一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法技术

技术编号:19387939 阅读:24 留言:0更新日期:2018-11-10 01:41
本发明专利技术提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法,属于免疫分析技术领域。该试剂盒包括:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液、吖啶酯标记的GH抗体和生物素标记的GH抗体。本发明专利技术还提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法。该试剂盒采用夹心法原理定量测定血清或血浆中的GH,在链霉亲和素‑磁微粒悬浮液中加入生物素‑GH抗体复合物,通过生物素和链霉亲和素的亲和反应,形成磁微球‑亲和素‑生物素‑GH复合物,通过抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物形成磁微粒‑生物素‑GH抗体‑GH‑GH抗体‑吖啶酯,该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、成本相对较低的优点,可广泛用于临床检测。

A chemiluminescent immunoassay kit for detecting human growth hormone and its preparation method

The invention provides a chemiluminescence immunoassay kit for detecting human growth hormone and a preparation method thereof, belonging to the field of immunoassay technology. The kit includes magnetic bead suspension coated with streptavidin, GH antibody labeled with acridine ester and GH antibody labeled with biotin. The invention also provides a preparation method of a chemiluminescence immunoassay kit for detecting human growth hormone. The sandwich method was used to quantitatively determine GH in serum or plasma. Biotin-GH antibody complex was added to streptavidin-magnetic particle suspension. The magnetic microsphere-avidin-biotin-GH complex was formed by affinity reaction between biotin and streptavidin, and antigen was formed by antigen-antibody reaction. The antibody complex forms magnetic particles, biotin, GH antibody, GH antibody and acridine ester. The method has the advantages of high sensitivity, specificity, good repeatability, wide detection range and relatively low cost, and can be widely used in clinical detection.

