽所产的蛋;S3.从收集的蛋的卵黄中提取、纯化抗幽门螺杆菌的抗体,并冷冻、干燥,得到抗幽门螺杆菌的卵黄抗体干粉。3.根据权利要求2所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法,其特征在于,所述幽门螺杆菌HopQ的序列如SEQIDNO:1所示。4.根据权利要求2所述抗幽门螺杆菌的卵黄抗体的制备方法,其特征在于,步骤S2中...

【专利技术属性】
技术研发人员:赵肃清陈莉莉肖益热崔锡平贺攀王甜甜
申请(专利权)人:广东工业大学
类型:发明
国别省市:广东,44

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