The invention discloses a human urinary albumin latex enhanced competitive immune turbidimetric test kit and its preparation and use method. The second anti-competitive immune turbidimetric method of the invention overcomes the defects of the existing enhanced immune turbidimetric method from the principle of immune response. When there is no antigen in the measurement reaction system, the second anti-body connected to the latex particles will produce agglutination reaction with the first anti-body in the system, and the agglutination effect reaches the maximum when the measurement of the anti-body is carried out. When there are antigens in the system, the antigen will bind with the first antibody to form an antigen-antibody (first antibody) immune complex. This binding will close the binding sites of the first antibody and the second antibody, and compete with the first antibody and the second antibody immune agglutination reaction. If the quantity of the first antibody is limited, the antigen in the sample will competently inhibit the first antibody and the second antibody immunity. Therefore, the agglutination effect of immune complex formed by the reaction of primary antibody and secondary antibody latex will decrease with the increase of free antigen in the reaction system.
【技术实现步骤摘要】
一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒及其制作和使用方法
本专利属于生物
,尤其涉及一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒及其制作和使用方法。
技术介绍
免疫比浊分析方法在临床得到普遍开展,有几十种试剂盒已在临床应用,同时新的生物标记物的发现,将不断推进这种新的试剂盒产生。目前主要有两种类型,一种是直接将抗体加入反应体系中,在一定的条件下,抗原、抗体反应形成免疫复合物,产生凝集或沉淀使体系浊度改变,这种浊度变化与体系中抗原浓度具有正向的相关关系,据此可以测定样品中抗原浓度,这种方法通常称为比浊或普通比浊;第二种是在第一种方法基础上发展而来,将抗体结合到固态微粒上,可以增强凝集或沉淀的效果,以提高分析灵敏度,这种方法通常称为增强免疫比浊。增强免疫比浊这种均相的免疫分析过程中,维持抗原、抗体适当的比例十分重要,否则当抗原过量时,抗原-抗体免疫复合物产生沉淀或凝集的效果反而会降低,这就是免疫比浊分析中,通常所说的“钩状效应”,由于“钩状效应”存在,过量抗原检测时,免疫复合物形成沉淀的效果反而下降,会测出较低的浓度值,得出“假阴性”结果,这种假阴性结果往往会引起临床误判。尿微量白蛋白是反映肾小球疾病和肾损伤的一个非常灵敏的指标。尤其在糖尿病、高血压等疾病发生的早期用于了解肾脏的损伤情况有特殊的意义,正常状态下,人尿液中白蛋白的含量低于20mg/L,当有肾损伤时,微量白蛋白可高达1000mg/L甚至更高。尿中白蛋白检测时,需要考虑过量抗原检测所产生的假阴性结对临床的误判,避免由于抗原过量时的假阴性结果,有人利用预反应阀值判断的方法,用于过量 ...
【技术保护点】
1.一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒,其特征在于,包括试剂1和试剂2;所述试剂1包括负载物,所述负载物上负载有待使用一抗的抗体,即二抗;所述二抗为兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG;所述试剂2包括待使用一抗,所述待使用一抗为鼠抗人白蛋白单克隆抗体或兔抗人白蛋白多克隆抗体。
【技术特征摘要】
1.一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒,其特征在于,包括试剂1和试剂2;所述试剂1包括负载物,所述负载物上负载有待使用一抗的抗体,即二抗;所述二抗为兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG;所述试剂2包括待使用一抗,所述待使用一抗为鼠抗人白蛋白单克隆抗体或兔抗人白蛋白多克隆抗体。2.如权利要求1所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒,其特征在于,所述负载物为胶乳粒子。3.如权利要求2所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒,其特征在于,所述胶乳粒子为羧基纳米胶乳粒子。4.如权利要求3所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒,其特征在于,所述羧基纳米胶乳粒子的径粒范围为40-500纳米。5.一种人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒的制作方法,其特征在于,分别制备试剂1和试剂2,具体包括如下步骤:试剂1:取纳米胶乳粒子溶液,用酸性缓冲液稀释后,加入活化剂活化,再加入待使用抗体的二抗进行连接反应,待连接反应结束后加入封闭剂、防腐剂、表面活性剂,然后用中性缓冲液稀释到工作体积,即制备得到含有二抗-胶乳的试剂1;试剂2:在中性缓冲液中加入无机盐,防腐剂、表面活性剂,过滤得到稀释液,用稀释液稀释待使用一抗到工作浓度,即制备得到试剂。6.如权利要求5所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒的制作方法,其特征在于,所述封闭剂为甘氨酸、防腐剂为Proclin300、表面活性剂为Tween20;所述酸性缓冲液和中性缓冲液均为磷酸缓冲液;无机盐为NaCl;所述乳胶粒子为羧基纳米胶乳粒子,活化剂为二环己基碳二亚胺,二抗为兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG。7.如权利要求6所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒的制作方法,其特征在于,试剂1和试剂2的最终试剂配方中各成分的质量体积比如下:试剂1:PH7.0,0.02M/L磷酸缓冲液二抗-胶乳0.01-0.05%g/L甘氨酸0.002M/LTween200.01%g/LProclin3000.1%g/L试剂2:PH7.5,0.02M/L磷酸缓冲液一抗按工作浓度稀释甘氨酸0.002M/LNaCl0.15M/LTween200.001%g/LProclin3000.1%g/L。8.权利要求5所述的人尿白蛋白胶乳增强二抗竞争免疫比浊检测试剂盒的制作方法,其特征在于,包括如下步骤:试剂1制备:取粒径100nm,10%浓度的羧基纳米胶乳粒子0.2ml,加入PH4.6,0.02M磷酸缓冲液0.8ml,加入20ul浓度为20mg/ml的二环己基碳二亚胺,37℃摇床保温反应20分钟活化后,加入...
【专利技术属性】
技术研发人员:文建新,刘株,漆乐新,
申请(专利权)人:长沙文瀚生物技术有限责任公司,
类型:发明
国别省市:湖南,43
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