【技术实现步骤摘要】
一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫分析
,涉及一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。
技术介绍
人生长激素(humanGrowthHormone)是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的单一肽链蛋白质激素,由191个氨基酸组成,具有广泛的生理功能,人类的生长激素主要通过刺激肝脏分泌胰岛素样生长因子(IGF-I),作用于骨和软骨,引起身高的增长,同时能够促进人体蛋白质合成及脂肪分解,调节体内水盐平衡。1.生长素异常的临床表现生长激素异常主要分为:1)生长激素过量;2)生长激素缺乏。生长激素过量通常会出现巨人症和肢端肥大症。巨人症是一种异常的纵向生长,原因是hGH和IGF-1过度作用,加上骨骺生长板在儿童期打开致使身材过高。肢端肥大症也是hGH和IGF-1过量引起的一种病症,是在成年期生长板软骨融合后发生的。肢端肥大症的临床表现多样,既有轻微迹象,如肢端增生和面部特征粗化,也有发病率和死亡率有所上升的明显的代谢、心血管和呼吸道表现形式。儿童生长激素缺乏会使纵向生长相比骨龄较为迟缓,而成人若有严重的生长激素缺乏会出现肌力减退,骨量减少,胰岛素灵敏度下降,腹部肥胖和心血管危险因素升高(即异常血脂水平,动脉粥样硬化)。渐进性生长激素缺乏的成人的肾脏、骨骼和肠道细胞对甲状旁腺素(PTH)感觉迟钝,进而产生轻度PTH抵抗,并伴有血清PTH水平的升高。与终末器官灵敏度下降相一致,对PTH的血钙反应也同样被推迟。2.生长激素的检测方法目前常用的检测生长激素的方法有放射免疫技术(RIA)、酶联免疫分析技术(ELISA),但这两种方法存在诸多不足,如RIA存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点;ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有的检测生长激素的方法检测时间长、灵敏度低、重复性差的问题,而提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法。本专利技术首先提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,该试剂盒包括:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液吖啶酯标记的GH抗体生物素标记的GH抗体优选的是,所述的包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液中,包被有链霉亲和素的磁珠的粒径为1-3μm。优选的是,所述的吖啶酯标记的GH抗体中,吖啶酯与GH抗体的摩尔比为(3-15):1。优选的是,所述的生物素标记的GH抗体中,生物素和GH抗体的摩尔比为(3-15):1。优选的是,所述的试剂盒还包括校准品和质控品。本专利技术还包括一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法,包括:步骤一:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后,放置在磁分离器上,直至上清液无混浊,弃上清,留取磁颗粒,清洗后在缓冲液中配成固相试剂R1;步骤二:吖啶酯标记的GH抗体的制备将GH抗体放入离心管中离心,然后加入碳酸缓冲液,混匀后加入吖啶酯溶液离心,将离心管密封后放入避光暗盒中,然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀,加入封闭液,放入气浴恒温振荡器中混匀,将封闭好的抗体经过纯化、收集,然后放入缓冲液中稀释,保存,得到R2试剂;步骤三:生物素标记的GH抗体的制备取GH抗体,进行超滤离心,将GH抗体缓冲液置换为PBS,然后加入生物素溶液充分混匀,室温放置2-4小时后,将收集到的生物素标记抗体选用缓冲液稀释,得到R3试剂;优选的是,所述步骤一的缓冲液为50mMMES、0.05%吐温、0.05%Proclin300,pH6.0。优选的是,所述步骤二中GH抗体的质量(μg):吖啶酯溶液的体积(μl)为100:1。优选的是,所述步骤二的封闭液优选为赖氨酸,质量分数为20%。优选的是,所述步骤二缓冲液为50mMMES、0.05%吐温-20、0.05%Proclin300,pH6.0。优选的是,所述的步骤三的缓冲液为含有1%BSA,PH为6.0的100mM柠檬酸缓冲液。本专利技术的有益效果本专利技术提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法,该试剂盒采用夹心法原理定量测定血清或血浆中的GH,在链霉亲和素-磁微粒悬浮液中加入生物素-GH抗体复合物,通过生物素和链霉亲和素的亲和反应,形成磁微球-亲和素-生物素-GH复合物,通过抗原抗体反应,形成抗原抗体复合物形成磁微粒-生物素-GH抗体-GH-GH抗体-吖啶酯,用磁场将复合物吸附在反应杯底部,洗掉游离的成分,加入酸碱激发液,根据发光强度定量测量样本中GH的含量。本专利技术将化学发光技术和酶免疫分析技术结合起来,该检测方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、检测范围广、成本相对较低的优点,可广泛用于临床检测。附图说明图1为本专利技术人生长激素化学发光免疫检测试剂盒的制备方法的制备流程设计图。图2为采用本专利技术人生长激素化学发光定量试剂盒的测试校准品检测相对发光值的标准曲线。具体实施方式本专利技术首先提供一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,该试剂盒包括:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液吖啶酯标记的GH抗体生物素标记的GH抗体按照本专利技术,所述的包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液中,包被有链霉亲和素的磁珠的粒径优选为1-3μm,当包被有链霉亲和素的磁珠的粒径低于1μm时,抗原或者抗体与磁珠结合率低,可能导致整体光量子数偏低;当包被有链霉亲和素的磁珠的粒径高于3μm时,非特异性结合效果明显,可能导致试剂盒灵敏度差等。按照本专利技术,所述的吖啶酯标记的GH抗体中,吖啶酯与GH抗体的摩尔比优选为(3-15):1。按照本专利技术,所述的生物素标记的GH抗体中,生物素和GH抗体的摩尔比为优选(3-15):1。按照本专利技术,所述的试剂盒还包括校准品和质控品。所述的校准品和质控品的制备相同,优选包括:用含有20%小牛血清的100mMPBS缓冲液将GH稀释成校准品,分装成0.03ng/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml。本专利技术还包括一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法,具体流程如图1所示,包括:步骤一:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后,放置在磁分离器上,直至上清液无混浊,弃上清,留取磁颗粒,清洗后在缓冲液中配成固相试剂R1;所述的链霉亲和素磁颗粒溶液的浓度优选为100mg/ml;链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液的体积比优选为0.5:10;缓冲液为50mMMES、0.05%吐温、0.05%Proclin300,pH6.0;所述的固相试剂包被链霉亲和素的磁珠浓度优选为0.05%-0.1%;步骤二:吖啶酯标记的GH抗体的制备将GH抗体放入离心管中离心,优选在室温下离心10s~30s,保证抗体位于离心管底部位置,然后加入碳酸缓冲液,混匀后加入吖啶酯溶液离心,所述的离心温度优选为室温,离心时间优选为0.5min~3min;将离心管密封后放入避光暗盒中,然后将暗盒放入气浴恒温振荡器(25℃)中混匀,所述的混匀时间优选为2-4h,加入封闭液,放入气浴恒温振荡器中混匀封闭,所述的封闭时间优选为1-2h,将封闭好的抗体上葡聚糖凝胶G25本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液吖啶酯标记的GH抗体生物素标记的GH抗体。

【技术特征摘要】
1.一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液吖啶酯标记的GH抗体生物素标记的GH抗体。2.根据权利要求1所述的一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,所述的包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液中,包被有链霉亲和素的磁珠的粒径为1-3μm。3.根据权利要求1所述的一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,所述的吖啶酯标记的GH抗体中,吖啶酯与GH抗体的摩尔比为(3-15):1。4.根据权利要求1所述的一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,所述的生物素标记的GH抗体中,生物素和GH抗体的摩尔比为(3-15):1。5.根据权利要求1所述的一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒还包括校准品和质控品。6.根据权利要求1所述的一种检测人生长激素化学发光免疫分析测定试剂盒的制备方法,其特征在于,包括:步骤一:包被有链霉亲和素的磁珠悬浮液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后,放置在磁分离器上,直至上清液无混浊,弃上清,留取磁颗粒,清洗后在缓冲液中配成固相试剂R1;步骤二:吖啶酯标记的GH抗体的制备将GH抗体放入离心管中离心,然后加入碳酸缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员:翟涛刘杨何浩会高威孙成艳
申请(专利权)人:迪瑞医疗科技股份有限公司
类型:发明
国别省市:吉林,22

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